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三角帆蚌外套膜细胞培养的改进及大型有核珍珠的培育: 三角帆蚌(Hypriosis cumingii),是我国最主要的淡水育珠蚌之一,其所产珍珠层厚,光泽鲜艳,细腻光滑,产珠质量上乘,是淡水珍珠生产用的首选材料。目前我国淡水珍珠产量处于世界领先水平,但销售额却只占18%,出...; 靳雨丽; 关键词：三角帆蚌细胞培养有核珍珠; 文献传递

三角帆蚌外套膜细胞培养的改进与大型有核珍珠的培育研究被引量：6: 2011年; 为得到大颗粒优质的淡水有核珍珠,进行了游离细胞植入法在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)内脏团插核育珠的研究。实验采用两种培养基(培养基1、2)进行外套膜外膜细胞的培养,对不同培养时间(2、4、6、12 h)的细胞活力进行检测,同时将处理过的珠核分别置于两组细胞悬液中共培养,6 h后采用内脏团插核手术,对500只三角帆蚌进行插核,并进行为期5个月的淡水有核珍珠生产实验。实验结果表明:细胞活力随培养时间逐渐增大,培养到6、12 h时,两种培养基中的细胞活力较2、4 h时均有显著提高(P<0.05),6 h与12 h相比差异不显著(P>0.05);细胞在两种培养基中分别培养,在培养2 h时两组间细胞活力没有显著差异(P>0.05),而在培养4、6、12 h时培养基2组的细胞活力显著高于培养基1组(P<0.05);培养基2组培养的细胞孵育珠核6 h后,贴附的细胞数量明显增多且分布均匀,插核5个月后,形成了包裹完整、具有光泽、沉积0.8 mm珍珠质的大型珍珠,而采用培养基1组培养的外套膜细胞进行珠核孵育而后插核,得到的素珠较多,且没有形成完整珍珠质包被的珍珠。实验表明改进后的培养基有利于三角帆蚌外套膜细胞培养,从而有利于内脏团有核珍珠的培育,这为进一步开展淡水贝类细胞培养的研究提供了实践基础,为大型有核珍珠的培育提供了依据。研究亮点:本文对体外培养三角帆蚌外套膜细胞的培养基进行改进,添加牛磺酸、Ca2+等适宜细胞生长以及珍珠质沉积的成分,促进了细胞的生长。利用改进后的游离细胞悬液与珠核共培养,并进行内脏团插核手术,5个月后得到了包被完整、具有光泽、沉积0.8 mm珍珠质的大型有核珍珠。; 靳雨丽施志仪李文娟郝莹莹强刚; 关键词：三角帆蚌细胞培养有核珍珠

维生素D_3对三角帆蚌外套膜细胞内Ca^(2+)浓度的影响被引量：2: 2011年; 采用胰酶消化法获得三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)外套膜细胞,用Fluo-3/AM荧光标记技术和激光共聚焦扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)检测外套膜内外表皮细胞在静息状态下细胞的游离Ca2+浓度及不同浓度维生素D3(VD3)孵育后的外套膜细胞的Ca2+的动态情况。结果表明,未添加VD3(1.25 mmol/L Ca2+)时,外套膜外表皮细胞的Ca2+荧光强度显著高于内表皮细胞内的Ca2+(P<0.05)。在添加不同浓度VD3后,内表皮细胞与外表皮细胞内Ca2+浓度变化趋势一致,表现为细胞内Ca2+沉积量的变化是随着VD3浓度的增大而增大,其中,对照组与添加50 IU/L组差异不显著(P>0.05);当添加浓度为100 IU/L时,与对照组和50 IU/L组差异显著(P<0.05);当添加组浓度达到500IU/L时,与前3组有显著差异(P<0.05);当添加的浓度增大到1 000 IU/L后与500 IU/L组差异不显著(P>0.05),但与其他组均存在显著差异(P<0.05)。本实验为外套膜细胞的钙代谢机制研究提供了实验依据。; 郝莹莹施志仪李文娟靳雨丽; 关键词：三角帆蚌激光共聚焦扫描显微镜

牙鲆碱性磷酸酶基因调控序列的功能分析及甲状腺激素对其调节作用被引量：1: 2010年; 为分析牙鲆碱性磷酸酶基因5'调控区和第一内含子调控序列的功能,本研究运用DNA重组技术将PCR扩增得到的牙鲆碱性磷酸酶基因的5′调控区序列、第一内含子序列及5′调控区和第一内含子串联序列分别插入启动子缺失的增强型绿色荧光蛋白表达载体pAcGFP1-1中,得到pAcGFP1-5′ALP、pAcGFP1-Intron1和pAcGFP1-AI报告基因表达载体。通过脂质体介导重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)并检测荧光信号。转染后细胞状态良好,24 h后发现,在倒置荧光显微镜下均可看到不同强度的绿色荧光信号,且荧光信号随时间的延长而增强,其中转染pAcGFP1-AI后的荧光信号强度最强。以上结果表明,牙鲆碱性磷酸酶基因5′调控区和第一个内含子序列均具有启动子活性,且第一内含子与5′调控区存在协同效应,两者协同能增强基因的表达。为了解甲状腺激素T3对调控序列启动子活性的调节作用,用不同浓度的T3处理转染的CHO细胞,24 h后发现加入50、75和100 nM的T3都增强了绿色荧光蛋白的表达,而且信号强度随T3浓度的增加而增强。这表明甲状腺激素T3对牙鲆碱性磷酸酶基因调控序列的启动子活性有一定的增强作用。本研究为深入阐明牙鲆碱性磷酸酶基因转录表达的分子机制提供了实验依据。; 施志仪胡燕林张俊玲靳雨丽; 关键词：牙鲆碱性磷酸酶第一内含子甲状腺激素T3

三角帆蚌外套膜培养的改进及大型有核珍珠的培育: 三角帆蚌(Hypriosiscumingii)，是我国最主要的淡水育珠蚌之一，其所产珍珠层厚，光泽鲜艳，细腻光滑，产珠质量上乘，是淡水珍珠生产用的首选材料。目前我国淡水珍珠产量处于世界领先水平，但销售额却只占18％，出现...; 靳雨丽; 关键词：三角帆蚌细胞培养有核珍珠; 文献传递

运用微电极技术测定三角帆蚌外套膜Ca^(2＋)流量的研究被引量：8: 2011年; Ca既是珍珠和贝壳中的主要组成成分（CaCO3占95%以上）,又是普遍存在的细胞内第二信使,在生物体内承担着非常重要生理功能。生物矿化的研究表明外套膜细胞在珍珠和贝壳生长中起着非常重要的作用[1,2],并且Ca^2＋在外套膜中也保持一个较高的水平^[3]。研究贝类Ca代谢，特别是外套膜组织的Ca^2＋跨膜转运，对进一步阐明贝壳以及珍珠形成机理，提高优质珠的产量都有着重要意义。; 李文娟施志仪郝莹莹韩健靳雨丽叶显峰; 关键词：三角帆蚌

三角帆蚌Nacrein基因克隆、蛋白提纯及其对珍珠晶体成型的影响被引量：7: 2010年; 为研究三角帆蚌Nacrein蛋白对珍珠晶体成型的影响,通过巢式及3′-RACE PCR对三角帆蚌基质蛋白Nacrein基因3′端序列进行克隆,得到850bp碱基片段,分析表明其与合浦珠母贝同源基因序列相似度为56%,与马氏珠母贝相似度为50%。试验通过水提法初步分离出珍珠质水溶性基质蛋白,并采用快速蛋白液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)分离出分子量约为60kD的Nacrein蛋白。此外,采用配对试验设计,对试验组外套膜组织培养样品加入Nacrein蛋白,研究Nacrein蛋白对晶体成型的影响,结果显示,加入Nacrein蛋白的试验组结晶成棱形状;而未加Nacrein蛋白的对照组结晶成雪花状,而且在晶体形成的时间上,试验组也较之对照组要早。研究表明,Nacrein蛋白能加速外套膜组织分泌的钙质形成棱状结晶,从而对晶体成型产生影响。本研究为进一步研究基质蛋白对生物矿化的作用提供试验依据,对珍珠培育生产有一定指导意义。; 韩健李文娟施志仪郝莹莹靳雨丽

三种不同因子对三角帆蚌外套膜细胞Ca^(2+)流动性的影响被引量：5: 2010年; 三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）是我国主要的育珠母蚌,其所培育出的珍珠色泽鲜艳、细腻光滑,因而成为目前淡水育珠生产中首选的育珠母蚌之一。蚌的外套膜是贝壳和珍珠形成的重要组织器官,有内外两层表皮细胞及其间的结缔组织构成。它对钙具有高度通透性,其上皮细胞具有通过细胞膜主动吸收Ca（2＋）和贮存Ca（2＋）的功能,并通过胞吐作用排出钙至外套膜外腔中,这些钙就是形成珍珠的基础。; 施志仪郝莹莹李文娟韩健靳雨丽; 关键词：三角帆蚌

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