陈自洪
- 作品数：45 被引量：92H指数：5
- 供职机构：广西壮族自治区人口和计划生育研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 细胞松弛素B(CB)对水牛卵母细胞玻璃化冷冻保存的影响被引量：7
- 2008年
- 研究主要探讨冷冻前细胞松弛素B(CB)预处理水牛MⅡ期卵母细胞对其冷冻效果的影响。以水牛MⅡ期的卵母细胞为材料,通过玻璃毛细管(GMP)和玻璃化冷冻液EDS33(16.5%EG+16.5%DMSO+Sucrose)对水牛MⅡ期的卵母细胞进行两步法玻璃化冷冻保存,即卵母细胞首先放入预平衡液(7.5%EG+7.5%DMSO+Sucrose)中平衡3 min,然后再移入玻璃化冷冻液中30 s后装管直接投入液氮。冷冻前卵母细胞随机分为2组,一组用7.5μg/mL CB预处理30 min,另一组未用CB预处理作对照组,然后都冷冻保存。解冻是在蔗糖浓度逐渐降低的解冻液中进行的。解冻后存活的卵母细胞进行孤雌激活,以分裂率和囊胚发育率作为评定卵母细胞冷冻效果的指标。结果发现,GMP组和GMP+CB组卵母细胞解冻后的存活率(88.89%、94.20%)和培养后发育到囊胚的比率(8.82%、14.55%)差异均不显著(P>0.05),但GMP组和GMP+CB组存活卵母细胞激活后的分裂率差异显著(32.69%、55.56%,P<0.05),所以细胞松弛素B预处理可以提高GMP冷冻卵母细胞的发育能力。
- 卞桂华陈自洪杨娟陆凤花石德顺
- 关键词：卵母细胞囊胚玻璃化冷冻
- 猪卵泡液与猪卵母细胞体外成熟及凋亡的关系
- 本研究就猪卵泡液对猪卵母细胞的体外成熟及凋亡进行了探索:试验一证明,体外培养46~48h,成熟液添加5﹪猪卵泡液能促进成熟,核成熟率为41.2﹪,成熟液添加20﹪猪卵泡液则抑制成熟,核成熟率为23.1﹪,二者差异显著;试...
- 文国艺陈自洪李日聪石德顺
- 关键词：卵母细胞卵泡液体外成熟存活率
- 文献传递
- 应用ICSI技术生产转基因水牛胚胎的初步研究被引量：3
- 2012年
- 本研究旨在探讨水牛精子完整质膜和破损质膜的方法对水牛单精子注射(ICSI)技术转基因效果的影响。水牛精子经冻融、Triton×-100、超声波3种方法破损精子质膜后与外源质粒DNA混合,采用ICSI的方法将基因转染后的精子注射到水牛体外成熟卵内,观察水牛ICSI卵激活后的发育状态和外源基因的表达效果。结果表明:精子质膜完整性实验中,冻融破损精子质膜组早期胚胎基因表达率为21.8%,显著高于活精子组的5.1%(P<0.01);冻融组与活精子组的卵裂率、囊胚发育率均无显著差异(P>0.05)。以冻融、Triton×-100、超声波3种方法破损精子质膜,冻融组的囊胚发育率(16.7%)最高,显著高于Triton×-100组(P<0.01)。同时,冻融组的早期胚胎基因表达率亦显著高于Triton×-100组和超声断尾组(60.3%vs.31.7%vs.18.2%,P<0.01)。上述结果说明,使用ICSI技术转外源基因可获得表达EGFP基因的水牛早期胚胎;冻融精子质膜破损法能有效破损精子质膜,有利于外源DNA与精子的结合,且提高转基因效率。
- 陈自洪孟凡丽刘玉兵陆凤花王丹崔奎青石德顺
- 关键词：ICSI转基因水牛
- 玻璃化冻融不同时期胚胎移植后临床妊娠结局分析被引量：4
- 2015年
- 目的比较玻璃化冻融卵裂期胚胎与囊胚期胚胎效果及移植后的临床妊娠结局。方法回顾分析2010年1-12月在广西人口和计划生育研究中心玻璃化冷冻的489周期的临床妊娠及分娩情况,其中卵裂期胚胎移植93周期,囊胚期胚胎移植396周期。结果囊胚期移植的种植率显著高于卵裂期的种植率,差异有统计学意义(P<0.05);卵裂期与囊胚期的胚胎复苏率、临床妊娠率、异位妊娠率、流产率、抱婴率等差异均无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冻融卵裂期胚胎和囊胚期胚胎都有很好的冷冻效果和临床结果,但囊胚期的种植效果优于卵裂期。
- 公方强牛向丽禤丽陈自洪黄华方伟芬孙燕萍
- 关键词：玻璃化冷冻卵裂期胚胎囊胚临床妊娠
- 应用ICSI-Tr技术生产转Fat-1基因水牛胚胎的初步研究
- 2014年
- 肉质的改善是水牛未来育种的重要方向,为提高水牛肉中n-3多不饱和脂肪酸的含量,本研究探讨了应用ICSI介导技术(ICSI-Tr)生产转Fat-1基因水牛胚胎的可行性。将水牛组织性启动子PGK1、目的基因Fat-1和标记基因EGFP表达盒依次连接,成功构建获得转基因载体pPGK1-FAT1-CMV-EGFP。随后以酶切线性化的转基因载体质粒DNA为素材,探讨了5、10、25、50μg/m L和70μg/mL等5个不同浓度梯度对pPGK1-FAT1-CMVEGFP转基因效果的影响。结果表明:在不同浓度DNA试验组应用ICSI-Tr介导技术均能获得表达EGFP的转基因水牛胚胎。其中,25μg/m L为适宜浓度。
- 陈自洪刘玉兵王丹孟凡丽陆凤花刘庆友石德顺
- 关键词：水牛
- 水牛卵母细胞去核方法的比较被引量：7
- 2006年
- 水牛卵母细胞体外成熟22 h后,分别用盲吸法、点击法和纺锤体成像系统(Spindleview System)去核。结果,三者的去核率分别为65．1％、81．8％和95．0％,差异极显著(P< 0．01)。以水牛胎儿成纤维细胞为供体,通过核移植构建的重构胚的融合率、分裂率和囊胚发育率, 在上述3种方法之间均没有显著差异(P>0．05)。认为点击法是一种较为简单、实用和有效的去核方法。
- 陈自洪杨素芳谢英李日聪韦精卫石德顺
- 关键词：水牛卵母细胞去核核移植
- ICSI介导生产转基因牛胚胎影响因素的研究被引量：1
- 2014年
- 采用牛体外成熟卵母细胞和冷冻解冻的精子为材料,以pEGFP-N1为模式基因,探讨DNA浓度、精子质膜破损方法、注射台温度对牛精子胞质内注射(ICSI)介导转基因效果的影响。结果表明:线性pEGFPN1质粒DNA浓度为5μg/mL、10μg/mL两组的早期胚胎发育率显著高于50μg/mL组(19.8%,16.7%VS 7.9%,p<0.05)。以冻融、TritonX100、超声波断尾三种方法破损精子质膜,冻融组的囊胚发育率(24.7%)最高,且冻融组的早期胚胎基因表达率极显著高于超声断尾组(41%VS 20.5%,p<0.01);当分别在25℃、38℃的注射台进行显微注射时,两组之间胚胎的囊胚率无显著差异(p>0.05),但二者之间胚胎的基因表达率差异显著(46.83%VS 28.57%,p<0.05)。以上结果表明:(1)牛精子转染外源GFP基因的浓度不宜过高,转染高浓度的DNA会影响胚胎发育;(2)精子质膜是阻碍外源DNA与牛精子相结合的主要因素,将精子冻融处理可有效破损其质膜,利于精子与外源DNA的结合,从而提高ICSI介导转基因效率;(3)25℃和38℃热台温度对牛ICSI胚胎的早期发育无影响,但25℃热台温度可提高牛ICSI介导转基因的效果。
- 孟凡丽陈自洪陆凤花刘庆友罗婵张顺王丹石德顺
- FVB小鼠卵母细胞孤雌激活的研究
- 目的 本研究比较几种化学激活剂对FVB小鼠卵母细胞孤雌激活的影响.方法 通过常规小鼠超数排卵方案获得FVB小鼠卵母细胞,分别用3种不同方法进行激活:①Ion+6-DMAP组:先用含5μmol/L离子霉素(lon)的CZB...
- 陈自洪祝晓丽乃东红牛向丽张海英
- 水牛受精卵胞质内注射转基因的初步研究(英文)
- 2012年
- [目的]旨在探讨通过向水牛受精卵胞质内注射外源DNA实现转基因的可行性。[方法]水牛卵母细胞体外成熟20～22h后随机分为2组,①在体外受精7～10或18～20h后向卵胞质内注入约7.5pL50μg/ml含线性EGFP片段的DNA溶液;②则分别注入单个精子与约7.5pL50μg/ml含线性EGFP片段的DNA混合物,观察外源基因在胚胎发育过程中的表达情况。[结果]受精卵胞质内注射的早期胚胎基因表达率、囊胚基因表达率与ICSI-Tr差异不显著(P>0.05),且IVF7～10h时注射的分裂率、早期胚胎基因表达率均显著高于18～20h(P<0.05)。[结论]水牛IVF受精卵胞质内注射外源基因能获得转基因胚胎,且IVF后7～10h注射的效果优于IVF后18～20h注射。
- 陈自洪崔奎青孟凡丽刘玉兵王丹陆凤花石德顺
- 关键词：水牛受精卵转基因
- 不同激活方法对水牛ICSI介导转基因效果的影响被引量：1
- 2012年
- 本研究探讨了不同激活方法对水牛ICSI介导转基因效果的影响。水牛体外成熟卵进行ICSI介导转基因(ICSI-mediated gene transfer,ICSI-Tr)操作后,先用5μmol/L的离子霉素(ionomycin,Ion)激活处理5min,然后分成3组,再分别用10μg/mL放线菌酮(cycloheximide,CHX)培养5h(CHX5h组)、10μg/mLCHX培养3h后再用2mmol/L的二甲氨基嘌呤(6-DMAP)培养2h(CHX3h-DMAP2h组)或用培养液(CM)培养3h后再用2mmol/L6-DMAP培养2h(CM3h-DMAP2h组)。结果显示,CHX5h组的分裂率、早期胚胎基因表达率和囊胚发育率最高,且显著高于CM3h-DMAP2h组(66.7%比49.5%,p<0.05;66.7%比40.0%,p<0.01;22.2%比9.9%,p<0.05)。ICSI18h后检查原核形成率,发现CHX5h和CHX3h-DMAP2h处理组的完整精子头百分率显著低于CM3h-DMAP2h处理组(p<0.05),2原核(pronucleus,PN)百分率则显著提高(42.4%比23.8%,p<0.05;44.6%比23.8%,p<0.01)。以上结果表明,在水牛ICSI介导转基因时,Ion联合CHX较Ion联合6-DMAP激活重构胚效果好。
- 陈自洪韦珏孟凡丽陆凤花崔奎青石德顺
- 关键词：水牛
