陈碧华
- 作品数：2 被引量：23H指数：2
- 供职机构：复旦大学附属中山医院实验研究中心更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 膜-细胞骨架联接分子ezrin对肝癌细胞系生长和侵袭能力的影响被引量：5
- 2006年
- 目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白ezrin在肝细胞肝癌生长和转移过程中的作用。方法分别应用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测ezrin和骨架蛋白在不同转移潜能肝癌细胞系中的表达。选取高转移潜能SF7721(SMMC-7721经转基因后稳定表达肝细胞生长因子．从而获得高转移潜能的细胞系)和 MHCC97-H细胞系为研究对象,通过RNA干扰技术下调SF7721和MHCC97-H细胞系中ezrin蛋白的表达,观察其运动和侵袭能力的变化:通过四甲基偶氮唑盐检测细胞增殖能力变化;电子显微镜观察细胞伪足,Transwell检测细胞的运动侵袭能力。结果免疫荧光显示ezrin和骨架蛋白表达于细胞质,且双色荧光证实两者存在共表达;高转移潜能细胞系SF7721,MHCC-I、MHCC97-H ezrin和骨架蛋白的表达明显高于低转移潜能细胞系SMMC-7721、 Hep3B、HepG2细胞(x2=13．277,P=0．010; x2=21．815,P<0．01)。β-肌动蛋白在高低转移潜能细胞系的表达差异无统计学意义。通过RNA干扰技术抑制ezrin蛋白表达后,SF7721和MHHC97-H的细胞的增殖和侵袭能力均显著下降。结论 ezrin和骨架蛋白的过表达与肝癌的转移潜能相关,通过下调ezrin的表达可明显抑制肝癌细胞系SMMC-7721和MHCC97-H细胞的增殖和运动侵袭能力。
- 张岩胡美玉陈碧华王志军吴伟忠周康刘康达
- 关键词：细胞支架蛋白质类
- 体外RNA干扰下调ezrin表达对肝癌细胞生长和运动能力的影响被引量：18
- 2006年
- 目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白ezrin对肝癌生长和运动转移能力的影响。方法选取4株肝癌细胞系(SF/SMMC7721、MHCC97-H、MHCC-1和HepG2)作为研究材料,针对ezrin基因设计小干扰RNA(siRNA)并通过脂质体转染入细胞。分别通过荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹验证siRNA对ezrin在基因和蛋白水平的下调及下调作用随转染时间的变化。根据Western印迹的结果选取ezrin蛋白表达最低的时间点检测干扰后肝癌细胞生物学行为的改变。运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测肝癌细胞增殖能力的变化;流式细胞仪检测细胞周期;电子显微镜观察细胞伪足的形态和数量改变;transwell实验检测肝癌细胞运动和转移能力的变化。结果荧光实时定量PCR和Western印迹显示ezrin siRNA对ezrin在基因和蛋白水平均有显著的下调作用。下调ezrin蛋白可显著减慢4株肝癌细胞的生长速度,处于分裂期的肝癌细胞比例明显下降(SF/SMMC7721:28·07%下降到21·53%;MHCC97-H:24·94%下降到13·92%;MHCC-1:19·30%下降到13·2%;HepG2:7·73%下降到4·24%)。肿瘤细胞的运动侵袭能力下降,细胞伪足变短,且伪足的形成数量显著减少(SF/SMMC7721:20·8个/细胞±3·0个/细胞与13·2个/细胞±2·4个/细胞,P<0·05;MHCC97-H:18·4个/细胞±2·7个/细胞与14·0个/细胞±2·9个/细胞,P<0·01;MHCC-1:22·6个/细胞±3·5个/细胞与13·3个/细胞±1·9个/细胞,P<0·01;HepG2:31·0个/细胞±2·9个/细胞与17·8个/细胞±2·3个/细胞,P<0·01;每株计数5个细胞)。穿过人工基底膜的细胞数量也明显减少(SF/SMMC7721:49·9个±7·7个与31·9±5·2个,P<0·05;MHCC97-H:58·5个±4·2个与33·0个±3·3个,P<0·01;MHCC-1:57·6个±6·1个与28·3个±3·4个,P<0·01;HepG2:37·3个±3·0个与25·3个±2·3个,P<0·01;每株8个视野)。结论ezrin在肝癌生长和侵袭转移过程中发挥重要的作用,有可能成为抑制肝癌复发转移的关键分子。
- 张岩胡美玉陈碧华王志军查锡良刘康达
- 关键词：肿瘤转移EZRIN
