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LIN28基因对人胰腺癌细胞PANC1和SW1990增殖和迁移的影响被引量：3: 2015年; 该文目的为研究LIN28基因对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响,揭示其在胰腺癌发生发展中的作用。实验发现,胰腺癌细胞中LIN28的表达模式与细胞增殖和迁移能力有关,将干扰质粒LIN28 sh RNA转染入LIN28高表达的PANC1细胞,将过表达载体3×Flag-LIN28转染入低表达的SW1990细胞中,采用RT-PCR和Western blot实验验证基因沉默或过表达的效果,并运用CCK-8法分析细胞的增殖能力并绘制细胞生长曲线,Transwell实验检测细胞迁移率。结果显示,下调LIN28后,PANC1细胞中LIN28基因的表达量明显降低,细胞增殖减慢,迁移减少;而上调LIN28后,SW1990细胞中LIN28基因的表达量明显增高,细胞增殖加快,迁移增加。由此说明,沉默LIN28基因可以抑制PANC1细胞增殖和迁移,过表达LIN28基因可以促进SW1990细胞增殖和迁移,这为阐明LIN28在胰腺癌演化过程中的机制奠定了实验基础。; 卞石惠李杰龚爱华陈晖蒋小猛张尤历徐岷; 关键词：胰腺癌细胞增殖细胞迁移

靶向Lin28B基因沉默对胰腺癌细胞增殖的影响被引量：1: 2015年; 目的探讨靶向Lin28B基因沉默对细胞增殖的影响。方法设计Lin28B及GFP短发夹核糖核酸(shRNA)序列,装入Tet-on-pLKO-puro质粒,进行慢病毒包装,感染胰腺癌细胞Panc1,嘌呤霉素筛选并培养稳定干扰细胞株。实验组为Panc1-Tet-on-pLKO-sh-Lin28B;对照组为Panc1-Tet-on-pLKO-sh-GFP。筛选强力霉素最佳诱导浓度并诱导干扰序列表达,Western blot检测干扰效率,细胞增殖与活性实验CCK8检测沉默Lin28B对Panc1细胞增殖的影响。结果构建的Tet-on-pLKO-sh-Lin28B慢病毒可显著抑制Panc1细胞内Lin28B的表达。与对照组Panc1-Tet-onpLKO-sh-GFP相比,实验组Panc1-Tet-on-pLKO-sh-Lin28B的增殖速度减缓(P<0.05)。结论成功筛选出沉默Lin28B的稳定干扰细胞株,沉默Lin28B对胰腺癌细胞的增殖有抑制作用,为进一步研究Lin28B基因的功能或基因治疗提供有用技术。; 张尤历陈晖翁星月蔡菁殷文皓周冰洁卞石惠龚爱华徐岷; 关键词：慢病毒胰腺癌

miR-15a和miR-16通过调控bcl-2蛋白的表达逆转结肠癌细胞的耐药性被引量：8: 2014年; 目的研究miR-15a和miR-16靶向调控bcl-2的表达对结肠癌细胞耐药性的逆转作用。方法将miR-15a和miR-16模拟物或抑制物转染结肠癌长春新碱（VCR）敏感细胞株HCT8或耐药细胞株HCT8／VCR，采用实时荧光定量PCR法检测miR-15a和miR-16的表达，Westernblot法检测bcl-2和P糖蛋白（P—gP）蛋白的表达，细胞计数盒8（CCK8）法检测不同浓度VCR对HCT8和HCTS／VCR细胞生长的抑制作用。结果实时荧光定量PCR法检测结果显示，空白对照组、阴性对照组和转染miR-15a模拟物组HCT8／VCR细胞中miR-15a的相对表达量分别为1．00、0．87±0．24和223．44±59．07，转染模拟物后，miR-15a的相对表达量明显升高（P〈0．001）；空白对照组、阴性对照组和转染miR-16模拟物组HCT8／VCR细胞中miR-16的相对表达量分别为1．00、0．66±0．19和107．32±22．58，转染模拟物后，miR-16的相对表达量明显升高（P〈0．001）。Western blot法检测结果显示，空白对照组、阴性对照组、转染miR-15a模拟物组和转染miR-16模拟物组HCT8／VCR细胞中bcl-2蛋白的相对表达量分别为1．00、0．97±0．02、0．51±0．06和0．65±0．03，转染模拟物后，bcl-2蛋白的表达下调（P〈0．05）。而P-gp蛋白的表达在转染模拟物后没有明显变化。CCK8法检测结果显示，经1、5、25和125斗g／mlVCR处理后，空白对照组、阴性对照组、转染miR-15a模拟物组和转染miR-16模拟物组HCTS／VCR细胞存活率的变化趋势基本-致，转染模拟物后，HCTS／VCR细胞的存活率明显降低（P〈0．05）。实时荧光定量PCR法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞中miR．15a和miR．16的表达明显降低（P〈0．001）。Western blot法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞bcl-2蛋白的表达明显上调（P〈0．05），而P-gP蛋白的表达没有明显变化。CCK8法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞的存活率明显高于空白对照�; 徐岷周冰洁王国英王国乙翁星月蔡菁李萍陈晖蒋小猛张尤历; 关键词：结肠肿瘤肿瘤耐药性 BCL-2

蒿属香豆素对胰腺星状细胞的氧化、活化及纤维化的影响被引量：1: 2015年; 目的:探讨中药茵陈蒿的主要成分蒿属香豆素对大鼠胰腺星状细胞(PSCs)氧化、活化及细胞外基质沉积的影响。方法:分离PSCs并培养,免疫荧光法鉴定细胞,培养并传代至第3-5代后进行实验,分成空白组、丹酚酸B组、不同浓度香豆素组。分别培养24、48h后MTT法检测PSCs增殖情况。48h后通过比色法检测各组细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的变化。免疫荧光、Western blot法检测各组平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原表达的情况。结果:与空白组相比,蒿属香豆素组的细胞增殖水平、MDA水平、α-SMA、Ⅰ型胶原的表达明显降低,SOD水平显著增高(P<0.05)。结论:蒿属香豆素能有效降低PSCs的氧化应激水平,抑制其活化进而减轻纤维化。; 张尤历蔡菁赵义陈晖王国英王国乙李萍周冰洁翁星月徐岷; 关键词：氧化应激胰腺星状细胞纤维化

阿司匹林对胰腺癌细胞上皮间质转化和吉西他滨耐药性的影响被引量：1: 2014年; 目的探讨阿司匹林对人胰腺癌细胞上皮间质转化(EMT)和吉西他滨耐药性的影响。方法应用MTT法检测阿司匹林(0、1、2、5、10mmol/L)对三种胰腺癌细胞(SW1990、PATU-8988、PANC-1)生存率的影响以及阿司匹林(2mmol/L)与吉西他滨(0.05mg/L)联合用药对SW1990细胞增殖的影响。平板克隆实验检测药物对克隆形成能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡情况;细胞划痕实验观察细胞的迁移能力;Western blot检测凋亡相关蛋白及EMT相关蛋白表达水平。结果(1)与对照组相比,低浓度阿司匹林(1、2mmol/L)对PATU-8988、PANC-1有生长抑制作用(P<0.05、P<0.01);高浓度阿司匹林(5、10mmol/L)对SW1990、PATU-8988、PANC-1均有较明显的生长抑制作用(P<0.05、P<0.01)。(2)与单药组相比,联合用药组中SW1990细胞增殖率显著降低,克隆形成率显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05),细胞中的Bcl-2蛋白表达水平显著降低。(3)与单药组相比,联合用药组细胞迁移率显著降低,细胞中的EMT相关蛋白E-钙黏蛋白表达显著升高,波形蛋白表达显著降低。结论阿司匹林有抑制胰腺癌细胞增殖的作用,并且能增强细胞对吉西他滨的敏感性,同时逆转胰腺癌细胞EMT。; 张尤历翁星月卞石惠周冰洁陈晖李萍蔡菁蒋小猛黄红梅徐岷; 关键词：胰腺癌阿司匹林上皮间质转化吉西他滨

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陈晖

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