陈惠玲
- 作品数：5 被引量：23H指数：2
- 供职机构：深圳市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 深圳市手足口病重症感染性克隆的构建和分析
- 2012年
- 目的构建肠道病毒71型(EV71)的感染性克隆,为EV71致病机理的研究和药物的开发建立技术平台。方法选取临床手足口重症儿童粪便样品,经荧光定量PCR检测为阳性,RT-PCR方法扩增出EV71全基因组,通过TA克隆的方法连接到TOPO-XL-PCR载体中,应用T7聚合酶系统将线性化的EV71DNA序列体外转录成RNA,转染人横纹肌肉瘤细胞系RD-A细胞,病毒传代并观察病变,通过间接免疫荧光实验进一步鉴定,获得的感染性克隆进行全基因组测序和序列比对分析。结果 RT-PCR可以获得EV71全长约7.5kb的DNA片段,体外转录并转染后3～5d可观察到典型的肠道病毒致细胞病变,免疫荧光可看到特异标记,序列比对为C4a亚型的EV71病毒。结论构建出具有感染性的EV71全长cDNA克隆,在分子生物学水平上有利于深入研究EV71的致病机制和毒力基因、患者抗体的中和特性、疫苗和药物的效力评估与开发等。
- 罗敏陈惠玲杨洪张海龙冼慧霞张仁利
- 关键词：手足口病重症感染性克隆
- 2010年深圳地区诺如病毒的基因分型被引量：17
- 2012年
- 了解2010年深圳地区诺如病毒的基因型别及分子流行病学特点。方法用诺如病毒特异性引物(GI-SKF/GI-SKR、COG2F/G2-SKR),通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行诺如病毒核酸扩增,阳性产物回收纯化并测序,用Clustal W和MEGA4.0生物软件对诺如病毒序列进行序列比对和系统进化分析。85份阳性标本中有79株诺如GⅡ型和6株诺如GⅠ型,其中55株为GⅡ/4(2006b)型,16株为GⅡ/4(2008variant)型,2株为GⅡ/1型,4株为GⅡ/5型,2株为GⅡ/11型,1株为GI/4型,2株为GI/5型,3株为GI/6型。2010年深圳地区诺如病毒的主要型别是GI和GⅡ,并且以GⅡ/4型为主,流行优势株为GⅡ/4(2006b)。
- 吴微张宏斌张海龙杨洪陈惠玲舒柏华何雅青
- 关键词：诺如病毒流行病学系统进化树
- 深圳市环境水体肠道病毒监测被引量：1
- 2012年
- 目的:研究肠道病毒在环境水体中的分布情况。方法:本次研究选择了五个采水点,从2010年4月-2011年12月连续每月采样,利用实时荧光RT-PCR检测水样中的肠道病毒。结果:105份水样中,肠道病毒检测呈阳性的有72份,占68.57%;各采水点之间肠道病毒的检出率无明显差异。结论:水体中肠道病毒广泛存在,有必要加强水环境中肠道病毒的监测并进一步研究水中肠道病毒对公众健康带来的风险。
- 陈惠玲杨洪陈应坚汪东篱舒柏华何雅青
- 关键词：环境水体肠道病毒荧光RT-PCR
- 手足口病病毒分离方法的研究
- 目的：探讨影响手足口病病毒分离培养的可能因素以及方法的改进。方法：取手足口病患儿的粪便、肛拭子或脑脊液、疱疹液、咽拭子，其中以粪便为主，经Hank’s平衡缓冲液(HBSS)重悬震荡后，离心取上清液接种于横纹肌肉瘤传代细胞...
- 罗敏杨洪张海龙冼慧霞陈惠玲吴微姚相杰何雅青
- 关键词：手足口病病毒分离细胞病变效应
- 文献传递
- 手足口病病毒分离方法研究被引量：5
- 2012年
- 目的探讨影响手足口病病毒分离培养的可能因素以及方法的改进。方法取手足口病患儿的粪便、肛拭子或脑脊液、疱疹液、咽拭子,其中以粪便为主,经Hank’s平衡缓冲液(HBSS)重悬震荡后,离心取上清液接种于横纹肌肉瘤传代细胞(RD-A细胞),二次传代后通过肠道病毒致细胞病变效应(CPE)分析及EV71、CA16及肠道病毒通用试剂盒进行荧光定量PCR的方法来鉴定病毒分离效果。结果 RD-A细胞能够有效的分离EV71、CA16和其他肠道病毒,采样时间在发病3日内,病毒分离效果达到66.7%,3日以上,病毒分离效果仅有29.1%。未添加万古霉素、阿米卡星和制菌霉素的病毒分离,污染率达到75%,分离效率为13.6%,添加三种抑制细菌和霉菌的抗生素后,污染率达到3.93%,分离效率达到54.9%。结论采样时间在发病3日内,有效的抑制细菌及霉菌的生长,合理的细胞接种密度可以明显提高病毒的分离培养效率。
- 罗敏杨洪张海龙冼慧霞陈惠玲吴微姚相杰何雅青
- 关键词：手足口病病毒分离细胞病变效应
