陈宏新
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
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- 柯萨奇病毒B3型VP1基因在酿酒酵母中的表达被引量：2
- 2005年
- 目的在酿酒酵母AH109中表达柯萨奇病毒B3型VP1基因,并检测VP1蛋白对报告基因的转录自激活作用。方法用乙酸锂法将重组柯萨奇B3病毒VP1基因的细菌-酵母菌穿梭载体pGBKT7-VP1转化酵母菌。通过表型鉴定、PCR法验证质粒导入宿主菌后,Westernblotting验证VP1蛋白的表达,最后经营养缺陷培养基和酶底物X--αGal反应检测VP1基因对报告基因的转录自激活作用。结果表型鉴定和PCR法均证实pGBKT7-VP1质粒转入酵母菌成功,Westernblotting证实AH109能表达VP1蛋白,营养缺陷型培养基和酶底物X--αGal反应结果显示VP1蛋白对3种报告基因均无转录自激活作用。结论柯萨奇病毒B3型VP1蛋白可作为酵母双杂交系统的诱饵蛋白,为筛选与其相互作用的宿主细胞蛋白提供了基础。
- 黄孝天陈宏新陈洪吴斌贝刘晶星
- 关键词：柯萨奇病毒VP1基因
- 婴幼儿呼吸道合胞病毒主动免疫的新进展
- 2003年
- 在婴幼儿中,呼吸道合胞病毒是最重要的呼吸道感染病毒之一。本文讨论该病毒候选疫苗的研制和开发,包括PFP-1、PFP-2和BBG2Na亚单位疫苗以及冷传代/热敏感突变株等。
- 陈宏新刘晶星
- 关键词：婴幼儿呼吸道合胞病毒主动免疫基因疫苗病毒学免疫应答
- 柯萨奇病毒激活ERK信号途径的初步研究
- 2004年
- 柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3,CVB3)是引起病毒性心肌炎和扩张性心肌病的主要病原体.CVB3在其感染过程中致细胞产生病变效应,直至死亡.CVB3感染也能引起细胞凋亡[1],但其病变机制尚不清楚.胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)是促分裂原活化蛋白激酶家族中一类,参与了细胞生长、转化、分化以及细胞的生存和死亡等功能的调节[2].ERK途径参与HIV-1等多种病毒基因的表达和复制[3].本研究利用CVB3感染HeLa细胞后以磷酸化ERK1/2说明ERK1/2的活化状况,初步了解CVB3感染与宿主细胞ERK1/2的关系,为进一步阐明CVB3感染后的信号传导途径奠定基础.
- 陈宏新陈洪陈淑芸刘晶星
- 关键词：柯萨奇病毒细胞生长CVB3病毒感染
- 哺乳动物的促分裂原活化蛋白激酶信号途径被引量：2
- 2004年
- 促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是一类表达于所有真核细胞的丝氨酸/苏氨酸激酶,能够被诸如细胞因子、生长因子、神经递质、激素、细胞应急以及细胞粘附等各种刺激因素激活。MAPK途径的基本组合包括MAPK、MAPK激酶(MKK)和MAPK激酶激酶(MKKK)三种保守的成分,由此建立一个连续的激活途径。哺乳动物的MAPK可以大致归纳为5类:ERK1/2(MAPK^(erk1/2))、P38(MAPK^(p38))、JNK(MAPK^(jnk))、ERK3/4(MAPK^(erk3/4))和ERK5(MAPK^(erk5))。MAPK家族在各种细胞活动中具有重要作用,如增殖、分化、发育、转化及凋亡等。文章讨论了哺乳动物MAPK的功能和调节。
- 陈宏新刘晶星
- 关键词：促分裂原活化蛋白激酶信号途径哺乳动物真核细胞细胞外信号
- 柯萨奇-腺病毒受体基因的原核表达和多克隆抗体制备被引量：2
- 2004年
- 目的利用原核基因工程克隆表达柯萨奇-腺病毒受体(CAR)胞外段,并制备多克隆抗体。方法从HeLa细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得编码CAR胞外段的cDNA,与pQE31质粒连接,构建表达型重组质粒,测序证实后诱导表达,经Ni-NTA柱亲和纯化后,免疫新西兰兔,ELISA检测抗血清滴度。结果重组质粒转化的大肠杆菌M15经IPTG诱导表达及亲和纯化后得到滴度较高的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot显示其分子量约为26 kd,具有特异的抗原性,主要以包涵体形式存在于菌体中。纯化的融合蛋白免疫新西兰兔后产生的抗体,经ELISA检测抗体滴度>1:32 000。结论CAR胞外段基因的克隆表达和多克隆抗体的制备,为进一步研究该受体在以腺病毒载体为基础的基因治疗中的作用及柯萨奇病毒的致病机制奠定了基础。
- 吴赟陈洪黄孝天陈宏新刘晶星
- 关键词：胞外段腺病毒受体多克隆抗体基因新西兰兔
- 重组柯萨奇B3病毒VP1基因的穿梭表达载体的构建及鉴定被引量：3
- 2004年
- 目的 构建重组柯萨奇B3病毒VP1基因的细菌 -酵母菌穿梭表达载体pGBKT7-VP1。方法 用PCR从质粒pT7-CV3- 5 5中扩增柯萨奇B3病毒VP1基因 ,经NdeⅠ和PstⅠ双酶切后 ,定向插入细菌 -酵母菌穿梭表达载体 pG BKT7中完成质粒构建。用酶切和测序鉴定构建质粒。结果 限制性内切酶酶切和序列分析表明VP1巳成功插入pGBKT7载体的多克隆位点 ,克隆方向和阅读框与病毒VP1基因一致。结论 本研究成功构建VP1基因的细菌 -酵母菌穿梭表达载体 pGBKT7-VP1,为研究VP1蛋白与其宿主细胞之间的相互作用奠定了基础。
- 黄孝天陈洪吴赟陈宏新刘晶星
- 关键词：VP1基因克隆
- CVB3m激活胞外信号调节激酶(ERK)信号途径被引量：1
- 2004年
- 目的 了解细胞外信号调节激酶 1和 2 (ERK1/2 )途径在柯萨奇病毒B3感染中的作用。方法 感染复数MOI =10的CVB3m或PBS感染生长停滞的HeLa细胞 1小时 ,在指定时间收集细胞裂解液后应用免疫印迹分析感染后不同时间ERK1/2的磷酸化以了解Raf/MEK/ERK途径的活化。结果 CVB3m感染引起HeLa细胞ERK1/2的二次激活。第一次激活在感染后 10min即可检出 ,持续至感染后 1h ,随后P -ERK1/2水平降至基础。在感染后 7h再次激活并一直持续激活至感染后 2 4h ,在感染后 12h达到峰值。结论 CVB3m感染二次激活ERK1/2途径 ,即早期短暂激活和晚期的持续激活。
- 陈宏新黄孝天吴珺陈淑芸陈洪刘晶星
- 关键词：柯萨奇病毒细胞外信号调节激酶
