郭国祥
- 作品数：9 被引量：2H指数：2
- 供职机构：福建医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金福建省教育厅科技项目福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向Ang2的RNAi慢病毒载体的构建及其对恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的 构建携带促血管生成素2-小干扰RNA（Ang2-siRNA）慢病毒载体,观察其对恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因表达的干扰作用.方法 将经XbaⅠ酶切电泳鉴定的带有加强绿色荧光蛋白的转移质粒（pNL-EGFP）载体与pSilencer 1.0-U6启动子-促血管生成素2-小干扰RNA（pSilencer 1.0-U6-Ang2-siRNA）重组质粒连接,产生加强绿色荧光蛋白的转移质粒-U6启动子-促血管生成素2-Ⅰ（pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅰ）、加强绿色荧光蛋白的转移质粒-U6启动子-促血管生成素2-Ⅱ（pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅱ）慢病毒转移质粒,电泳筛选阳性克隆,测序鉴定.用连接成功的慢病毒转移质粒、水疱性口炎病毒G蛋白（pVSVG）包膜质粒和pHelper包装质粒共转染293T细胞,产生pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅰ、pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅱ慢病毒.收集病毒上清,测定病毒滴度.将收集的病毒上清感染恶性黑色素瘤细胞,通过实时荧光定量RT-PCR测定抑制Ang2基因表达的效率.结果 酶切电泳与测序鉴定证实成功构建了Ang2-SiRNA慢病毒载体,293T细胞测定病毒原液滴度为8.0×103/ml.实时荧光定量RT-PCR结果显示：Ang2-siRNA慢病毒载体感染恶性黑色素瘤细胞,抑制了恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因的表达（P＜0.05）.结论 成功构建了Ang2-SiRNA慢病毒载体,体外研究显示Ang2-SiRNA慢病毒载体能抑制恶性黑色素瘤细胞中Ang2 mRNA的表达,为下一步进行裸鼠恶性黑色素瘤移植瘤生长的干预实验奠定基础,为肿瘤的基因治疗提供实验依据.
- 刘照亮王彪郭国祥单秀英王美水庄福连蔡传书张明凤张彦定
- 关键词：RNA干扰ANG2慢病毒载体恶性黑色素瘤
- Tie2基因的RNAi慢病毒载体的构建及其干预恶性黑色素瘤细胞的体外研究
- 目的:构建并鉴定携带Tie2-SiRNA慢病毒载体,观察其对恶性黑色素瘤细胞的干扰作用,为将来进一步进行抑制肿瘤生成的动物实验研究奠定基础,为肿瘤的基因治疗提供实验依据。方法:将pSilencer 1.0-U6-Tie2...
- 刘照亮王彪郭国祥单秀英王美水庄福连病理科张声
- 关键词：恶性黑色素瘤细胞慢病毒载体体外研究
- 文献传递
- pSilencer 1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒的构建及其在体外人脐静脉内皮细胞中抑制Ang2/Tie2基因的表达
- 2011年
- 目的探讨应用RNA干扰(RNAi)技术抑制Ang2、Tie2基因的表达情况,为进一步研究其在体外抑制血管生成以及抑制肿瘤血管生成的动物实验研究奠定基础。方法构建pSilencer 1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒各2条并予以鉴定。用pSilencer 1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法检测各组HUVECs中Ang2及Tie2的蛋白及mRNA的表达状况。结果成功构建pSilencer 1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒各2条,用其转染HUVECs后,免疫细胞化学染色和RT-PCR检测结果显示,Ang2、Tie2在蛋白和mRNA的表达水平均受到明显抑制(P<0.05),并且siRNA的2条重组质粒之间均差异无统计学意义(P>0.05)。结论 pSilencer1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA在体外能够抑制HUVECs的Ang2和Tie2的蛋白及mRNA的表达。
- 王彪郭国祥林菊丽单秀英张声鲁开化
- 关键词：促血管生成素2质粒载体脐静脉内皮细胞
- RNAi技术抑制恶性黑色素瘤细胞Ang2基因表达
- 目的:利用已构建的携带Ang2-SiRNA慢病毒载体感染恶性黑色素瘤细胞,观察其对恶性黑色素瘤细胞Ang2基因的干扰作用,为将来进-步进行裸鼠移植瘤的抑制实验奠定基础,为肿瘤的基因治疗提供实验依据。方法:将已构建的携带A...
- 郭国祥王彪刘照亮单秀英王美水庄福连张声
- 关键词：恶性黑色素瘤细胞慢病毒载体基因表达
- 文献传递
- Ang2、Tie2基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定
- 目的构建并鉴定Ang2、Tie2基因RNA干扰慢病毒表达载体,为进-步进行体外肿瘤细胞的干预实验和对裸鼠移植瘤的抑制实验奠定基础。方法 1、以Ang2、Tie2的mRNA已知序列为靶点,构建pSilencer1.0-U6...
- 单秀英王彪刘照亮郭国祥庄福连
- 关键词：慢病毒表达载体RNA
- 文献传递
- Ang2基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的构建促血管生成素(Ang)2基因的RNAi慢病毒表达载体,并鉴定其正确性。方法将经XbaⅠ酶切电泳鉴定的pSilencer 1.0-U6-Ang2-siRNA重组质粒与经XbaⅠ酶切电泳鉴定的嗜中性多形核白细胞-绿色荧光蛋白转移质粒(pNL-EGFP)载体连接,产生pNL-EGFP-U6-Ang2-siR-NA慢病毒转移质粒,再以pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA慢病毒转移质粒、水疱性口炎病毒G蛋白包膜质粒和包装质粒三质粒共转染293T细胞,产生慢病毒,收集病毒上清液并测定病毒滴度。结果成功构建pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA慢病毒转移质粒2条,通过XbaⅠ酶切电泳及测序鉴定,证明Ang2-siRNA核苷酸序列插入的正确性。利用三质粒慢病毒包装系统生产EGFP-Ang2-siRNA病毒,收集病毒上清,并测得病毒滴度为9×103/μL。结论成功构建了Ang2基因的RNAi慢病毒表达载体,为下一步进行干扰体内外恶性黑素瘤Ang2的表达奠定基础。
- 王彪张炜强单秀英刘照亮郭国祥庄福连
- 关键词：RNA干扰促血管生成素2慢病毒载体质粒载体
- RNAi技术抑制恶性黑色素瘤细胞Ang2基因表达
- 目的：构建并鉴定Ang2基因的RNA 干扰慢病毒表达载体，观察其对恶性黑色素瘤细胞Ang2基因的干扰作用，为将来进一步进行裸鼠恶性黑色素瘤移植瘤生长的抑制实验奠定基础，为肿瘤的基因治疗提供实验依据。
方法：1、将重...
- 郭国祥
- 关键词：RNAIANG2受体慢病毒载体黑色素瘤
- 文献传递
- Tie2基因RNAi慢病毒载体的构建及其干预恶性黑色素瘤细胞的体外研究
- 2011年
- 目的 构建携带酪氨酸蛋白激酶受体2-小干扰RNA（Tie2-SiRNA）慢病毒载体,观察其对恶性黑色素瘤细胞的干扰作用.方法 将pSilencer 1.0-U6启动子-酪氨酸蛋白激酶受体2-小干扰RNA（pSilencer 1.0-U6-Tie2-siRNA）重组质粒经Xba Ⅰ酶切电泳鉴定后,与经Xba Ⅰ酶切电泳鉴定的带有加强绿色荧光蛋白的转移质粒（pNL-EGFP）载体连接,产生加强绿色荧光蛋白的转移质粒-u6启动子-酪氨酸蛋白激酶受体2-Ⅰ（pNL-EGFP-U6-Tie2-Ⅰ）、pNL-EGFP-U6-Tie2-Ⅱ慢病毒转移质粒,电泳筛选阳性克隆,测序鉴定.用连接成功的慢病毒转移质粒,分别与水疱性口炎病毒G蛋白（pVSVG）包膜质粒和pHelper包装质粒组成慢病毒三质粒转染系统,再共转染293T细胞,产生pNL-EGFP-U6-Tie2-Ⅰ、pNL-EGFP-U6-Tie2-Ⅱ慢病毒.收集病毒上清,测定病毒滴度.将收集的病毒上清感染恶性黑色素瘤细胞,通过实时荧光定量RT-PCR测定抑制Tie2基因表达的效率.结果 酶切电泳与测序鉴定证实成功构建了Tie2-SiRNA慢病毒载体,293T细胞测定病毒原液滴度为8.8×103/ml.实时荧光定量RT-PCR结果显示：Tie2-SiRNA慢病毒载体感染恶性黑色素瘤细胞,抑制了恶性黑色素瘤细胞中Tie2基因的表达,其中较高者可达68.55%,并且2种慢病毒载体之间差异无统计学意义（t=0.362,P＞0.05）.结论 成功构建了Tie2-SiRNA慢病毒载体,体外研究显示其能抑制Tie2 mRNA的表达,为下一步进行抑制肿瘤生成的动物实验研究奠定了基础.
- 单秀英刘照亮王彪郭国祥王美水庄福连蔡传书张明凤张彦定
- 关键词：慢病毒载体黑色素瘤
- Tie2基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定
- 2011年
- 目的构建并鉴定Tie2基因的RNA干扰慢病毒表达载体。方法先构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,通过XbaⅠ酶切电泳及测序鉴定,再以pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,pVSVG包膜质粒和pHelper包装质粒三质粒共转染293T细胞,产生慢病毒,收集病毒上清液并测定病毒滴度。结果成功构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒2条,通过XbaⅠ酶切及测序鉴定,Tie2-siRNA核苷酸序列插入正确,利用三质粒慢病毒包装系统生产EGFP-Tie2-siRNA病毒,收集病毒上清,并测得病毒滴度为9×103/μL。结论成功构建了Tie2基因的RNA干扰慢病毒表达载体。
- 郑厚兵单秀英刘照亮王彪郭国祥张炜强庄福连
- 关键词：RNA干扰促血管生成素2TIE2受体慢病毒载体质粒载体
