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转基因水稻中CAS9蛋白质的免疫印迹检测被引量：7: 2017年; 【目的】制备抗CAS9蛋白质的单克隆抗体,建立转基因水稻中CAS9蛋白质的免疫印迹检测方法,了解CAS9蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以带Cas9的质粒DNA为模板,PCR扩增Cas9 5′端810 bp片段后克隆到p ET30a载体中,将酶切验证且序列正确的重组质粒转入表达菌Condon Plus中,经IPTG诱导表达CAS9蛋白质(N端270氨基酸),用纯化的重组蛋白质作为免疫原免疫小鼠,制备单克隆抗体,用免疫印迹分析筛选特异性和灵敏度高的抗体细胞株。用特异性引物PCR扩增转基因水稻的Cas9,用免疫印迹检测转基因水稻中的CAS9蛋白质。将重组CAS9蛋白质和带有CAS9的水稻苗期叶片蛋白质进行平行免疫印迹分析,用Image J软件采集信号绘制CAS9蛋白质的标准曲线,进而对水稻叶片中的CAS9蛋白质进行定量分析。提取单粒稻米的总蛋白质,稀释后用免疫印迹分析CAS9蛋白质的检测下限,提取多个时期、部位的水稻材料的总蛋白质,包括苗期的地上部和地下部,分蘖期的茎、茎节、叶鞘、叶片等,用SDS-PAGE分离后免疫印迹检测比较CAS9蛋白质的表达特征。【结果】通过体外克隆、诱导表达获得了纯化的重组CAS9蛋白质N端片段,免疫小鼠后得到42株阳性杂交瘤细胞株,经筛选鉴定到#12D2细胞株对水稻样品的检测具有较好的特异性和灵敏度。用该抗体通过免疫印迹检测了转基因水稻,所建立的免疫印迹方法对重组CAS9蛋白质的检测下限约为0.25 ng。在水稻苗期叶片中,CAS9蛋白质约占鲜重的0.00005%,可检出单粒稻米8%样品(约2 mg)中的CAS9蛋白质。在苗期地上部CAS9蛋白质的表达丰度高于地下部,分蘖期茎和叶片中表达量较高,根和叶鞘表达量较低。【结论】获得特异性强、灵敏度高的抗CAS9单克隆抗体,建立了检测转基因水稻中CAS9蛋白质的免疫印记方法,揭示了CAS9蛋白质在水稻不同部位的表达特征,并展示了在其他植�; 郭亚璐马晓飞史佳楠张柳张剑硕黄腾武鹏程康昊翔耿广荟陈浩魏健窦世娟李莉云尹长城刘国振; 关键词：水稻转基因植物单克隆抗体免疫印迹

转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的检测及其表达特征研究被引量：7: 2017年; 为了建立转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的免疫学检测方法,并了解其在水稻生长过程中的表达特征,本研究在大肠杆菌中表达了CP4-EPSPS蛋白质,纯化后以其为免疫原免疫小鼠,经筛选获得了可识别CP4-EPSPS的单克隆抗体。建立了用免疫印记技术检测转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的方法,该方法可以从单粒稻米的0.63%材料中检测到CP4-EPSPS信号。对水稻不同发育时期代表性组织的检测结果表明,CP4-EPSPS蛋白质呈组成型表达,在花药、穗轴、颖壳及不同时期的叶片中的表达量较高,但在分蘖期基部茎节、叶鞘及成熟期种子胚中的表达量稍低。本研究建立的免疫学方法在转基因水稻检测中具有潜在的应用价值。; 柴帅杰武鹏程荣瑞娟郝育杰史佳楠郭亚璐丁国涛韩宇宁赵志静魏健尹长城刘国振; 关键词：水稻转基因除草剂免疫印迹

调控OsPR1a基因表达增强水稻抗白叶枯病的研究: 窦世娟刘国振李莉云杨明兰金苹魏健郭亚璐刘玉晴燕高伟; 成果以作物与病原菌互作为基础，研究水稻防御信号转导过程中，不直接识别病原物的下游病程相关基因OsPR1a的功能，以其找到非专化广谱抗病相关基因。该项目通过构建OsPR1a超表达和基因沉默转化载体，获得水稻转基因植株，积累...; 关键词：; 关键词：水稻基因表达

莱茵衣藻油脂合成关键蛋白质的表达研究: 人类对传统化石能源的过度开采在推动经济发展的同时,其造成的能源危机、环境污染等问题也日益凸显.微藻因为油脂含量高、油脂质量好、洁净可再生等特点成为生物能源领域研究的热点.莱茵衣藻是微藻研究及分子生物学研究的模式生物,研究...; 史佳楠刘国振柴帅杰郭美岑郭亚璐黄腾张剑硕李莉云窦世娟刘丽娟; 关键词：莱茵衣藻蛋白质组学基因表达; 文献传递

转基因水稻中CAS9蛋白质的免疫印迹检测: 研究背景:CRISPR/Cas9是目前最为应用广泛的基因编辑技术，对CRISPR/Cas9基因编辑在植物中的应用研究有大量的报道，但主要是基因编辑后的鉴定及目的基因的功能，尚未见CAS9蛋白质在植物中表达的研究报道。　　...; 郭亚璐; 关键词：转基因水稻基因表达免疫印迹

水稻转录因子OsWRKY42在抗白叶枯病中的功能研究: 白叶枯病抗性基因Xa21具有广谱抗性,鉴定抗病元件具有重要的价值。利用免疫印迹技术我们分析了WRKY在Xa21介导的白叶枯病抗性反应中的表达谱,发现OsWRKY42在叶片中呈组成型表达,在接种白叶枯病菌后表达量上调,并在...; 孙财强郭亚璐李莉云魏健张健硕缪刘杨杨烁刘国振; 关键词：XA21 WRKY 水稻白叶枯病转录因子; 文献传递

水稻OsPR10A的表达特征及其在干旱胁迫应答过程中的功能被引量：5: 2019年; 利用免疫印迹(WB)分析了水稻(Oryzasativa)OsPR10A在其不同生长时期、不同组织部位及多种非生物逆境胁迫下的表达特征,发现OsPR10A在干旱、盐胁迫以及茉莉酸甲酯(MeJA)和脱落酸(ABA)诱导下表达量明显升高,表明该蛋白可能在干旱和盐胁迫应答过程中发挥作用。为证明这一推测,我们构建了OsPR10A超表达载体,经农杆菌介导转化水稻,获得超表达OsPR10A的纯合株系。田间表型观察表明,转基因株系株高变矮、穗长变短、结实率降低。用20%PEG6000在水稻种子萌发过程中进行干旱处理,结果显示,OsPR10A超表达株系的根长和芽长均显著高于野生型,证明超表达OsPR10A可增强水稻萌发期耐旱性。该研究有助于增进人们对水稻OsPR10A功能的了解。; 张彤郭亚璐陈悦马金姣兰金苹兰金苹刘玉晴徐珊李莉云刘国振李莉云; 关键词：水稻干旱胁迫病程相关蛋白免疫印迹

过表达OsMPK17激酶蛋白质增强了水稻的耐旱性被引量：4: 2020年; 促分裂原活化蛋白质激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)在真核生物中高度保守,在水稻逆境应答反应中也发挥着重要作用。本研究表达纯化了水稻OsMPK17蛋白质,制备了特异性抗体,对多种非生物逆境胁迫下的蛋白质样品进行免疫印迹分析,发现OsMPK17蛋白质在干旱胁迫下诱导表达,提示该蛋白质在干旱胁迫应答中发挥作用。对脱落酸和茉莉酸甲酯处理的离体叶片蛋白质分析发现,OsMPK17蛋白质表达丰度下降,提示该蛋白质的功能发挥可能受激素调控。为此,构建了过表达OsMPK17蛋白质的载体,转化水稻后筛选获得了OsMPK17蛋白质过表达的纯合株系。田间种植鉴定结果表明,转基因株系的株高变矮、穗长变短、结实率降低。种子萌发期拟旱(PEG-6000)处理条件下,过表达OsMPK17株系的种子长势明显比野生型好,根长与芽长均显著大于野生型。幼苗期失水试验表明,转基因植株的失水率低于野生型。在土培干旱胁迫后恢复浇水的试验中,过表达OsMPK17蛋白质的转基因水稻生长也好于野生型。综上,过表达OsMPK17蛋白质提高了水稻的耐旱性。本研究增进了对水稻OsMPK17基因功能的了解。; 马金姣兰金苹张彤陈悦郭亚璐郭亚璐燕高伟魏健窦世娟魏健窦世娟杨明; 关键词：水稻免疫印迹逆境胁迫过表达

基于抗体的水稻蛋白质组学理论与实践: 2022年; 水稻是最重要的粮食作物之一,不仅是世界上一半以上的人口以水稻作为主粮,也是基础研究的模式植物。项目团队在前人研究的基础上,结合蛋白质研究的需求和发展趋势,凝练提出了“基于抗体的水稻蛋白质组学”概念,十多年来,不断优化技术路线,积极拓展和丰富相关理论并开展实践。1主要创新点1.1首次提出了“基于抗体的水稻蛋白质组学”概念。; 刘国振李莉云窦世娟杨明李晓明张剑硕侯明明曹英豪刘丽娟魏健郭亚璐史佳楠陈悦王田幸子范伟张柳马金姣张彤刘玉晴燕高伟徐珊杨烁周艳杜铁民牛东东荣瑞娟黄腾柴帅杰郭美岑缪刘杨李雪姣徐文静关明俐贾霖贾盟曾祥然高庆华刘钊王宪云刘雨萌兰金苹白辉刘斯奇尹长城吴琳韦汉福韩宇宁赵丽英杨春霞武鹏程马晓飞赵志静潘秦郝育杰陈浩赵磊康昊翔耿广荟孔令男史晓儒奚文辉; 关键词：蛋白质组学结合蛋白质项目团队抗体

水稻线粒体基因编码蛋白质在种子萌发及叶片发育过程中的表达分析被引量：2: 2016年; 线粒体是真核生物中主要的能量供应细胞器,虽然多种植物的线粒体基因组序列已知,但对线粒体基因编码蛋白质的表达研究关注甚少。本研究采取基于抗体的蛋白质组学策略,制备了17个线粒体基因编码蛋白质的特异性抗体,包括NADH脱氢酶、细胞色素C氧化酶、细胞色素C合成酶、ATP合酶和核糖体蛋白质等5类,利用免疫印迹技术(Western blot)调查了这些蛋白质在水稻种子萌发及不同生长发育时期叶片中的表达情况。结果发现,在种子萌发阶段,ATP合酶中的亚基9和核糖体蛋白质S13亚基表达上调,细胞色素C合成酶CCMB和CCMC表达下调,其余13个表达没有发生变化。在叶片发育阶段,15个蛋白质发生表达上调,且表达模式基本相似,均呈现前期较低,随发育逐渐提高,到成株期达到峰值,其中部分蛋白质在成熟期仍维持在较高的峰值强度(如NAD4、CCMFc、ATP9、RPS1、RPS4和RPS7),提示这些蛋白质在成熟后的灌浆期仍发挥一定作用,而其余蛋白质在成熟期表达量明显下降,提示其功能主要是在营养生长阶段发挥。有意思的是,在叶片发育阶段,RPS19蛋白质表达下调,ATP1蛋白质的表达稳定,它们的特征和功能值得进一步关注。本试验结果直观且相对定量地揭示了线粒体基因编码蛋白质的表达与种子萌发和叶片生长之间的关联,为深入了解其功能提供了有价值的线索。; 兰金苹丁国涛刘钊郭亚璐郭美岑史佳楠刘国振; 关键词：水稻线粒体蛋白质表达免疫印记

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郭亚璐

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