郑桂珍
- 作品数：12 被引量：21H指数：3
- 供职机构：华北制药集团新药研究开发有限责任公司更多>>
- 发文基金：微生物药物技术创新与新药创制产学研联盟国家科技攻关计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 四羟基环孢菌素衍生物转化菌株发酵条件优化被引量：2
- 2014年
- 目的对四羟基环孢菌素衍生物([γ-HyMeLeu4]CyA)转化菌Nonomuraea dietziae的发酵条件进行优化。方法采用均匀设计对发酵培养基进行优化,考察糊精、黄豆饼粉、葡萄糖、酵母粉和蛋白胨对发酵单位的影响,同时对底物环孢菌素A的添加时间、添加量和发酵培养时间进行了摸索。结果得到了最优培养基配方为:糊精1.2%、葡萄糖3.0%、酵母粉0.9%、蛋白胨0.5%、黄豆饼粉1.5%;底物添加最佳时间是36h,添加量是400μg/mL,最佳放瓶时间是96h。在优化后的培养条件下,[γ-HyMeLeu4]CyA的产量提高了63%左右。结论优化后的发酵条件更适合转化菌的生长,有利于目的产物产量的提高,该发酵条件的优化为[γ-HyMeLeu4]CyA的工业化生产奠定了基础。
- 章丽戴梦郑桂珍赵颖刘静张佳王富强
- 关键词：发酵条件优化均匀设计
- 产黄青霉谷胱甘肽S-转移酶基因PcgstA的克隆与鉴定(英文)被引量：1
- 2006年
- 从青霉素工业生产菌产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)中首次克隆了一个谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因,定名为PcgstA.该基因的开放阅读框长840bp,含有两个内含子,编码一个238氨基酸残基的蛋白质.其推断的氨基酸序列与一些已经鉴定的丝状真菌GST具有50%左右的序列一致性.PcgstA的完整编码区经RT-PCR扩增、验证,插入原核表达载体pET11a,转化大肠杆菌BL21(DE3)-RP菌株,表达得到重组PcGSTA蛋白.酶活测定证实,重组PcGSTA具有GST活性,其对底物CDNB(1-chloro-2,4-dinitrobenzene)的比活为(0.159±0.031)μmol/(min·mg).利用TaqMan探针法,对PcgstA的表达情况进行了比较.结果表明,在添加了侧链前体苯乙酸的青霉素生产培养基中,PcgstA的表达水平和在不含苯乙酸培养基中的表达相比明显下调,显示了该基因与苯乙酸代谢的关系.
- 王富强郑桂珍赵颖任志红贾茜贺建功于军
- 关键词：产黄青霉谷胱甘肽S-转移酶苯乙酸
- 丝状真菌产黄青霉DNA提取方法的改进被引量：4
- 2010年
- 为探索提取产黄青霉基因组DNA的简便方法,采用起始菌体量0.2 g,10 g/L十六烷基三甲基溴化铵裂解液,通过液氮/65℃反复冻融对菌种破壁,代替了液氮研磨,且不需要玻璃珠,操作简便,重复性好,提取的DNA质量高,极大地方便了后续基因操作.
- 赵颖刘静戴梦郑桂珍章丽张佳王富强
- 关键词：十六烷基三甲基溴化铵
- 编码产黄青霉苯乙酸羟化酶的基因及其应用
- 本发明涉及来自产黄青霉的新的编码苯乙酸羟化酶的基因(pahB)，该基因编码的多肽及含有该基因的表达载体，并证明了苯乙酸能显著诱导该基因的表达。本发明为利用基因工程手段改造产黄青霉菌从而提高青霉素产量提供了方向和靶点，对于...
- 王富强任志红刘静戴梦郑桂珍王泽建赵颖王红怡贾茜贺建功
- 文献传递
- 编码产黄青酶苯乙酸羟化酶的基因及其应用
- 本发明涉及来自产黄青霉的新的编码苯乙酸羟化酶的基因(pahB)，该基因编码的多肽及含有该基因的表达载体，并证明了苯乙酸能显著诱导该基因的表达。本发明为利用基因工程手段改造产黄青霉菌从而提高青霉素产量提供了方向和靶点，对于...
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- 文献传递
- 环孢菌素A生产菌原生质体转化系统的建立被引量：2
- 2013年
- 以腐草霉素抗性为选择标记,建立了环孢菌素A生产菌株的基因转化体系,成功将外源基因转入环孢菌素A生产菌,并整合到染色体上。传代实验表明,外源基因可以稳定表达。该体系的建立为环孢菌素A生产菌的基因工程育种奠定了基础。
- 戴梦刘静赵颖张佳章丽郑桂珍
- 关键词：环孢菌素A原生质体转化
- 编码产黄青霉谷胱苷肽转移酶的基因及其应用
- 本发明涉及来自产黄青霉的新的编码谷胱苷肽转移酶的基因(PcGSTA)，该基因编码的多肽及含有该基因的表达载体。本发明同时提供了苯乙酸对本发明的新基因PcGSTA的表达的影响，进而提供了将本发明的新基因PcGSTA应用于产...
- 王富强郑桂珍赵颖任志红穆岷丰玫玫苏彩云张春珍贾茜贺建功
- 文献传递
- 编码产黄青酶谷胱苷肽转移酶的基因及其应用
- 本发明涉及来自产黄青霉的新的编码谷胱苷肽转移酶的基因(PcGSTA)，该基因编码的多肽及含有该基因的表达载体。本发明同时提供了苯乙酸对本发明的新基因PcGSTA的表达的影响，进而提供了将本发明的新基因PcGSTA应用于产...
- 王富强郑桂珍赵颖任志红穆岷丰玫玫苏彩云张春珍贾茜贺建功
- 文献传递
- 一个新的产黄青霉谷胱甘肽转移酶基因的克隆和鉴定被引量：1
- 2007年
- 以产黄青霉(Penicillium chrysogenum Thom)cDNA为模板,克隆得到一个新的谷胱甘肽转移酶基因PcgstB,其开放阅读框长651bp,编码216个氨基酸的蛋白质。与已知序列进行BLASTp比较显示,该蛋白具有保守的GST结构域,与烟曲霉GstB的序列一致性最高,达65%。将PcgstB与原核表达载体pTrc99A连接得到表达质粒pTrc-gstB,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导后获得以可溶形式表达的重组PcGstB蛋白。以1-chloro-2,4-dinitrobenzene(CDNB)为底物检测,确认该蛋白具有GST活性。
- 张媛王富强郑桂珍戴梦刘静赵颖任志红赵宝华贾茜
- 关键词：谷胱甘肽转移酶产黄青霉原核表达活性测定
- 4-羟基环孢菌素A衍生物[γHyMeLeu4]CyA生产菌的接合转移被引量：1
- 2013年
- 将染色体整合型糖多孢红霉菌表达载体pZMW-tsr转入大肠杆菌ET12567(pUZ8002);以其作为供体,采用接合转移的方法将硫链丝菌素抗性基因tsr转入4-羟基环孢菌素A衍生物[γHyMeLeu4]CyA生产菌野野村菌CYA4OH。PCR结果表明,tsr基因已经整合到CYA4OH基因组上。研究表明pZMW载体能够在稀有放线菌野野村菌中有效表达外源基因。
- 刘静戴梦章丽赵颖郑桂珍张佳王富强
