邵烈刚
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：西南大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：重庆市科技攻关计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及单克隆抗体制备被引量：1
- 2013年
- 目的获得原核表达的PRRSV N蛋白,并制备N蛋白的单克隆抗体。方法将已构建的含有PRRSV N蛋白基因的重组表达载体阳性菌,在37℃条件下,用终浓度1 mmol/L的IPTG诱导表达4 h。经SDS-PAGE分析,表明N基因在大肠杆菌中得到了高效表达。经镍柱亲和层析纯化,以此蛋白作为抗原采用长程免疫法免疫Balb/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合。结果获得了纯度较高、免疫学活性较好的N蛋白,细胞融合率为81.3%。建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体。初检阳性率为17.3%,经2次亚克隆反复筛选获得了2株分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株,命名为4G10和2F9。ELISA证实所获得的单抗是特异性针对PRRSV共同的抗原表位,4G10和2F9经反复冻存、复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体。结论成功制备出高效价的抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体,为建立一种快速、特异的PRRSV检测方法奠定了基础。
- 吴胜昔邵烈刚曾政陈晶刘人菊袁丽萍熊仲良蔡家利
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白单克隆抗体
- 猪繁殖与呼吸综合征实验室诊断技术研究进展
- 2009年
- 猪繁殖与呼吸综合征是一种能引起母猪繁殖障碍、新生仔猪呼吸道症状及高死亡率的传染病。其确诊依赖于实验室方法,本文就其检测技术,如病毒分离、血清抗体检测、免疫胶体金技术、分子生物学技术的研究进展作一综述。
- 邵烈刚蔡家利
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备
- 猪繁殖与呼吸综合征是一种能引起母猪繁殖障碍、新生仔猪呼吸道症状及高死亡率的传染病。该病于1987年首先暴发于美国，随后迅速向世界各地蔓延;我国郭宝清等于1996年从疑似本病的猪群中分离到PRRSV，从而确认了PRRS在我...
- 邵烈刚
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白单克隆抗体
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的原核表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 利用含有PRRSV N蛋白基因的重组表达质粒pREST-N的大肠埃希菌,在37℃条件下,用终浓度为1 mmol/L的IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE分析,目的基因高效表达出分子质量约为17.8 ku的可溶性融合蛋白,分子质量与预期设计的N蛋白大小相符。经His-Ni2+柱亲和层析纯化后,得到了高纯度的N蛋白。通过Western blot分析,该重组N蛋白与兔抗PRRSV高免血清能够发生特异性反应,说明其具有良好的反应原性,为进一步研究PRRSV的抗体检测方法及诊断抗原的批量生产工艺奠定了基础。
- 于丽邵烈刚刘海军胡仁建余华叶芬蔡家利
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白纯化
