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可口革囊星虫cDNA文库的构建及蚯蚓血红蛋白基因序列的分析被引量：7: 2010年; 提取可口革囊星虫血总RNA,反转录成cDNA,将大于500bp的cDNA片段连接入载体pBluescriptII SK(+),电转化至DH10B宿主菌中,得到原始文库.对cDNA文库的滴度、重组率和插入片段的大小进行检测,并挑取500个单菌落进行测序.结果表明,cDNA文库的库容量为3.06×105cfu,重组率达97.2%.经测序共得到437条序列,分析得到211个单基因簇(unigene),其中115条序列有相关同源性.测序得到蚯蚓血红蛋白cDNA全长序列为823bp,ORF编码120个氨基酸,蛋白分子量为13.63kD,等电点为5.78.NCBI上同源性比对结果则表明,与Siphonosoma cumanense的蚯蚓血红蛋白同源性最高为67%.可口革囊星虫cDNA文库的构建为今后克隆和研究可口革囊星虫的相关功能基因奠定了坚实的基础.; 王孟前李晔苏秀榕李太武贺静静王中华周君; 关键词：海洋生物学可口革囊星虫 CDNA文库

可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)热休克蛋白70基因的克隆及序列分析: 热休克蛋白70是生物进化上高度保守、功能上至关重要的蛋白。成功地从可口革囊星虫血液中获得热休克蛋白70基因的全长序列，该基因cDNA全长2520bp，5'-端非编码区为125bp，3'-非编码区为421bp，开放阅读框长...; 杜莉利李太武苏秀榕李登峰贺静静王孟前; 关键词：可口革囊星虫热休克蛋白70 基因克隆同源性抗原表位; 文献传递

海地瓜的分子分类学研究被引量：4: 2009年; 应用分子系统发育学的方法,以浙江沿海一海地瓜的18S rDNA和COI片段序列为分子标记,自行设计引物,进行了克隆,结合来自GenBank中10种海参的18S rDNA和COI同源序列,用邻接法和最大简约法构建系统进化树,并结合形态学特征对它们的分类地位进行了探讨。初步分析结果,基于此海地瓜的各形态学的研究,可以认为它属于海参纲芋参目;鉴于18S rDNA基因的分析,此海地瓜与拟刺参遗传距离为0.017亲缘关系非常近,可以认为它属于海参纲;从COI基因的角度分析,它虽然与怀玉参在系统树上聚成一枝,但支持率很低;仅为49%,遗传距离比较大,为0.223,不足以作为分析的依据。; 李慧李太武苏秀榕秦玉明王孟前贺静静胡广洲黄尚锋周君; 关键词：海地瓜 RDNA COI 系统进化树

链状亚历山大藻抑制消减杂交文库的构建及分析: 2009年; 为了筛选链状亚历山大藻特异表达的发光相关基因。应用抑制消减杂交技术。构建了链状亚历山大藻特异表达的cDNA消减文库，共获得500个克隆，通过基因PCR初步筛选表明插入片段的大小主要集中在250～1000bp，随机挑选10个阳性克隆进行双向测序和序列比对分析，有2个克隆基因片段与已知基因序列高度同源，分别为荧光素结合蛋白和羧化酶／加氧酶，另有8个克隆基因片段在GenBank中未查找到相应的同源基因，可能为未知新基因序列。这些基因的获得为进一步研究链状亚历山大藻特异表达基因，阐明其发光机理及建立特异甲藻的新型检测方法提供重要依据。; 史西志刘兵贺静静王梦前郭皓苏秀榕李太武; 关键词：链状亚历山大藻抑制消减杂交

中华鳖体表和体内菌群多样性分析: 采用16S rDNA分析方法，分别提取中华鳖体表和体内细菌总DNA，以之为模板进行PCR扩增获得细菌16S rDNA基因片段，并构建16S rDNA克隆文库。从两个文库中分别随机选取100个重组克隆子，抽提重组质粒，用H...; 胡广洲李登峰苏秀榕李太武贺静静; 关键词：中华鳖 RFLP 细菌多样性; 文献传递

患暴发性败血症中华鳖体内细菌的分离与鉴定被引量：27: 2010年; 从患暴发性出血性败血症中华鳖(Trionyx sinensis)的肠、心、肝、胃等组织和腹腔液中分离培养得到8株细菌。通过光镜与电镜观察和16S rDNA序列测定、比对,对所分离细菌进行鉴定。结果表明,它们分别为格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)、假单胞菌(Pseudomonas sp.)、海氏肠球菌(Enterococcus hirae)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi)、惰性嗜血杆菌(Haemophilus segnis)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)和迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)。用含抗生素的20种药敏纸片对格氏乳球菌、弗氏柠檬酸杆菌和迟钝爱德华氏菌进行药敏试验发现,格氏乳球菌对青霉素等4种药物敏感,对头孢唑啉等6种药物中度敏感,对阿米卡星等10种药物有耐药性。弗氏柠檬酸杆菌对头孢唑啉等13种药物敏感,对青霉素等3种药物中度敏感,对万古霉素等4种药物有耐药性。迟钝爱德华氏菌对新霉素等3种药物敏感,对阿米卡星等5种药物中度敏感,对青霉素等12种药物有耐药性。本研究旨在为中华鳖败血症的防治技术提供科学支撑。; 胡广洲李登峰苏秀榕李太武贺静静王孟前李慧李晔; 关键词：中华鳖败血症细菌药敏试验

浙江沿海一新纽虫的18S rDNA序列研究被引量：6: 2010年; 为进一步确定浙江沿海发现的一新纽虫的分类地位,本文根据GenBank中已报道的纽虫18SrDNA保守序列设计引物,通过PCR扩增,获得该纽虫的18S rDNA部分序列,对该纽虫的18SrRNA基因进行了克隆和序列分析。并将该纽虫18S rDNA基因的序列与NCBI数据库中已收纽虫的18S rDNA基因进行了比较,分析该纽虫与其他纽虫的同源性。利用系统进化树和形态学的研究结果确定其分类地位。结果表明,该纽虫属于异纽目(Heteronemertea)纵沟虫科(Lineidae)动物。; 王孟前李太武江锦坡苏秀榕杜莉利贺静静刘兵吕慈仙; 关键词：纽虫系统进化树

中华鳖体表和体内菌群多样性分析被引量：2: 2010年; 采用16S rDNA分析方法,分别提取中华鳖体表和体内细菌总DNA,以之为模板进行PCR扩增获得细菌16S rDNA基因片段,并构建16S rDNA克隆文库。从2个文库中分别随机选取100个重组克隆子,抽提重组质粒,用HaeⅢ和MspⅠ限制性内切酶进行酶切,获得酶切指纹图谱,从每种图谱随机挑选克隆子测序,获得其16S rDNA部分序列,构建了系统进化树。在中华鳖体表和体内细菌克隆文库中分别包含13种和10种RFLP谱型,分别挑选了70个和60个克隆子进行测序。结果表明,中华鳖体表和体内文库克隆子分别归为15类和11类OTU,体表和体内菌群多样性较强,优势细菌类群分别为拟杆菌和变形菌,并在文库中检测到了几株益生菌和条件致病菌。; 胡广洲李登峰苏秀榕李太武贺静静; 关键词：中华鳖 RDNA RFLP 细菌多样性

泥蚶(Tegillarca granosa)cDNA文库的构建及铁结合蛋白基因(Ferritin)序列分析被引量：15: 2009年; 取正常泥蚶肌肉组织获得总RNA,纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物逆转录合成cDNA第一链,通过LD-PCR合成cDNA双链,经胶回收除去短片段,与pDNR-LIB载体进行连接,电转化到大肠杆菌DH10B中,构建形成原始文库,进行滴度测试和重组率鉴定。结果表明原始文库的滴度为3.17×105cfu/ml,重组率为86.3%,插入片段多在500—2500bp间。随机挑选458个克隆测序,经分析获得94种已知基因及87种未知基因。其中包括铁结合蛋白(Ferritin)的全长cDNA序列。该基因序列全长895bp,5'-端非编码区为163bp,3'-非编码区为213bp,开放阅读框为519bp,编码172个氨基酸。推测其蛋白分子量和等电点分别为20kDa和4.89。氨基酸序列与皱纹盘鲍、太平洋牡蛎、血红扇头蜱、文昌鱼、中华蟾蜍、非洲爪蟾、小家鼠以及人等的同源性有62%—82%。比对结果表明,铁结合蛋白基因在动物进化中高度保守。; 贺静静李晔李太武苏秀榕王孟前李松伟周军马斌李强芳; 关键词：CDNA文库泥蚶

缢蛏(Sinonovacula constricta)cDNA文库的构建及肌动蛋白基因的研究被引量：12: 2010年; 采用SMART(switching metchanism at 5’end of RNA transcript)技术构建缢蛏cDNA基因文库。并对cDNA文库的滴度,重组率和插入片段的大小进行了检测。结果表明,该cDNA文库的滴度为5.50×104cfu/ml,重组率为92.5%,插入片段的长度大多在1kb以上。对478个克隆子进行了测序,共得到430个有效序列,其中166个序列无同源性,264条序列具有同源性。从中得到肌动蛋白(actin)cDNA的全长1538bp,开放阅读框(ORF)为1131bp,编码376个氨基酸,其预测蛋白的分子量为41.78kD,等电点为5.30。该氨基酸序列与其它物种的同源性大都在90%以上。; 秦玉明苏秀榕李晔马斌李惠王孟前贺静静李太武; 关键词：缢蛏 CDNA文库肌动蛋白基因

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贺静静

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