袁向东
- 作品数：10 被引量：16H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- Cry1Ac和Cry2Ab蛋白对大草蛉生长发育及酶活力的影响被引量：9
- 2014年
- 为明确转Cry1Ac和Cry2Ab基因棉花对大草蛉的影响,运用Bt蛋白与人工饲料混合的方法,以大于转基因棉花叶片中蛋白含量20倍的剂量饲喂大草蛉初孵幼虫,初步研究了Cry1Ac和Cry2Ab对大草蛉生物学参数和消化酶、解毒酶活性的影响。结果表明:取食含Bt蛋白饲料的大草蛉幼虫的发育历期、体重、蛹重、成虫体重、羽化率等生物学参数与对照相比均没有显著差异;在大草蛉幼虫体内可以检测到含量较高的Cry1Ac和Cry2Ab蛋白,分别为974.92~1282.39 ng/g鲜重和5592.62~6082.92 ng/g鲜重,而在大草蛉成虫体内检测到的Cry1Ac和Cry2Ab蛋白含量非常低,分别为0.29~0.39 ng/g鲜重和50.34~56.71 ng/g鲜重;取食含Bt蛋白的饲料对大草蛉幼虫的类胰蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶、氨肽酶和谷胱甘肽-S-转移酶活性有一定的影响,但对大草蛉成虫影响与对照差异不显著。表明大草蛉取食含Bt蛋白的人工饲料后,虽然体内可以检测到一定含量的Bt蛋白,但对大草蛉的生长发育并没有显著的直接不利影响。
- 王英丽魏纪珍张丽丽袁向东梁革梅
- 关键词：大草蛉
- 一种评价生物蛋白对绿盲蝽影响的方法
- 本发明提供一种评价生物蛋白对绿盲蝽影响的方法，包括：1）将待测生物蛋白稀释成不同浓度，与绿盲蝽人工饲料混合，制得生物蛋白测定饲料，并以不添加生物蛋白的饲料组作为对照；2）用拉伸的封口膜分别包裹测定饲料和对照饲料，制成胶囊...
- 王英丽梁革梅魏纪珍袁向东张丽丽谢丙堂钟丰
- 文献传递
- 一种评价转基因棉花对大草蛉影响的生物测定方法
- 本发明提供了一种评价转基因棉花对大草蛉影响的生物测定方法，包括在培养皿底部铺入琼脂；将转基因棉花叶片放入琼脂表面，接入初孵棉铃虫幼虫；大草蛉初孵幼虫先用豌豆蚜饲喂1-3天，之后用取食转基因棉花叶片1-3天的棉铃虫幼虫饲喂...
- 王英丽梁革梅魏纪珍袁向东赵曼
- 文献传递
- 棉铃虫中肠钙粘蛋白、氨肽酶N及碱性磷酸酯酶的抗血清对Cry1Ac和Cry2Aa毒力的影响被引量：1
- 2016年
- 【目的】Cry1A和Cry2A类Bt蛋白通过特异性地与昆虫中肠上的受体蛋白结合而发挥杀虫作用,现已广泛应用于转基因抗虫作物。本研究旨在进一步明确Cry2A类蛋白的作用机制和Cry1A受体蛋白在Cry2A发挥毒力中的作用。【方法】本研究首先提取了棉铃虫Helicoverpa armigera的BBMV,制备了钙粘蛋白(CAD)、氨肽酶N(APN)和碱性磷酸酯酶(ALP)3种受体蛋白的抗体和抗血清;然后,利用Western blot检测BBMV上这3种受体蛋白后,利用抗体封闭技术比较了敏感棉铃虫和Cry1Ac抗性棉铃虫(BtR)中3种受体蛋白的抗血清对Cry1Ac和Cry2Aa毒力的影响。【结果】对敏感品系棉铃虫,这3种已知的Cry1Ac受体蛋白抗血清显著地降低了Cry1Ac和Cry2Aa的毒力。其中APN抗血清对Cry1Ac毒力的影响最大,棉铃虫幼虫的死亡率降低了84.44%;ALP抗血清对Cry2Aa的毒力影响最大,棉铃虫幼虫死亡率比对照降低了71.04%。Cry1Ac对Cry1Ac抗性棉铃虫(BtR)的毒力显著降低,Cry2Aa的毒性也减弱。在Cry1Ac抗性棉铃虫(BtR)中,3种受体抗血清对Cry1Ac的影响比在敏感棉铃虫中的影响小,尤其是CAD和APN抗血清对Cry1Ac毒力的抑制率显著低于在敏感棉铃虫中的抑制作用;CAD和ALP抗血清对Cry2Aa毒力的影响与在敏感棉铃虫中的影响差异不显著,但APN抗血清可以显著降低Cry2Aa对Cry1Ac抗性棉铃虫(BtR)的毒力。【结论】棉铃虫CAD,APN和ALP不仅参与了Cry1Ac的杀虫过程,也对Cry2Aa毒力有一定的影响,而且这3种蛋白可能与棉铃虫对Cry1Ac和Cry2Aa产生抗性及交互抗性相关。
- 王冰洁袁向东赵曼刘臣陈琳梁革梅
- 关键词：棉铃虫抗血清CRY1AC抗性交互抗性
- 一种评价转基因棉花对大草蛉影响的生物测定方法
- 本发明提供了一种评价转基因棉花对大草蛉影响的生物测定方法，包括在培养皿底部铺入琼脂；将转基因棉花叶片放入琼脂表面，接入初孵棉铃虫幼虫；大草蛉初孵幼虫先用豌豆蚜饲喂1-3天，之后用取食转基因棉花叶片1-3天的棉铃虫幼虫饲喂...
- 王英丽梁革梅魏纪珍袁向东赵曼
- 文献传递
- 提高咀嚼式口器昆虫RNA干扰效率的方法
- 本发明提供一种提高咀嚼式口器昆虫RNA干扰效率的方法，包括：1)用无RNA酶的水将靶基因特异性siRNA配成一定浓度的溶液；2)将人工饲料加工成3～5mm厚、直径1～2cm的圆片，置于24孔板中；3)取1)的溶液加在2)...
- 王冰洁袁向东梁革梅张万娜魏纪珍
- 文献传递
- Cry1Ac/Cry2Ab蛋白对大草蛉的直接影响
- 研究了取食含Cry1Ac/Cry2Ab人工饲料后大草蛉生物学参数的变化,并对取食含Bt蛋白饲料后大草蛉成虫体内的蛋白含量和消化酶、蛋白酶等的酶活性进行了检测,结果可为评价转基因棉花对天敌的生物安全性提供依据.分别用含量大...
- 王英丽魏纪珍张丽丽袁向东梁革梅
- 关键词：大草蛉
- 甜菜夜蛾中肠碱性磷酸酶alp2基因的克隆、表达及功能分析被引量：6
- 2017年
- 为探究甜菜夜蛾Spodoptera exigua中肠碱性磷酸酶(alkaline phosphatase protein 2,ALP2)是否为Cry1Ac杀虫蛋白的受体,采用同源克隆和RACE技术克隆了编码alp2基因的完整c DNA序列,利用荧光定量PCR比较了甜菜夜蛾幼虫中肠不同龄期ALP2表达量的差异,利用Ligand blot方法检测了中肠ALP2与Cry1Ac杀虫蛋白的结合。结果表明,alp2基因序列全长1 629 bp(Gen Bank序列号为KP420013),编码542个氨基酸,预测在氨基酸序列N端包含1个由21个氨基酸组成的信号肽,在C端存在1个GPI修饰的锚定位点,且在整个氨基酸序列中存在多个糖基化修饰位点。在整个甜菜夜蛾幼虫期均有ALP2表达,但不同龄期的表达量差异显著,1龄幼虫期表达量最低,4龄幼虫期最高。Ligand blot方法检测结果表明原核表达的ALP2片段与活化的Cry1Ac杀虫蛋白可以结合。研究表明,甜菜夜蛾中肠的ALP2可能是Cry1Ac的受体之一。
- 袁向东张万娜赵曼梁革梅
- 关键词：甜菜夜蛾BT杀虫蛋白碱性磷酸酶受体蛋白
- Cry1Ac/Cry2Ab蛋白对大草蛉的直接影响
- 研究了取食含Cry1Ac/Cry2Ab人工饲料后大草蛉生物学参数的变化,并对取食含Bt蛋白饲料后大草蛉成虫体内的蛋白含量和消化酶、蛋白酶等的酶活性进行了检测,结果可为评价转基因棉花对天敌的生物安全性提供依据。分别用含量大...
- 王英丽魏纪珍张丽丽袁向东梁革梅
- 关键词：大草蛉
- 棉铃虫中肠氨肽酶APN4与Cry1Ac、Cry2Aa结合能力的比较
- 2015年
- 【目的】Bt杀虫蛋白(Bacillus thuringiensis)具有高度的靶标特异性,已经被广泛用于农业害虫防治。Bt杀虫蛋白要发挥杀虫活性,必须首先与其受体蛋白结合,氨肽酶N(Aminopeptidase N)是一类重要的Bt受体蛋白。因此,分析该受体与Bt杀虫蛋白的结合能力,可为进一步明确不同Bt的分子作用机制、Bt的抗性治理以及新Bt的开发应用等提供借鉴。【方法】本文利用Ligand blot和Elisa方法比较了棉铃虫Helicoverpa armigera中肠APN4(Aminopeptidase N4,APN4)与Cry1Ac、Cry2Aa的结合能力。【结果】原核表达的APN4片段与活化的Cry1Ac、Cry2Aa都可以结合,解离常数(Kd)分别是48.59 nmol/L和21.73 nmol/L。【结论】APN4片段与Cry1Ac、Cry2Aa的结合能力在数量级上不存在显著性差异。
- 袁向东葛朝虹肖玉涛梁革梅
- 关键词：棉铃虫THURINGIENSIS
