胡晓佳
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 供职机构：清华大学化学工程系生物化工研究所更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 重组大肠杆菌共表达D-海因酶和N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶被引量：4
- 2006年
- 通过PCR分别扩增得到N-carbamoylase基因和上游带有RBS区的D-hydantoinase基因,并将其依次克隆入pBAD/HisA质粒中,得到呈多顺反子结构的双酶表达质粒pBAD-CRH,转化E.coliTop10F′得到重组菌TaraCRH.实验证明,E.coliTaraCRH对外源蛋白的表达控制严紧,而加入阿拉伯糖诱导后可以成功表达两酶基因.诱导条件优化结果表明,诱导温度采用29℃,培养基中阿拉伯糖浓度0.05g/L可达到最高酶活.进一步尝试采用玉米浆培养基代替LB培养基,在经过优化的玉米浆培养基中培养TaraCRH菌株,经阿拉伯糖诱导,海因酶和水解酶酶活分别达到3.52和4.21U/mL.
- 胡晓佳李强丛进阳
- 关键词：D-海因酶多顺反子大肠杆菌共表达
- 产GL-7-ACA酰化酶重组大肠杆菌的构建和表达被引量：5
- 2004年
- 为了实现GL 7 ACA酰化酶在大肠杆菌中的成功表达 ,将GL 7 ACA酰化酶基因用PCR的方法去除其信号肽序列 ,并将其连接到质粒pET 2 8a ,通过筛选得到了表达GL 7 ACA酰化酶的重组菌BL2 1 (DE3) /pET ACY。分别考察了诱导温度、菌浓 (OD60 0 )、诱导剂IPTG的用量等因素对重组菌表达GL 7 ACA酰化酶的影响。在优化条件下 ,GL 7 ACA酰化酶酶活可达 2 66U/L。GL 7 ACA酰化酶经一步DEAE Sepharose纯化即可达到 80 %的纯度 ,酶活收率为 5 0 %。
- 罗晖胡晓佳周航童忆舟于慧敏李强沈忠耀
- 关键词：GL-7-ACA酰化酶大肠杆菌
