童忆舟
- 作品数：7 被引量：33H指数：3
- 供职机构：清华大学化学工程系更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生理学更多>>
- GL-7-ACA酰化酶重组大肠杆菌的构建和表达
- ＜正＞7-氨基头孢烷酸（7-aminocephalosporanic acid,7-ACA）是医药工业生产半合成头孢菌素的重要中间体,一般由头孢菌素C经D-氨基酸氧化酶和GL-7-ACA酰化酶两步酶催化,脱去其侧链得到。...
- 罗晖胡晓佳周航童忆舟于慧敏李强沈忠耀
- 文献传递
- 三角酵母D-氨基酸氧化酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达被引量：5
- 2004年
- 从三角酵母中提取总RNA ,反转录后进行PCR扩增得到D 氨基酸氧化酶 (D AminoAcidOxidase ,DAAO)基因 ,经测序可知 ,与文献中三角酵母的DAAO基因序列的同源性在 99%以上。将DAAO基因用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,与相同酶切的大肠杆菌表达载体pET 2 8a连接 ,转化大肠杆菌TOP 1 0F′,并筛选得到重组质粒pET DAAO ,转化BL2 1 (DE3)感受态细胞 ,得到重组大肠杆菌BL2 1 (DE3) pET DAAO。对重组大肠杆菌中的D 氨基酸氧化酶进行了诱导表达 ,考察了诱导温度、菌浓度、诱导剂IPTG用量以及溶氧等因素对酶活的影响。结果表明 ,在 2 8℃、菌浓度 (OD6 0 0 ) 1 0、IPTG浓度 1mmol L时 ,DAAO酶活最高达 2 3 3U mL。研究进一步显示 ,用廉价无毒的乳糖可以替代IPTG进行诱导 ,当乳糖浓度为 2mmol L ,DAAO酶活可达 2 2 7U mL。经过补料分批培养和乳糖诱导 ,DAAO酶活可以达到 1 75U mL。
- 罗晖童忆舟李强于慧敏沈忠耀
- 关键词：D-氨基酸氧化酶三角酵母大肠杆菌乳糖
- 毕赤酵母体系表达外源蛋白及新诱导工艺研究
- 童忆舟
- 关键词：巴斯德毕赤酵母D-氨基酸氧化酶GL-7-ACA酰化酶高效毛细管电泳
- 三角酵母D-氨基酸氧化酶的克隆及其在大肠杆菌中的表达
- ＜正＞7-氨基头孢烷酸（7-aminocephalosporanic acid,7-ACA）是医药工业生产半合成头孢菌素的重要中间体,一般由头孢菌素C先后经D-氨基酸氧化酶（D-amino acid oxidase,DA...
- 罗晖童忆舟胡晓佳周航于慧敏李强沈忠耀
- 文献传递
- 产GL-7-ACA酰化酶重组大肠杆菌的构建和表达被引量：5
- 2004年
- 为了实现GL 7 ACA酰化酶在大肠杆菌中的成功表达 ,将GL 7 ACA酰化酶基因用PCR的方法去除其信号肽序列 ,并将其连接到质粒pET 2 8a ,通过筛选得到了表达GL 7 ACA酰化酶的重组菌BL2 1 (DE3) /pET ACY。分别考察了诱导温度、菌浓 (OD60 0 )、诱导剂IPTG的用量等因素对重组菌表达GL 7 ACA酰化酶的影响。在优化条件下 ,GL 7 ACA酰化酶酶活可达 2 66U/L。GL 7 ACA酰化酶经一步DEAE Sepharose纯化即可达到 80 %的纯度 ,酶活收率为 5 0 %。
- 罗晖胡晓佳周航童忆舟于慧敏李强沈忠耀
- 关键词：GL-7-ACA酰化酶大肠杆菌
- 毛细管电泳分析7-氨基头孢霉烷酸生产过程
- 2005年
- 建立了高效毛细管电泳分析法检测7-氨基头孢霉烷酸生产过程。采用未涂层石英毛细管柱,缓冲液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH 8.0),运行电压30kV,检测波长254nm。7-氨基头孢霉烷酸、头孢菌素C和戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸的线性范围(mg/ml)分别为0.05～3(r=0.998)、0.1～3.5(r=0.992)和0.1～5(r=0.996),迁移时间和峰面积的RSD分别为0.5%、1.0%、0.6%和2.2%、3.0%、2.4%。
- 童忆舟李强罗晖
- 关键词：头孢菌素C高效毛细管电泳
- 酶法生产7-氨基头孢烷酸的研究进展被引量：24
- 2002年
- 氨基头孢烷酸 (7 ACA)是生产头孢菌素的重要原料 ,目前都由头孢菌素C通过化学法或生物酶法生产。综述了利用酶法生产 7 ACA的研究进展 ,其中涉及催化过程所用两种酶 (D 氨基酸氧化酶和GL 7 ACA酰化酶 )的酶学特性、表达、纯化。
- 罗晖李强童忆舟司颖涛沈忠耀
- 关键词：酶法7-氨基头孢烷酸D-氨基酸氧化酶GL-7-ACA酰化酶头孢菌素C
