申同健
- 作品数：9 被引量：75H指数：5
- 供职机构：中国科学院生物物理研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人工合成的水蛭素基因在酵母中的表达被引量：17
- 1991年
- 本文按水蛭素HV2的氨基酸序列,设计并合成了水蛭素基因,并在酵母α因子表达系统中表达。通过诱变得到的稳定携带水蛭素表达质粒的酵母菌株,在丰富培养基中培养36—48 h后,可在培养液中测得10—20 ATU/ml的分泌的水蛭素表达产物。经过较简单的纯化步骤,得到HPLC纯的水蛭素,其N-端氨基酸序列与天然产物完全相同,并有强烈的抗凝血和抑制凝血酶的活力。从500 ml培养液中可得到约3000 ATU的纯水蛭素,其比活力为6600 ATU/mg。
- 申同健葛庆远韩玉珉王增丰王启松
- 关键词：水蛭素基因合成酵母分泌
- 地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶基因的克隆、序列测定及其表达被引量：11
- 1994年
- 以克隆的地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶编码序列的PCR扩增片段为探针,通过原位杂交从2709基因文库中筛选出两个含有完整的2709碱性蛋白酶基因的阳性克隆:pSC1和pSC7。对pSC7中的插入片段构建若干亚克隆后测定了其全部DNA序列,结果显示该插入片段含2709碱性蛋白酶及其信号肽与导肽(Pro-peptide)在内的全部编码序列(1140碱基对)及长度分别为299和832碱基对的上、下游序列,该序列同M.Jacobs等克隆的地衣芽孢杆菌NCIB6816的Subtilisin Carlsberg基因序列显示了极高的同源性。通过枯草杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBE2将克隆的2709碱性蛋白酶基因转入到蛋白酶缺陷型的枯草芽孢杆菌DB104中,结果表明2709碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌中得到了明显的表达。
- 洪扬雷虹赵玉风韩玉珉申同健
- 关键词：地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因
- 在双链DNA上直接进行的多点突变
- 1990年
- 基因的定点突变已经成为基因修饰及蛋白质工程等研究中的重要技术。在现今的定点突变方法中,以利用M13等单链DNA作模板的引物延伸法及缺口双链法最为常用。但有些基因,特别是某些较大的真核基因,在M13中常不够稳定。因此,除了改进载体性能以外,
- 朱榴琴申同健
- 关键词：双链DNA多点突变
- 水蛭素的抗凝抗血栓形成作用被引量：1
- 1992年
- 水蛭素是从医用水蛭(蚂螨)的唾液腺中分离纯化的一种多肽物质。通过家兔的体内急性实验,即耳静脉注射230ATU/kg,观察到水蛭素明显地延长凝血酶原时间和凝血酶凝结时间。耳静脉注射后二小时,其作用效果达到高峰。且水蛭素具有明显的抑制血栓形成作用。
- 范亚明张颖杜兰萍王朋王绿娅申同健韩玉珉葛庆远
- 关键词：水蛭素抗血栓形成
- 水蛭素的分子生物学研究被引量：18
- 1991年
- 本文从分子生物学的角度简述了蛋白酶抑制剂水蛭素的生物学和临床医学作用,结构特点,结构与功能关系,水蛭素与凝血酶之间的作用方式,以及水蛭素基因的克隆与表达。同时还指出了水蛭素基因的复杂性。水蛭素基因结构的阐明,基因的表达调控,将成为今后研究的重要方向之一。
- 韩玉珉申同健
- 关键词：水蛭分子生物学水蛭素
- 芽孢杆菌β-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：1
- 1993年
- 本工作采用新设计的营养缺陷型淘汰筛选法,从本实验室筛选的芽孢杆菌Bacillus R2中分离到能够水解生淀粉的β-淀粉酶基因。该基因所在的DNA片段为5.25kb,在大肠杆菌(E.coli)中的表达产物具有与供体菌相同的淀粉酶特性,实验室条件下酶产量为500IU/ml以上,RDA值为57%,并且可以全部分泌到培养基中。
- 王为先张沁申同健
- 关键词：Β-淀粉酶基因克隆芽孢杆菌
- 酵母分泌产生与人载脂蛋白AI类似的蛋白质被引量：3
- 1990年
- 大量研究确认,人类罹患动脉粥样硬化和冠心病的危险性,与血中高密度脂蛋白的含量有密切关系.高密度脂蛋白能够将外周组织的胆固醇转移至肝脏代谢排出,从而防止了胆固醇在动脉壁的沉积.载脂蛋白AI(简称做apoAI)是高密度脂蛋白中主要蛋白成分,在胆固醇的转运中起着重要的作用。
- 申同健剧冬红
- 关键词：酵母分泌载脂蛋白AI
- 重组水蛭素的纯化和鉴定被引量：16
- 1991年
- 本文报导了化学合成的水蛭素基因在酵母细胞中得到表达,井能分泌水蛭素到胞外。将该菌株培养物的上清液经硫酸铵沉淀和Sephadex G-50过滤后,用DEAE-SephadexA-25进行阴离子交换层析,进而用HPLC反相层析,得到表达产物重组水蛭素。经SDS-PAGE,氨基酸序列分析,抗凝血酶活力分析及血浆滴定实验等方法鉴定,证明该基因表达产物与天然水蛭素HV_2相同。
- 韩玉珉葛庆远王增丰郭尧君申同健
- 关键词：重组水蛭素多肽提纯
- 地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶编码序列的PCR扩增、克隆及序列测定被引量：19
- 1993年
- 在地衣芽孢杆菌NCIB 6816菌株碱性蛋白酶基因已知序列的基础上,通过设计合适的引物,利用PCR(Polymerase Chain Reaction)技术从地衣芽孢杆菌2709菌株的柒色体DNA中扩增了2709碱性蛋白酶的编码序列。对两个克隆的PCR片段的全序列分析结果显示,2709碱性蛋白酶的编码序列同相应的NCIB 6816序列相比有3％左右的碱基组成差异。由此推定的2709碱性蛋白酶的氨基酸序列肯定了2709碱性蛋白酶属典型的subtilisin Carlsberg类,同时还表明来源于不同地衣芽孢杆菌菌株的subtilisin Carlsberg存在着若干氨基酸组成上的差异。
- 雷虹洪扬张玉瑛申同健
- 关键词：地衣芽孢杆菌蛋白酶
