- 组蛋白脱乙酰化酶4N-末端和C-末端片段的原核表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 目的在大肠杆菌中分别表达组蛋白脱乙酰化酶4(HDAC4)N-末端(1-1950bp)和C-末端(1708-3255bp)片段与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并进行纯化。方法应用PCR方法扩增HDAC4N-末端和C-末端片段,将目的基因插入GST融合载体pGEX-6P-1中,重组载体在酶切鉴定和序列测定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达GST-HDAC4-N'和GST-HDAC4-C'蛋白。经SDS-PAGE及Western blotting鉴定表达产物后,用谷胱苷肽琼脂糖珠纯化目的蛋白。结果经测序、酶切鉴定证明成功构建了融合蛋白表达质粒,表达出的融合蛋白经SDS-PAGE分析其相对分子量约为110500和93080。Western blotting分析证实融合蛋白可以被HDAC4特异性抗体所识别。结论成功构建了融合表达载体(pGEX-6P-1/HDAC4-N'和pGEX-6P-1/HDAC4-C'),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可以进一步用于HDAC4与其他蛋白质相互作用的研究。
- 杨洋覃小翠刘书虎黄威王雪敏
- 关键词：原核表达融合蛋白
- PPARγ在神经系统中能够促进IRS-4基因表达被引量：1
- 2013年
- 目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)对脑内胰岛素受体底物-4(IRS-4)基因表达的影响。方法体外实验采用原代培养1周的大鼠皮层神经元,用10μmol/L PPARγ激动剂罗格列酮分别处理0、1、4、24 h;体内实验选取成年C57BL/6J小鼠和脑内PPARγ条件性敲除(BKO)小鼠,分别按12 mg/kg腹腔注射罗格列酮(10%DMSO溶解)或同等剂量10%DMSO作用12 h。利用MTT法检测原代培养皮层神经元存活率;实时定量PCR法检测神经元及皮层组织内IRS-4 mRNA的变化情况。结果各处理组皮层神经元存活率与对照组相比无显著性差异;罗格列酮处理的皮层神经元,C57BL/6J小鼠和BKO小鼠皮层内IRS-4 mRNA水平较对照组均明显增高;未处理的BKO小鼠皮层内IRS-4 mRNA水平较对照组显著降低。结论 PPARγ在神经系统中能够促进IRS-4表达。
- 章红妍蒙思颖林利芳吴巧琪周日阳王雪敏
- 关键词：大脑皮层罗格列酮过氧化物酶体增殖物激活受体Γ
- 化合物tovophyllin A在制备治疗帕金森病的药物中的应用
- 本发明公开了化合物tovophyllin A在制备治疗帕金森病的药物中的应用。本发明从山竹中分离纯化得到化合物tovophyllin A，通过离体和在体实验发现，化合物tovophyllin A对MPP<Sup>+</S...
- 王雪敏孙丽荣黄燕君高天明李晓文
- 文献传递
- 连续5d快速动眼睡眠剥夺诱发小鼠迟发性抑郁样行为被引量：8
- 2016年
- 目的：探讨连续长时间快速动眼睡眠剥夺（5 d）对C57BL/6J小鼠抑郁样行为和杏仁核单胺氧化酶A水平的影响。方法成年雄性C57BL/6J小鼠随机分成空白组、对照组和快速动眼睡眠剥夺组，通过多小平台水环境法建立快速动眼睡眠剥夺模型。睡眠剥夺结束后，于不同时间点采用旷场实验检测各组运动能力，强迫游泳实验和糖水偏好实验检测各组抑郁样行为。之后，取脑分离杏仁核，利用Western Blot和Real-time PCR检测各组单胺氧化酶A的表达水平。结果快速动眼睡眠剥夺后的1~3 d内，睡眠剥夺小鼠运动能力明显下降，第4天可恢复到正常水平；第7~14天强迫游泳实验显示小鼠不动时间延长；糖水偏好率也明显降低。Western blot和Real-time PCR检测发现杏仁核中单胺氧化酶A表达水平明显升高。结论连续长时间快速动眼睡眠剥夺导致小鼠迟发性抑郁样行为，该现象很可能与杏仁核单胺氧化酶水平变化有关。
- 陈璐王震王雪敏
- 关键词：抑郁样行为杏仁核单胺氧化酶
- 亲代因素对后代神经系统发育的表观遗传学影响
- 2015年
- 表观遗传学是研究基因的核苷酸序列不发生改变的情况下,基因表达了可遗传的变化的一门遗传学分支学科,又被称为非孟德尔遗传。这种改变的获得是在个体发育、生长及后天经历中通过DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑和非编码RNA调控等方式实现的。人类基因组大约包含23000个功能基因,细胞的生长需要这些功能基因在特定的时间条件下准确表达。真核细胞基因组和组蛋白紧密地组装在一起,形成一个个构成染色质的基本单位--核小体。
- 李朝明符聪聪王雪敏
- 关键词：表观遗传学组蛋白乙酰化
- 神经干细胞特异性PPARγ基因敲除小鼠模型的制备与鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的制备与鉴定神经干细胞特异性PPARγ基因敲除小鼠模型。方法将引进的2种转基因小鼠B6.PPARγloxp/loxp、B6.Nestin-Cre进行饲养并杂交繁殖,将子一代小鼠与B6.PPARγloxp/loxp小鼠回交获得子二代小鼠,提取子二代小鼠的基因组DNA,利用PCR方法扩增Cre和loxp基因片段,并进行琼脂糖凝胶电泳检测。选取基因型为B6.PPARγloxp/loxp.Nestin-Cre(KO)的小鼠即为神经干细胞特异性敲除PPARγ的敲除小鼠,另选基因型为B6.PPARγloxp/loxp(loxp)作为对照组小鼠。应用RT-PCR、实时荧光定量PCR方法鉴定神经干细胞特异性敲除PPARγ的敲除小鼠。结果敲除小鼠在基因鉴定时可以扩增得到PPARγloxp和Cre两个条带,在mRNA表型检测时脑内PPARγ表达显著低于对照组小鼠。成功获得神经干细胞敲除PPARγ基因的敲除小鼠。所购2种转基因小鼠均有繁殖能力,其繁殖符合孟德尔遗传规律。结论基于loxp-Cre系统成功构建神经干细胞特异性敲除PPARγ的基因敲除小鼠,为进一步的神经系统疾病的治疗及其机制研究提供模型基础。
- 吴巧琪章红妍王震林利芳陈璐王雪敏
- 关键词：PPARΓPEROXISOME
- 帕金森病相关转录因子的研究进展被引量：6
- 2011年
- 帕金森病（Parkinson’s disease：PD），是锥体外系功能紊乱引起的一种慢性中枢神经系统退行性疾病，多发于中老年人并严重影响其生活质量。目前该病的病因尚不明确，得到大多数学者公认的是多巴胺缺失学说。近年来，氧化应激一自由基学说以及中脑多巴胺神经元的分化发育和存活在帕金森病发病机制中的作用也逐渐得到重视。
- 吴珍珍王雪敏
- 关键词：帕金森病相关转录因子中枢神经系统退行性疾病自由基学说锥体外系生活质量
- miR-124a通过抑制iASPP基因表达促进神经突起生长被引量：4
- 2014年
- 目的探索miR-124a的靶基因iASPP对神经发育的影响。方法利用在线预测软件TargetScan对miR-124a的靶基因进行预测,结合文献资料提到的与神经早期发育有关的基因进行筛选,我们选择iASPP作为miR-124a的候选靶基因。通过荧光素酶报告基因实验对其进行验证,然后在M17细胞中转染miR-124a过表达质粒,用Western blotting实验检测iASPP蛋白表达水平的变化。利用视黄酸诱导M17细胞作为神经元分化模型,通过过表达或者基因干扰的方法,初步探讨iASPP基因对神经发育的影响。结果 miR-124a促进神经突起发育,并且能够与iASPP基因的3'非翻译区(3'UTR)相互作用来抑制其蛋白质的表达;iASPP基因的过表达抑制神经突起的发育并且抑制miR-124a促进神经突起生长的作用。结论 miR-124a能够通过抑制iASPP基因的表达来促进神经突起生长。
- 林利芳谷溪刘书虎王雪敏
- 关键词：IASPP神经发育突起生长
- 抗焦虑新靶点的基础研究
- 高天明李勃兴孙向东吕义晟王雪敏毕琳琳刘吉红朱心红袁春华李晓文李树基揭威谷溪关艳中覃小
- 病理性焦虑是最常见的精神疾病，主要包括焦虑障碍、创伤后应激障碍等，对其发病机制仍不清楚，临床上抗焦虑药物治疗存在有效率低、副作用大及停药后高复发率等问题。因此，阐明病理性焦虑的发病机制，寻找抗焦虑的新药靶是神经科学领域的...
- 关键词：
- 关键词：精神疾病药物治疗
- 化合物tovophyllin A在制备治疗帕金森病的药物中的应用
- 本发明公开了化合物tovophyllin A在制备治疗帕金森病的药物中的应用。本发明从山竹中分离纯化得到化合物tovophyllin A，通过离体和在体实验发现，化合物tovophyllin A对MPP<Sup>+</S...
- 王雪敏孙丽荣黄燕君高天明李晓文
- 文献传递
