王天英
- 作品数：11 被引量：12H指数：3
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- 带3蛋白C末端与血型糖蛋白A在哺乳动物细胞内相互作用的研究被引量：2
- 2003年
- 目的 研究人类红细胞带 3蛋白C末端与血型糖蛋白A(GPA)之间在哺乳动物细胞内的相互作用。方法 利用穿梭位点 ,将AE1 c end和GPA的基因从pGADT7 AE1 c end和pGBKT7 GPA中分别亚克隆至pM和pVP16载体上 ,将pVP16 AE1 c end、pM GPA及报告基因质粒pG5CAT共同转染HeLa细胞 ,采用ELISA检测报告基因CAT蛋白 (氯霉素乙酰转移酶 )的活性。结果 转染后 4 8～ 72h检测到CAT蛋白的表达 ,其表达水平和活性明显高于阴性对照。结论 本实验在哺乳动物细胞内证明了带 3蛋白C末端与GPA之间有直接的相互作用。
- 孙瑛王天英刘利梅姜晓姝史从宁郭卓维傅国辉
- 关键词：血型糖蛋白A哺乳动物细胞内
- 三氧化二砷诱导表达带3蛋白膜段结构域K562细胞凋亡作用的研究(英文)
- 2003年
- 目的 探讨三氧化二砷诱导表达带 3蛋白膜段结构域K5 6 2细胞凋亡的作用。方法 将纯化的表达载体pYD1 mdb3转染K5 6 2细胞 ,WesternBlot检定有带 3蛋白膜段结构域的表达 ;通过光学显微镜、DNA电泳和线粒体膜电位的测定 ,观察三氧化二砷对表达带 3蛋白膜段结构域的K5 6 2细胞凋亡的影响。结果 表达带 3蛋白膜段结构域的K5 6 2细胞的上述凋亡特征均比未表达带 3蛋白的K5 6 2细胞明显。结论 表达带 3蛋白膜段结构域的K5 6
- 刘利梅王天英姜晓姝SHI Cong-ningGUO Zuo-weiFU Guo-hui
- 关键词：三氧化二砷K562细胞凋亡
- 带3蛋白C-末端与血型糖蛋白A及P16相互作用的研究
- 带3蛋白,又称阴离子交换蛋白1(Anion Exchanger1,AE1),是红细胞膜上一种重要的跨膜糖蛋白质,介导Cl<'->/HCO<,3><'->的跨膜交换过程,它由3个结构域组成,其中C端域的结构与功能尚未完全阐...
- 王天英
- 关键词：带3蛋白血型糖蛋白AP16酵母双杂交
- 文献传递
- GST-p16融合蛋白的表达、纯化及鉴定
- 2004年
- 目的 利用GST融合基因表达系统表达、纯化及鉴定GST p16融合蛋白。方法 以质粒pM p16为模板 ,扩增出p16基因片段 ,将其克隆至大肠杆菌表达载体pGEX 6P 1,将所构建的重组质粒pGEX p16转化大肠杆菌BL2 1并诱导表达 ,采用GST蛋白纯化系统进行纯化 ,所得产物进行SDS PAGE及Westernblot鉴定。结果 大肠杆菌细胞经诱导高效表达出约 4 2kD蛋白 ,其分子量与GST p16融合蛋白相符。Westernblot结果显示该蛋白能够被p16抗体特异性识别。结论 本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了有活性的GST
- 史从宁吕凤祥王天英郭卓维傅国辉
- 关键词：P16WESTERNBLOT
- 带3蛋白C末端132个氨基酸残基与血型糖蛋白A相互作用位点的研究
- 2003年
- 目的 利用酵母双杂交系统探寻带 3蛋白与血型糖蛋白A(GPA)的相互作用位点。方法 采用PCR方法 ,从pFAST Bac AE1 C end杆状病毒表达载体中扩增出AE1 C end截断突变体 (Arg832 Arg879) ,将突变体的cDNA片段插入酵母双杂交系统GAL4AD端表达载体中 ,观察其在选择性培养基上的表达情况。用醋酸锂法将构建好的重组质粒与BD端表达质粒共同转化酵母菌AH10 9,经酵母双杂交营养缺陷培养和 β 半乳糖苷酶检测证实带 3蛋白C 末端与GPA之间的作用位点。结果 成功构建了AE1 C 末端截断突变体酵母双杂交的AD端表达质粒 ,证实带 3蛋白C 末端截断突变体与GPA不止有一个相互作用位点。结论 带 3蛋白与GPA的作用位点不仅在带 3蛋白的酸性C端域 。
- 王天英刘利梅姜晓姝史从宁郭卓维傅国辉
- 关键词：带3蛋白血型糖蛋白A酵母双杂交系统氨基酸残基
- 恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白表达及其对K562细胞生长的影响被引量：3
- 2005年
- 背景与目的:带3蛋白介导Cl-/H CO3-的跨膜交换,从而调节细胞内pH值。有学者证实,Cl-/H CO3-交换的异常可引起细胞内pH值明显改变,使细胞发生增殖或凋亡。本研究旨在探讨红细胞膜带3蛋白的表达及其对K562细胞生长的影响。方法:以SPQ为荧光探针测定8例恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白的阴离子转运活性,W estern blot检测带3蛋白表达。转染带3蛋白膜段结构域cDNA至K562细胞,观察带3蛋白膜段结构域表达后对K562细胞阴离子转运活性及细胞增殖的影响。结果:7例恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白的离子转运活性明显增强,5例蛋白质表达增强。同时发现带3蛋白膜段结构域表达于K562细胞膜后,对K562细胞生长有一定促进作用。结论:带3蛋白在部分恶性肿瘤患者红细胞膜表达增强,可作为恶性肿瘤的一种潜在标志物。
- 白淑芝刘晓滨席玉慧王天英傅国辉
- 关键词：带3蛋白肿瘤
- Asp896～Val911缺失的阴离子交换蛋白1C末端表达质粒的构建被引量：1
- 2002年
- 目的 构建Asp896～Val911缺失的阴离子交换蛋白 1(AnionExchange1,AE1)C末端表达质粒。方法 利用PCR方法 ,以pFAST Bac AE1 C end为模板 ,扩增出AE1后 16位氨基酸Asp896～Val911缺失的C末端基因 ,将其克隆至pGADT7载体上。用醋酸锂法将构建好的pGADT7 AE1 c end truncation转染酵母菌AH10 9,观察其在选择性培养基上的表达情况。结果 成功构建了AE1缺失后 16位氨基酸的C末端表达质粒。结论 重组质粒pGADT7 AE1 c end truncation对酵母无毒性 ,不能激活检测基因 ,可作为酵母双杂交系统中的靶基因。
- 黄丽滨王天英刘利梅姜晓姝傅国辉
- 关键词：基因克隆
- 人类红细胞膜带3蛋白C端域Lys892～Phe895在Cl^-转运过程中作用的研究被引量：6
- 2003年
- 采用酵母表面展示系统 ,表达带 3蛋白膜段结构域 (Gln4 0 4～Val911)至酵母细胞膜 ,功能研究表明 ,表达后的膜段结构域具有离子转运的活性 ,同时 ,带 3蛋白抑制剂 4 ,4′ 二异硫氰 2 ,2′ 二黄酸芪 (DIDS)能够抑制其离子转运的功能 .利用PCR方法 ,以 pFAST Bac mdb3为模板扩增出带 3蛋白膜段结构域的 4种截断突变体 ,分别去除带 3蛋白C端域后 4个 (Ala90 8～Val911)、 16个 (Asp896～Val911)、 2 0个 (Lys892～Val911)、 32个(Asn880～Val911)氨基酸序列 ,测序后将其克隆至表达载体 pYD1上 ,构建酵母表达质粒 pYD1 Trunc4、pYD1 Trunc16、pYD1 Trunc2 0和 pYD1 Trunc32 ,诱导 4组突变体的蛋白质表达 .然后测定Cl-的转运活性 ,结果发现去除后 2 0个 (Lys892～Val911)氨基酸残基后 ,离子转运活性明显下降 ,而去除后 32个 (Asn880～Val911)后 ,离子转运没有进一步下降 ,说明Lys892～Phe895 4个氨基酸残基在带
- 刘利梅傅国辉王天英姜晓姝郭卓维史从宁
- 关键词：带3蛋白
- p16蛋白过表达对哺乳动物细胞带3蛋白阴离子交换功能的影响被引量：3
- 2004年
- 目的 :研究p16过表达对HeLa细胞带 3蛋白 (band 3)阴离子交换功能的影响。方法 :细胞免疫组织化学法检测HeLa细胞中p16和带 3蛋白的表达。采用PCR方法将p16cDNA亚克隆到pEGFP -C1上 ,经双酶切和DNA测序鉴定后将其转染HeLa细胞 ,在荧光显微镜下观察细胞转染效率。应用 6甲基 - 3-磺丙基 - 1-喹啉 -水化合物 (SPQ)荧光探针检测带 3蛋白的阴离子交换功能。结果 :在HeLa细胞中p16和带 3蛋白表达均为阳性。双酶切和DNA测序结果证明所扩增的p16cDNA序列与报道序列相同。细胞转染后在荧光显微镜下可观察到 6 0 %以上的细胞发出荧光。转染pEGFP -C1-p16后细胞的阴离子交换功能增强。结论 :p16对HeLa细胞带 3蛋白的阴离子交换功能有促进作用。
- 田丽峰席玉慧白淑芝王天英姜晓姝钟志玖傅国辉
- 关键词：蛋白质P16HELA细胞
- 利用定点突变技术构建血型糖蛋白Ac末端突变体
- 2004年
- 目的 构建血型糖蛋白A(GlycophorinA)c末端突变体 ,为GPAc末端与阴离子交换蛋白 1(AnionExchang er1,AE1)酸性c端域相互作用位点研究奠定基础。方法 以pM GPA Ct为基础质粒 ,利用TransformerTM定点突变技术 ,构建GPAc末端突变体pM GPA L118F、pM GPA S119R。结果 经过测序证实突变成功。结论 本实验成功构建了GPAc末端的突变体 ,并证实TransformerTM定点突变方法具有简便、突变效率高等优点 ,是体外构建突变体的有效方法。
- 吕凤祥彭琳一王天英傅国辉
- 关键词：定点突变突变血型糖蛋白A
