王亮
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- WT1蛋白CTL表位肽基因载体的构建与鉴定
- 2013年
- 目的构建WT1(Wilms’tumor gene 1)蛋白CTL表位肽基因载体,并检测其在293T细胞中的转录。方法设计分别含WT1-126肽、WT1-235肽以及这两种肽的基因载体,并加入Th通用表位Pan-DR-Th(PADRE),应用蛋白酶体切割软件PAProC和NetChop优化各表位和间隔序列,DNA疫苗在线预测工具DyNAVacS优化真核密码子后,人工合成核苷酸序列,分别插入pUC57载体,构建pUC57-WT1质粒,测序鉴定后,酶切回收各目的片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒,转染293T细胞,RT-PCR检测各目的基因在293T细胞中的转录。采用无内毒素质粒大量提取试剂盒提取各重组质粒,采用紫外分光光度计测定质粒的纯度和浓度。结果各重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证实构建正确;重组质粒携带的目的基因可在293T细胞中成功转录;各重组质粒DNA的纯度均合格,浓度在864.6～883.9μg/ml之间。结论成功构建了WT1蛋白CTL表位肽基因载体,并能在真核细胞中正常转录,为下一步在小鼠体内探讨特异性不同的CTLs群发挥抗肿瘤作用的机制奠定了基础。
- 彭霞樊卫平张凯苑晓娟刘玲玲王亮
- 关键词：细胞毒性T淋巴细胞表位肽DNA疫苗
- 凝血与抗凝血中T细胞活性的分析被引量：1
- 2014年
- 目的探索凝血块中提取淋巴细胞的方法 ,分析抗凝血与凝血块中T细胞的活性。方法剥离凝血块并转移至过滤网上,生理盐水湿润并在滤网上轻柔研磨凝血块,收集滤过细胞。淋巴细胞分层液分别分离抗凝血与等量血凝块研磨过滤细胞,获取PBMC,流式细胞术检测并比较T细胞表面CD分子表达情况。T细胞增殖试验检测并比较抗凝血与凝血块放置不同时间(4,8,12和24 h)所得PBMC中T细胞的增殖活性。结果 2种血样所得T细胞表面CD标志的百分率无差别(P>0.05)。血液凝固12 h内不影响所得T细胞的活性(各组SI比较,P>0.05)。结论获得了凝血块提取淋巴细胞的方法,并证明此方法不影响凝血12 h内所得T细胞的活性。
- 王亮潘丽邓智毅周瑞訾昌丽樊卫平
- 关键词：凝血块T淋巴细胞活性
- 人巨细胞病毒PP65抗原ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2014年
- 目的用制备好的兔和大鼠PP65多克隆抗体建立检测人巨细胞病毒PP65抗原的ELISA方法。方法优化ELISA检测条件,建立检测PP65抗原的标准曲线,确定检测方法的精密度及检出下限。通过对101份临床疑似HCMV感染标本的检测,并与HCMV-IgM(ELISA)以及HCMV-DNA(FQ-PCR)检测结果的比较,分析了该方法的敏感性和特异性。分别检测HSV-1、HSV-2以及EB病毒感染血标本各5份,分析该方法是否非特异结合疱疹病毒科其他病毒抗原。结果以1∶2 000大鼠pAb包被酶标板,以1∶20 000兔pAb为检测一抗,建立了检测PP65抗原血症的ELISA方法。批间精密度与批内精密度均小于10%,检出下限为5 ng/ml。本方法检测的敏感性和特异性与HCMV-DNA(FQ-PCR)无差别(P>0.05),但敏感性高于HCMV-IgM(ELISA)方法(P<0.05)。对HSV-1、HSV-2以及EB病毒感染标本的检测结果均为阴性,排除了该方法非特异结合疱疹病毒科其他病毒抗原的可能。结论建立了检测PP65抗原血症的间接双抗夹心ELISA方法,该方法具有较好的敏感性、特异性、稳定性和重复性。
- 刘玲玲王亮李琳樊卫平
- 关键词：人巨细胞病毒PP65ELISA多克隆抗体
