潘秀英
- 作品数：15 被引量：73H指数：5
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- RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测microRNA
- MicroRNAs(miRNAs)是一类由～22个核苷酸组成的单链非编码RNA,由于对基因表达具有转录后调节作用，引起了人们的特别关注。本文简要论述了microarray法实现了高通量检测，但敏感性不高，可用于初步筛查;...
- 张旗何湘君潘秀英
- 关键词：实时定量检测MICRORNA
- 文献传递
- 通过引物设计和提高退火温度提高实时定量PCR检测microRNA的特异性(英文)被引量：6
- 2009年
- 目的:了解因某些microRNA(miRNA)家族成员序列相似,以及同一种成熟miRNA的长度不均一对PCR定量检测结果的影响,寻找区分相似miRNA成员和准确定量的方法和条件。方法:采用RNA加尾和引物延伸实时定量RT-PCR法,设计不同位置错配的引物,以克隆到质粒中的全长成熟miRNA为模板,比较在不同退火温度下各种错配引物与完全匹配引物在扩增miRNA上的效率差异,并根据由此得出的经验设计let-7家族成员引物,以克隆的成熟miRNA为模板,检测其在不同退火温度下区分相似家族成员的能力。此外,设计了10组3′末端碱基位置不同的特异引物,比较了它们在检测小鼠大脑miRNA表达水平上的差异。结果:提高退火温度12℃～14℃将最大限度增加特异性而不降低敏感性,将引物的3′末端置于差异碱基或其附近可以有效区分相似miRNA序列,将引物3′末端置于miRNA第18～20个碱基,可避免漏检较短的成熟miRNA,使定量更真实准确。结论:精心设计引物并提高退火温度可提高实时定量PCR检测microRNA的特异性和准确性。
- 何湘君张旗刘玉京潘秀英
- 关键词：微RNAS逆转录聚合酶链反应DNA引物
- 肌球蛋白轻链激酶在非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型肠黏膜屏障变化中的作用被引量：4
- 2015年
- 目的 研究肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠模型肠黏膜屏障变化中的作用,探讨肠黏膜屏障在NASH发病中的作用机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为正常饮食对照组、单纯性脂肪肝（NAFL）组、NAFL加MLCK特异性抑制剂ML-7组（NAFL＋ ML-7组）,NASH组以及NASH＋ ML-7组,每组为10只小鼠.HE染色法观察各组肝组织病理改变,免疫组化法测定小肠上皮中MLCK的表达,透射电镜观察小肠上皮细胞间紧密连接形态并测量细胞间隙宽度,ELISA法检测门静脉中内毒素脂多糖（LPS）浓度,测定外周血中转氨酶水平,ELISA和实时定量PCR法检测肝脏组织中炎性因子的浓度和mRNA表达.结果 NASH组小肠上皮细胞中MLCK表达量明显高于正常饮食对照组（P＜0.01）.NASH组紧密连接结构紊乱,细胞间隙宽度显著大于正常饮食对照组[（26.60±1.20） nm比（14.90±0.33） nm,P＜0.05],给予MLCK抑制剂ML-7后（NASH＋ML-7组）,紧密连接结构恢复,细胞间隙宽度[（14.90 ±0.67）nm]较NASH组明显减小（P＜0.05）.NASH组小鼠门静脉中LPS浓度显著高于正常饮食对照组[（7.260 ±3.184） U/L比（2.962±0.845）U/L,P＜0.05],NASH＋ ML-7组门静脉中LPS浓度[（3.772±1.033） U/L]显著低于NASH组（P＜0.05）.NASH组外周血ALT及AST水平明显高于正常饮食对照组（P均＜0.05）,肝脏中炎性因子TNFα、IL-6浓度及TNFα、IFM、NF-κB的mRNA水平显著高于正常饮食对照组（P均＜0.05）;给予MLCK抑制剂后（NASH＋ ML-7组）,外周血ALT和AST水平、肝脏中TNFα和IL-6浓度、肝脏中TNFα和NF-κB的mRNA水平均显著低于正常饮食对照组（P均＜0.05）.结论 NASH阶段小鼠肠黏膜通透性增加,MLCK可能在其中具有十分重要的调节作用,抑制MLCK后可以有效降低实验动物肠黏膜通透性,从而防治NASH.
- 张媛媛李晶迟毓婧李玫潘秀英张旗何湘君刘玉兰
- 关键词：肌球蛋白轻链激酶脂肪性肝病非酒精性肠道黏膜屏障
- RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测microRNA被引量：32
- 2007年
- 目的:用改进的RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测组织中的microRNAs(miRNAs),并评价其敏感性和特异性。方法:提取组织中的小于200bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3′末端加尾,再用5′带40nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,得到约80nt的cDNA,然后用特异引物进行SYBRGreen实时定量PCR扩增。结果:该法线性范围宽,可检测低丰度的miRNAs,能特异区分3′末端碱基不同的亚型,但对序列中间个别碱基不同的亚型不能鉴别。对15种miRNA在大鼠心、肝和大脑皮层的相对表达的检测验证了该法的可靠性。另外,海马组织中的miRNAs表达与大脑皮层组织有一定差异。熔解曲线的单一峰型和电泳检测到的单一条带都证明了扩增的特异性。结论:该法可快速、敏感地检测不同组织中大多数miRNAs的表达差异,可用于寻找组织特异及疾病相关的miRNAs。
- 张旗何湘君潘秀英
- 关键词：微RNAS逆转录聚合酶链反应
- 同源异型盒基因CDX1和CDX2使食管腺癌细胞恶性降低被引量：1
- 2006年
- 目的探讨同源异型盒基因CDX1和CDX2对食管腺癌细胞表型的影响。方法用携带人CDX1或CDX2的表达载体转染食管腺癌细胞系SEG-1,观察形态、生长率变化、分裂指数、致瘤性等。结果CDX1或CDX2单独作用都使SEG-1出现类腺样生长排列、生长率下降、分裂指数降低、致瘤性减弱,CDX2的作用大于CDX1。结论CDX1和CDX2均能促进食管腺癌细胞SEG-1分化,减低其恶性。
- 马丽萍李娜潘秀英董建强陈晓欣
- 关键词：CDX2食管腺癌
- 敲低Abl相互作用蛋白1的表达抑制胃癌细胞NCI-N87的体外增殖和迁移被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨敲低Abl相互作用蛋白1（Ablinteractor1，ABI．1）对胃癌NCI．N87细胞体外增殖和迁移能力的影响。方法利用脂质体和嘌呤霉素筛选稳定表达ABI．1短发夹RNA（shorthairpinRNA，ShRNA）的NCI—N87模型细胞，用实时定量RT-PCR和Westernblot鉴定ABI．1敲低的效果；用CCK-8试剂盒、细胞骨架染色和Transwell小室检测ABI-1敲低对细胞增殖、形态和骨架以及迁移的影响；用Westernblot检测磷酸化AKT蛋白的表达。结果成功获得表达ABI-1．ShRNA的NCI-N87细胞模型。CCK-8法检测显示NCI-N87-Vector和NCI-N87细胞在36h和48h的增殖率之间相比差异均无统计学意义（t=0．400、0．489，P〉0．05），而NCI．N87．ABI－1－ShRNA在36h和48h这2个时间点的增殖率均低于NCI－N87细胞（t=2．85、4．166，P〈0．05），ABI－1敲低抑制NCI．N87细胞的增殖。细胞骨架染色显示ABI-1敲低能够改变90％NCI－N87细胞的形态和骨架结构。Transwell研究显示NCI-N87、NCI－N87－Vector和NCI-N87-ABI-l—ShRNA的细胞迁移数分别是66±8、65±8和30±4，前两者相比差异无统计学意义（t=0．269，P〉0．05），敲低组与NCI．N87相比差异有统计学意义（t=9．550，P〈0．05），ABI－1敲低抑制NCI-N87细胞的迁移。WesternBlot显示ABI－1敲低抑制磷酸化AKT蛋白的表达。结论ABI-1敲低可能通过P13K／AKT通路抑制胃癌细胞NCI—N87的体外增殖和迁移。
- 李玫乔正国潘秀英何培英韩娜郁卫东
- 关键词：细胞运动
- gp96多肽复合物介导的细胞毒性T淋巴细胞对食管腺癌细胞的免疫杀伤作用被引量：5
- 2004年
- 目的 :研究肿瘤细胞来源的gp96多肽复合物介导的对同一类型肿瘤的免疫治疗作用。方法 :提取纯化食管腺癌细胞系SEG 1裸鼠成瘤组织的gp96蛋白多肽复合物 ,与外周血单个核细胞 (PBMNC)诱导培养的树突状细胞(DC)结合 ,制备gp96 DC疫苗 ;台盼蓝拒染法测定淋巴细胞增殖率 ;ELISA方法检测细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)培养上清液的γ干扰素 (IFN γ)含量 ,MTT法检测CTL对靶细胞SEG 1的杀伤率。结果 :5 5g瘤组织提取纯化gp96蛋白12 0 μg ;单独DC、单独gp96及gp96 DC均能刺激淋巴细胞增殖 ,产生CTL ,释放IFN γ ,对靶细胞SEG 1均显示一定的杀伤作用 ,以gp96 DC的作用最明显 ,在效靶比 4 0∶1时 ,杀伤率为 6 8%。单独DC诱导的CTL对SEG 1、K5 6 2的杀伤作用与非抗原刺激的淋巴细胞比较 ,统计学差异无显著性。结论 :肿瘤来源的热休克蛋白gp96可使DC具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力 ,所产生的CTL对靶肿瘤细胞有明显的特异杀伤作用。
- 马丽萍潘秀英李娜刘玉京陈晓欣
- 关键词：热休克蛋白GP96杀伤作用细胞毒性T淋巴细胞食管腺癌介导
- 肝癌患者体内检测出血衍吗啡素-6
- 2005年
- 组织特异性肽池的含量和成分是组织状态的重要特征,由组织中供酶解的蛋白底物的含量及其可利用率,以及蛋白酶的活性决定的[1].一些病变可伴有组织中功能蛋白降解片段的含量和成分的改变[1,2].因此,组织特异性肽池的变化常常可以反应出机体的某些病变.本研究利用液-质联用技术从1例肝癌患者体内检测出一条天然的阿片类肽--Leu-Val-Val(LVV)-血衍吗啡素-6,并观察肝癌组织和正常肝组织的组织特异性肽池间是否存在差异.
- 周迈彭吉润王红霞钟朝辉郭晏同潘秀英冷希圣
- 关键词：肝癌癌组织癌细胞
- 急性白血病病人外周血单个核细胞端粒酶活性定量分析被引量：2
- 2002年
- 为建立一种简便、定量检测端粒酶活性的方法应用于白血病病人外周血单个核细胞 (MNC)端粒酶活性分析 ,在应用端粒重复序列扩增法后在扩增产物内加入荧光染料PicoGreen ,并在激发光 4 80nm和发射光 5 2 0nm下检测荧光强度。对 2 0例正常人和 2 5例急性白血病病人外周血单个核细胞的端粒酶活性进行了定量分析。结果表明 ,PicoGreen能特异结合双链DNA ,荧光强度随双链DNA量的增加而增加。结论 :该方法简便、快速 ,能定量 ,可用于急性白血病病人外周血单个核细胞端粒酶活性分析 。
- 马丽萍潘秀英闫钟钰张彦江滨王申五
- 关键词：急性白血病端粒酶活性外周血单个核细胞端粒酶端粒重复序列扩增法
- p16基因抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖的体外和体内实验研究
- 2000年
- 目的 :探讨p16基因对乳腺癌的治疗作用 ,为乳腺癌 p16的基因治疗提供实验依据。 方法 :构建p16的逆转录病毒载体 pLMSN ,包装成病毒后 ,体外转导p16基因纯合性缺失的乳腺癌细胞株MCF 7,Westernblot证明该基因在转导后的MCF 7细胞中有表达 ,用活细胞计数、流式细胞仪、形态观察等方法来检测 p16表达在体外对MCF 7细胞生物学行为的影响。进行SCID鼠体内成瘤实验和逆转录病毒直接注射SCID鼠乳腺癌模型的治疗性实验来观察 p16对乳腺癌细胞的体内抑制作用。 结果 :外源性 p16在MCF 7细胞中表达后 ,体外细胞发生形态改变 ,生长明显慢于对照细胞 ,流式细胞计数显示G1期细胞增多 ,细胞在SCID鼠体内成瘤性下降 ,p16逆转录病毒直接注射有使SCID鼠乳腺肿瘤缩小的趋势。结论
- 武莎莎马丽萍潘秀英刘玉京王申五
- 关键词：乳腺癌P16基因基因治疗
