目的应用小型猪实验动物模型评价iRoot BP Plus直接盖髓后修复性牙本质桥形成的情况以及牙髓的生物学反应。方法选取4只18月龄小型猪前磨牙26颗,制备直径为2mm穿髓孔,随机分3组:氢氧化钙组、MTA组和iRoot BP Plus组,进行直接盖髓。术后8周,组织病理学观察。结果 MTA组和iRoot BP Plus组均可以形成具有天然牙本质小管样结构及极性的成牙本质细胞层的钙桥。与MTA组相比,iRoot BP Plus组形成的钙桥质地较为均匀连续,牙髓组织炎症反应较轻,髓腔未见不规则钙化。氢氧化钙组表现钙桥较为疏松,冠部牙髓组织坏死,根髓可见不同程度的炎症反应,根管壁出现不规则钙化。结论 iRoot BP Plus和MTA盖髓明显优于传统的氢氧化钙。iRoot BP Plus在盖髓术中表现了良好的生物学特性。
目的运用CRISPR/Cas9技术构建EIF5A2基因敲除Cal27细胞系,观察EIF5A2在口腔鳞状细胞癌增殖与迁移中的作用。方法根据EIF5A2基因结构域,设计2个CRISPR靶向位点,利用pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin构建2个导向RNA(sgRNA)质粒。将sgRNA质粒与pST1374-NLS-flag-linker-Cas9共转染至Cal27细胞中,用嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选,并挑取单克隆。将单克隆细胞的DNA进行目的片段扩增,经凝胶电泳及测序鉴定后筛选出大片段敲除细胞株Cal27-2C5及碱基突变株Cal27-2D1。real time PCR及WesternBlot鉴定两株细胞系中EIF5A2的表达情况。用Transwell实验及CCK8分别检测EIF5A2敲除对Cal27细胞的体外迁移能力及体外增殖能力的影响。结果与对照组相比,Cal27-2C5及Cal27-2D1细胞株中EIF5A2在mRNA水平上表达均明显降低。在蛋白水平上,Cal27-2C5及Cal27-2D1细胞株中EIF5A2蛋白均基本不表达。敲除EIF5A2可明显降低Cal27细胞的体外迁移能力,而对Cal27细胞体外增殖能力没有明显影响。结论成功构建EIF5A2基因敲除Cal27细胞株Cal27-2C5和Cal27-2D1,并初步验证EIF5A2可以影响Cal27细胞的体外迁移能力。
