步雪峰
- 作品数：65 被引量：166H指数：6
- 供职机构：江苏大学附属人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金镇江市科技支撑计划(社会发展)项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Hsa_circ_0003449在人胃癌中表达及对胃癌细胞增殖和迁移作用
- 2022年
- 环状RNA是一种特殊的非编码RNA,在肿瘤发生发展中起着重要作用。通过高通量测序技术对5对确认为癌组织及癌旁正常组织进行检测,分析筛选出差异性环状RNA hsa_circ_0003449,通过qRT-PCR进行验证后,使用siRNA进行基因敲减,利用细胞克隆试验、平板划痕试验及transwell试验等检测胃癌细胞功能的改变,通过生物信息网站预测基因靶点TP73蛋白,敲减hsa_circ_0003449后检测蛋白质水平上的改变。结果表明:在人胃癌组织中,hsa_circ_0003449表达水平明显高于癌旁正常组织;在胃癌患者血清中,hsa_circ_0003449表达水平也高于健康体检者血清中表达水平;在胃癌细胞株(SGC-7901、BGC-823、HGC-27、MGC-803)中,hsa_circ_0003449表达水平均高于正常人胃黏膜上皮细胞株(GES-1)。在人胃癌细胞株中通过siRNA对hsa_circ_0003449的敲减引起肿瘤增殖及迁移能力下降。同时胃癌细胞株中hsa_circ_0003449的敲减会引起靶点TP73蛋白的表达水平下降。这一研究成功验证了hsa_circ_0003449在胃癌中高表达,且敲减hsa_circ_0003449后可抑制人胃癌细胞增殖、迁移等能力,为进一步探究hsa_circ_0003449成为胃癌早期诊断标志物和治疗靶点提供了理论基础。
- 蔡烨伟王灵霞袁海涛曹碧月周晓东张垚步雪峰
- 关键词：胃癌细胞增殖细胞迁移
- rL-IL29对肺腺癌A549细胞生物学特性的影响及相关机制被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨表达IL-29的重组新城疫病毒LoSota株(recombinant Newcastle disease virus LoSota line expressing IL-29,rL-IL29)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制。方法:体外培养肺腺癌A549细胞,以rL-IL29感染的A549细胞为rL-IL29组,LoSota株新城疫病毒(NDVL)感染的A549细胞为NDVL组及PBS处理的A549细胞为对照组。蛋白质印迹法检测各组A549细胞中NDV HN、IL-29蛋白的表达;CCK8法、划痕试验及Transwell侵袭实验检测rL-IL29对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;蛋白质印迹法检测细胞E-钙黏蛋白、MMP2、波形蛋白及AKT/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。结果:A549细胞感染rL-IL29后,NDV HN及IL-29蛋白均稳定表达,且明显高于NDVL组及对照组;rL-IL29及NDVL感染A549细胞后能够抑制细胞的增殖、迁移及侵袭,且rL-IL29作用更强;与对照组及NDVL组比较,rL-IL29感染后A549细胞中E-钙黏蛋白表达量明显增加,波形蛋白、MMP2(66 kDa/72 kDa)、p-AKT及P65蛋白表达明显减弱(均P<0.05)。结论:rL-IL29可能通过阻碍AKT/NF-κB信号通路上调E-钙黏蛋白表达和下调波形蛋白、MMP2蛋白表达,从而抑制肺腺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移。
- 杭敏严玉兰邵小美张日婷步雪峰
- 关键词：重组新城疫病毒肺腺癌迁移
- 鼠IFN—λ2 CHO细胞系建立及生物学活性的研究被引量：3
- 2010年
- 目的稳定表达鼠IFN—λ2并对其生物学活性进行研究。方法用水疱口炎病毒（vesicular stomatitis virus，VSV）刺激小鼠脾脏细胞，克隆mIFN—λ2全长基因，构建真核表达载体PCAGG-EGFP-mIFN-λ2，并在CHO细胞稳定表达，且在小鼠黑色素瘤B16细胞上进行抗病毒活性测定；构建MDBK-Mxp—Luc细胞系诱导Mx1抗病毒蛋白产生。结果pMD18-T-mIFN—λ2双酶切鉴定，出现582bp大小的条带，成功构建了PCAGG—EGFP—mIFN—λ2真核表达载体；稳定表达mIFN—λ2 CHO的细胞株分泌的上清中mIFN-λ2蛋白在B16细胞上的抗病毒活性为10^4AU／ml；mIFN-λ2蛋白诱导鼠Mx1抗病毒蛋白的表达，9～12h达高峰，24h后消失（P〈0．05）。结论建立了稳定表达mIFN—λ2的CHO细胞株，其分泌型mIFN—λ2蛋白具有明显的抗病毒活性。
- 严玉兰袁利学刘洋曹文雁步雪峰步志高郑金旭
- 关键词：抗病毒活性
- 股浅静脉缩窄术治疗6例原发性深静脉瓣膜功能不全
- 2000年
- 陶曙步雪峰高一峰
- 关键词：深静脉瓣膜功能不全
- 重组新城疫病毒rl-RVG抑制A549荷瘤鼠的瘤体生长被引量：1
- 2014年
- 目的探讨稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒疫苗对人肺腺癌A549细胞荷瘤鼠的生长抑制及其可能促凋亡机制。方法将rl-RVG感染到成功建立的A549荷瘤鼠瘤体内,检测对瘤体生长抑制率;RT-PCR检测NDV HN基因及RVG基因的表达;TUNEL检测肿瘤细胞的凋亡;蛋白印迹法测caspase系列、Bax、Bcl-2表达;NDV及PBS作为对照。结果与对照组相比,rl-RVG组荷瘤鼠瘤体增长明显缓慢;RVG及NDV基因表达;rl-RVG组肿瘤细胞凋亡明显增加(P<0.05);rl-RVG组caspase-3,8和9高表达(P<0.01),Bax/Bcl-2比值明显高于对照组(P<0.01)。结论 rl-RVG成功感染至A549荷瘤鼠,其对A549荷瘤鼠瘤体生长有着明显的抑制作用,且可能与rl-RVG激活机体的Bcl-2和caspase家族诱导凋亡相关。
- 严玉兰贾丽娟刘洋张金张杰梁冰步雪峰
- 关键词：凋亡
- 干细胞标志物Nanog的检测在胃癌诊断中的意义被引量：31
- 2009年
- 目的检测胃癌患者癌组织和癌旁组织中干细胞标志物Nanog的表达水平并探讨其与临床病理参数的相关性。方法用RT-PCR和Real-timePCR检测62例胃癌患者癌组织和癌旁组织中Nanog的表达。结果RT-PCR结果显示胃癌组织和癌旁组织中Nanog的表达阳性率分别为58.1%(36/62)、9.7%(6/62),差异有统计学意义(P<0.0001);Real-timePCR结果表明胃癌组织中Nanog相对表达水平高于癌旁组织(P<0.05);胃癌组织中Nanog阳性表达与肿瘤分化状态相关,低、未分化组高于中、高分化组(P<0.05),但与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期和有无淋巴结转移无关。结论Nanog表达与胃癌的发生及其分化状态相关,可作为胃癌诊断的一个新的分子标志。
- 陈忠许文荣钱晖朱伟王胜步雪峰毛飞曹慧玲徐学静
- 关键词：胃癌NANOGPCR肿瘤干细胞
- 不同年龄人群肌肉组织中7种线粒体酶的表达差异被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨年轻人与中老年人肌肉中线粒体电子传递链和胞质中一些关键酶的表达差异。方法:收集7例年轻人及33例中老年人颈部肌肉标本,透射电镜观察两组肌肉中线粒体形态学变化,免疫组织化学染色和蛋白质印迹检测NADH氧化还原酶辅酶1[NADH dehydrogenase(ubiquinone)1 alpha subcomplex 1,NDUFA1],琥珀酸脱氢酶复合体铁硫亚基(succinate dehydrogenase complex,subunit B,SDHB),细胞色素b(cytochrome b,Cytb),细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase,COX),V型H+ATP酶(vacuolar-type H+-ATPase,V-ATPase H),苹果酸脱氢酶(cytosolic malate dehydrogenase,MDH)、短链羟烷基-辅酶A脱氢酶(hydroxyacyl-coenzyme A dehydrogenase,HADHSC)的表达情况。结果:与年轻人相比,中老年人肌肉中线粒体体积增大,空泡增多,嵴排列紊乱,出现类结晶状包涵体;NDUFA1、SDHB、Cytb、COX、V-ATPase H表达量明显降低(P均<0.05),但MDH及HADHSC的表达差异无统计学意义;蛋白质印迹结果与免疫组织化学结果相一致。结论:肌肉组织中线粒体的形态和关键酶的表达随年龄的增加出现明显改变,可能在衰老过程中起到重要作用。
- Rukhsar Ahmad蒋鹏程顾韵刘嫣方陈芹步雪峰谢黎林志强钱炜
- 关键词：衰老肌肉线粒体
- 鼠IL-28重组腺病毒体外抗肺癌活性研究被引量：1
- 2011年
- 目的将已成功构建的mlL-28A重组腺病毒载体转染至肺腺癌细胞LA795，并对其抗肺癌细胞生物学活性进行研究。方法将Ad—pshuttle—cmv—mlL-28A转染至LA795细胞，用PCR、免疫细胞荧光、Tunel、AnnexinV及MTT法等进行检测。结果LA795细胞转染Ad—mlL-28A后，mlL-28A的mRNA基因表达明显增加，且细胞内明显表达IL-28蛋白，LA795细胞凋亡增多，细胞生长明显抑制。结论成功构建的mlL-28A重组腺病毒载体转染至肺腺癌细胞LA795后表达IL-28，且可能通过促进细胞凋亡而抑制其-定程度的生长。
- 严玉兰张金刘洋袁利学朱涛峰郑金旭步雪峰
- 关键词：腺病毒肺癌凋亡
- 促进内皮祖细胞生长的细胞外基质组织工程血管支架的研究
- 2009年
- 目的研究鼠骨髓来源内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）在不同类型细胞外基质支架上的生长特性，为EPCs生长寻找新的生物组织工程血管支架。方法EPCs种植于细胞外基质支架（extracellular matrix，ECM）上。培养不同时间点用免疫荧光技术鉴定并细胞记数；电镜观察支架表面结构及EPCs的生长情况；Western blotting法、real-time PCR法检测VWF（von Willebrand factor）蛋白及mRNA表达变化。结果在1、3、5h3个检测点的压缩组细胞贴壁率明显高于未压缩组（P〈0．01）。在1、3、7d压缩组的细胞数明显高于未压缩组（P〈0．05），10d后差异无统计学意义，且压缩组细胞形态较成熟，与内皮细胞相似，有一个较平整的细胞平面。Western blotting检测表明3、7、10dVWF蛋白在压缩支架上表达比未压缩支架上强，14d后两组表达相当。real-time PCR结果示3、7、10d压缩组VWF基因表达量明显高于未压缩组（P〈0．01），14d后两组表达无差异。结论压缩ECM更能促进EPCs黏附、增殖和分化，可作为一种新的合成人工血管的生物组织工程支架。
- 步雪峰严玉兰张志坚吴浩荣
- 关键词：细胞外基质内皮祖细胞血管支架
- 早期胃癌40例临床分析
- 2005年
- 杨治力马圭步雪峰周公民
- 关键词：早期胃癌根治性切除
