梁单
- 作品数：17 被引量：95H指数：7
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- 不同浓度锌对成骨细胞MC3T3-E1骨保护素基因表达和细胞增殖的影响被引量：5
- 2011年
- 目的研究不同浓度锌对成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖的影响。方法取小鼠的成骨细胞系MC3T3-E1培养并随机分为4组,A组加入10μmol/L硫酸锌;B组加入50μmol/L硫酸锌;C组加入200μmol/L硫酸锌;D组作为空白对照。培养48h后提取细胞RNA,RT-PCR分析成骨细胞骨保护素(OPG)mRNA表达,Elisa检测细胞培养上清中骨保护素表达水平。MTT法测定成骨细胞增殖率。结果 A组、B组、C组与D组细胞骨保护素基因表达比值分别为0.461±0.051、1.068±0.123、0.244±0.044、0.548±0.089,A组与D组差异不明显,B组高于D组(P<0.01),C组低于D组(P<0.01)。Elisa结果与RT-PCR相同。细胞增殖率之间差异有显著性意义,B组高于D组(P<0.01),C组低于D组(P<0.01)。结论 50μmol/L的锌促进成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖,200μmol/L的锌则抑制成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖。而10μmol/L的锌对成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖的影响不大。
- 杨茂伟梁单郭宝磊曹军军杨蕾郭晓东高志达
- 关键词：成骨细胞锌骨保护素细胞增殖
- 氟通过胞外信号调控激酶通路对成骨细胞增殖作用的影响被引量：7
- 2012年
- 目的观察氟通过胞外信号调控激酶（ERK）通路对成骨细胞（MC3T3-E1）增殖作用的影响。方法取小鼠成骨细胞（MC3T3-E1）进行体外培养，加入不同浓度的氟（F-，0、200、400、600、1000、2000、4000、8000、10000μmol／L）培养24、48h，甲基噻唑蓝（MTr）法筛选出促进细胞增殖的最适浓度。根据最适浓度，将成骨细胞单纯随机分为3组：对照组（F-，0μmol／L）、染氟组（F-，400／μmol／L）、染氟抑制组（F-，400μmol／L＋PD91805，10μmmol／L）。培养48h后应用流式细胞术检测各组细胞周期；Westernbolt法和免疫荧光法检测各组磷酸化ERK（P-ERK）蛋白表达。结果400Ixmol／L的氟是促进成骨细胞增殖的最适合浓度。与对照组比较[（76．12±10．08）％、（2．064-0．31）％]，染氟组G0／G1期细胞数[（63．044-8．12）％]明显减少，S期细胞数[（9．13±2．08）％]明显增多（P均〈0．05）；而染氟抑制组G0／G1期细胞数[（92．11±9．01）％]明显增多（P〈0．05）。Westernblot结果表明，与对照组[（100．00±0．00）％]比较，染氟组成骨细胞P-ERK蛋白表达水平[（131．244-13．88）％]明显增高（P〈0．05），染氟抑制组P-ERK蛋白表达[（91．33±9．68）％]未见明显改变（P〉0．05）；免疫荧光法检测结果与Westernblot法相似。结论400txmol／L氟可以促进成骨细胞增殖，ERK通路在氟促进成骨细胞的增殖作用中起到了关键的作用。
- 郭晓东杨茂伟梁单郭宝磊曹军军杨蕾
- 关键词：成骨细胞氟细胞增殖细胞外信号调节MAP激酶类
- 锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响及机制被引量：2
- 2013年
- 目的:研究锌离子(Zn)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转分化(EMT)的影响及机制,从而为Zn在腹膜透析(PD)中的应用提供理论基础。方法:胰蛋白酶消化法原代培养腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:(1)正常对照组;(2)LPS组:100μmol/L作用48h;(3)ZnSO4作用组:30μmol/L ZnSO4作用24h后加100μmol/L LPS作用48h。应用RT-PCR方法和免疫荧光方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)基因表达。应用Western Blotting检测核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制蛋白(I-κB)、磷酸化的NF-κB(p-NF-κB)、磷酸化的I-κB(p-I-κB)蛋白表达;应用流式细胞术,采用活性氧自由基(ROS)检测试剂盒检测各组别的ROS情况。结果:LPS培养48h后细胞形态开始发生变化,由典型的上皮逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞,而硫酸锌(ZnSO4)作用组细胞表型改变明显减轻。与对照组相比,LPS组RPMC的α-SMA、CollagenⅠ基因表达明显升高,而E-cadherin基因表达降低;与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC的α-SMA、CollagenⅠ表达明显降低、E-cadherin基因表达增多;LPS组ROS显著高于对照组,ZnSO4作用组ROS显著低于LPS组;与LPS组相比,ZnSO4作用组p-NF-κB、p-I-κB蛋白表达降低。结论:ZnSO4可逆转LPS所致的RPMC的EMT,对腹膜透析过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制氧化应激反应和NF-κB信号通路转导而发挥作用。
- 张秀丽梁单樊怡孙立霞杨丽娜王力宁马健飞
- 关键词：脂多糖转分化
- β-榄香烯通过抑制WNT信号通路促进MG-63细胞凋亡被引量：8
- 2011年
- β-榄香烯在作为化疗药使用时表现为毒副作用小,极少产生耐药性[1]。但是榄香烯治疗骨肉瘤尚未见报道。我们应用榄香烯作用于人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,观察其对细胞增殖和凋亡的影响,并进一步研究Wnt/β-catenin信号传导通路在其中的作用。
- 梁单杨茂伟郭宝磊曹军军杨蕾郭晓东
- 关键词：Β-榄香烯人骨肉瘤细胞MG-63
- 高糖通过提高ROS水平和钙超载诱导小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡被引量：11
- 2012年
- 目的:探讨钙离子(Ca2+)超载在高糖诱导成骨细胞株MC3T3-E1凋亡中的作用以及活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的影响。方法:培养小鼠颅骨源性成骨细胞株MC3T3-E1,给予高浓度D-葡萄糖诱导细胞凋亡。采用MTT法检测不同浓度D-葡萄糖处理24和48 h后MC3T3-E1细胞的增殖情况;D-葡萄糖(35 mmol/L)处理24 h后,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;Fura-2/AM荧光探针检测细胞内Ca2+浓度;DCFH-DA荧光探针检测ROS的生成。结果:MC3T3-E1高糖处理后,细胞增殖明显抑制呈剂量效应关系,早期凋亡率和总死亡率分别增加至(24.16±3.53)%和(63.74±4.32)%。高糖处理后细胞内ROS水平明显增加,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸可以在降低ROS水平的同时抑制高糖所引起的成骨细胞凋亡。细胞内游离Ca2+水平也明显增加,并且通过膜通透性Ca2+螯合剂BAPTA-AM处理后,细胞内Ca2+浓度明显降低,同时成骨细胞凋亡率也明显降低。加入镧离子(La3+)离子抑制储量操纵性钙通道(store-operated Ca2+channels,SOCC)可以降低细胞内Ca2+浓度,减低高糖所引起的成骨细胞凋亡。在高糖诱导成骨细胞凋亡中,细胞内ROS和Ca2+的增加呈相互促进的关系。结论:高糖可以通过增加细胞内ROS水平,引起钙离子通过SOCC通道释放,造成细胞内Ca2+超载,从而诱导成骨细胞凋亡。
- 郭宝磊杨茂伟梁单曹军军杨蕾郭晓东
- 关键词：高糖成骨细胞活性氧簇钙超载
- 过氧化氢通过线粒体途径诱导成骨细胞凋亡被引量：6
- 2013年
- 目的探讨氧化应激状态诱导成骨细胞系MC3T3-E1凋亡中线粒体途径的作用。方法采用MTT法检测不同浓度过氧化氢处理后MC3T3-E1的增殖情况;Annexin V-FITC/PI流式细胞学检测细胞凋亡;JC-1流式细胞学检测线粒体膜电位;DCFH-DA流式检测活性氧簇(ROS)活性;Western印迹检测线粒体Bax表达水平。结果 MC3T3-E1过氧化氢处理后,细胞增殖明显抑制呈剂量效应关系,ROS活性和凋亡增加,线粒体膜电位降低。结论过氧化氢可以增加细胞内ROS水平,通过激活线粒体途径诱导细胞凋亡。
- 郭宝磊杨茂伟梁单曹军军杨蕾郭晓冬
- 关键词：过氧化氢线粒体途径成骨细胞凋亡
- 高糖通过线粒体途径诱导成骨细胞凋亡被引量：7
- 2012年
- 线粒体途径是细胞凋亡的重要途径之一.在特定的刺激下,例如高糖条件,可以通过caspase依赖性和非依赖性两种途径诱导多种细胞凋亡.但线粒体凋亡途径在高糖引起成骨细胞凋亡中所起的作用,目前尚不清楚.本研究证明,高糖可以通过线粒体凋亡途径诱导成骨细胞凋亡.AnnexinV-FITC/PI流式细胞学检测显示,高糖可诱导MC3T3-E1细胞凋亡.Western印迹检测发现,不同浓度D-葡萄糖(11,22,33 mmol/L)可以引起线粒体中Bax蛋白表达的增加,使Bax蛋白由细胞质中易位到线粒体,激活了线粒体凋亡途径.JC-1荧光探针检测证实,高糖处理成骨细胞后,线粒体膜电位明显降低,表明线粒体途径被激活.而细胞质中的细胞色素c、凋亡诱导因子(AIF)表达增加,细胞色素c和AIF从线粒体中释放到细胞质中,释放到细胞质中的细胞色素c使caspase-3、caspase-9剪切活化,从而激活了caspase依赖性凋亡途径.因此,线粒体凋亡途径可能是高糖诱导成骨细胞凋亡过程中一个重要的途径.
- 曹军军杨茂伟郭宝磊梁单
- 关键词：高糖线粒体途径成骨细胞凋亡
- 黄芪甲苷拮抗过氧化氢引起的小鼠成骨细胞凋亡作用被引量：9
- 2012年
- [目的]探讨黄芪甲苷拮抗过氧化氢所致小鼠成骨细胞MC3T3-E1凋亡及相关机制.[方法]将成骨细胞MC3T3-E1细胞随机分为A组(正常对照组)、B组(过氧化氢组)、C组(过氧化氢+黄芪甲苷组)及D组(过氧化氢+黄芪甲苷+LY294002组).采用流式细胞术Annexin-V和PI双染检测细胞凋亡情况;同时采用Western-blot检测细胞凋亡相关蛋白Bax,AIF,cyto-C表达情况;免疫荧光和Western-blot检测信号通路相关蛋白P-AKT表达情况.[结果]B组及D组的成骨细胞凋亡率和凋亡相关蛋白Bax,AIF,cyto-C均较A组明显增高(P<0.05);C组的细胞凋亡率和凋亡相关蛋白Bax,AIF,cyto-C活性与A组相比较变化不明显(P>0.05).免疫荧光和Western-blot结果均显示C组的P-AKT表达水平明显增加,与A组比较差异具有统计学意义(P<0.01).[结论]黄芪甲苷可拮抗过氧化氢引起的成骨细胞MC3T3-E1的凋亡,PI3k/AKT信号传导通路可能在其中发挥重要的作用.
- 黄海涛梁单金昱
- 关键词：黄芪甲苷过氧化氢成骨细胞小鼠
- 血管紧张素Ⅱ受体及其受体1与肿瘤新生血管生成关系的研究进展被引量：4
- 2016年
- 血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)是肾素-血管紧张素系统(RAS)产生的一种多功能活性多肽,其主要作用于血管紧张素1受体(AT1R)调节血压。近年来,研究表明在大多数常见的肿瘤细胞上均存在AT1R,并且AT1R的表达数量及程度与肿瘤的恶化程度和是否转移密切相关,这种现象与AT1R介导肿瘤新生血管生成增加有关。本文阐述了在常见肿瘤细胞及分子水平上AT1R的表达情况,以及其对肿瘤生长与转移的影响,并对目前ATⅡ-AT1R抑制剂单独或联合用药对肿瘤影响的相关研究进行了探讨。
- 郭琳梁单韩颖霞葛艳
- 关键词：肿瘤
- 氟诱导成骨细胞MC3T3-E1自噬与凋亡及其相互作用分析被引量：9
- 2012年
- 目的主要研究氟诱导成骨细胞MC3T3-E1发生自噬、凋亡及两者之间的关系。方法利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测氟对成骨细胞MC3T3-E1的增殖活性影响,探寻氟引起凋亡的浓度;流式细胞术检测细胞凋亡;western blot免疫印记技术检测凋亡相蛋白;利用western blot免疫印记技术检测Beclin 1蛋白及LC3蛋白表达水平及变化。结果氟能明显抑制成骨细胞MC3T3-E1增殖,诱发细胞凋亡,其抑制作用呈时间、剂量依赖性;氟在促进细胞凋亡的同时也促进自噬产生;3-甲基腺素(3-MA)抑制自噬后,氟诱导的凋亡进一步增多。结论氟明显抑制MC3T3-E1细胞增殖,同时诱发细胞凋亡和自噬;氟诱导的自噬部分拮抗其诱导的凋亡。
- 郭晓东杨茂伟梁单郭宝磊杨蕾曹军军
- 关键词：氟凋亡自噬成骨细胞MC3T3-E1
