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高通量检测蛋白磷酸化技术研究: 2013年; 目的研究常规细胞裂解法与AlphaScreen技术结合检测细胞内蛋白磷酸化水平的可行性。方法使用常规配制的细胞裂解缓冲液裂解细胞,分别用传统的Western blot方法和AlphaScreen技术检测在表皮生长因子(EGF)刺激下乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞内AKT磷酸化(p-AKT)水平的变化。结果使用AlphaScreen技术检测到的p-AKT变化趋势和幅度与使用传统Western blot方法检测所得结果一致,同时AlphaScreen技术所得结果更快速。结论常规细胞裂解法所得细胞裂解液可用于AlphaScreen技术检测细胞内蛋白磷酸化水平,该方法使AlphaScreen技术成为一种可以替代Western blot法检测组织和细胞内蛋白激酶活性的高效和灵敏的手段。; 杨颖熊英殷爱红武文琦赵焕英; 关键词：细胞裂解蛋白磷酸化

基因结构分析软件对实时定量PCR引物进行设计和筛选: 2015年; 目的:以人丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)基因结构为例,利用不同生物相关软件分析、设计和筛选合适的定量PCR引物。方法:利用NCBI的Gene数据库查找人MAPK3基因的参考序列、Uni Gene数据库查找标准参考序列;并用在线软件如Spidey,UCSC,Ensembl等分析基因结构;利用Primer3,Oligo6,IDT等软件进行引物设计;用MFOLD程序分析基因二级结构后,选择引物可定位的外显子位置;利用电子PCR进行引物扩增特异性的检验;最后通过实验检验引物的扩增效果。结果:从程序软件推荐的引物列表中筛选出一对能特异扩增人MAPK3基因的引物。结论:基因结构分析软件有助于定量PCR引物的设计。; 赵焕英赵君朋方霄杨颖张进禄; 关键词：基因结构引物实时定量PCR

C-KIT基因突变对血液祖细胞免疫表型及增殖的影响被引量：1: 2013年; 目的探讨不同C-KIT突变影响核心结合因子相关性急性髓系白血病(CBF-AML)发生的分子机制。方法用流式细胞术鉴定稳定转染KIT野生型和突变型的EML细胞表面KIT的表达,比较各细胞系的免疫表型;WST-1法检测各细胞系在IL-3或Epo存在下的增殖状况,Western blot法检测Epo受体的表达。结果外源人KIT在各类稳定转染的EML细胞系表面表达,Del417-419insY和D816V C-KIT突变均引起B220+细胞亚群减少以及Sca-1+细胞亚群增多,但后者作用更显著,二者未影响CD34、Gr-1、Mac-1和Ter119阳性细胞百分率;Del417-419insY突变体可以和IL-3、Epo协同促进细胞增殖,而D816V突变体只与IL-3有协同作用,经检测EML-D816V细胞不表达Epo受体。结论不同C-KIT突变可以不同程度改变造血祖细胞免疫表型,协同其他造血因子促进细胞增殖,这提示其与CBF-AML的发生和临床预后的相关性。; 杨颖刘华郑君芳郑帅史小翠马骞赵君朋; 关键词：造血祖细胞免疫表型增殖

雌激素及其受体调节剂对APOE基因敲除小鼠胸主动脉CD40/CD40L的影响: 2015年; 目的探讨雌激素及其受体拮抗剂对去势APOE基因敲除小鼠主动脉血管中CD40和CD40L表达的影响。方法 24只去势APOE(-/-)小鼠随机均分为三组:第一组给予生理盐水(对照组);第二组给予非特异雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂ICI和雌激素(estrogen,E2)(ICI+E2组);第三组给予特异性雌激素β受体拮抗剂PHTTP和雌激素(PHTTP+E2组)。喂养8周后麻醉处死,获取动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的组织标本,提取总RNA。应用反转录,定量PCR方法检测CD40/CD40L mRNA表达量。石蜡切片行Masson染色、CD40/CD40L免疫组化和免疫荧光染色。结果三组小鼠CD40/CD40L的表达量有显著不同(H=10.38,P=0.03)。与对照组相比,PHTTP+E2组CD40/CD40L表达量明显下降(q=12.46,P=0.021),ICI+E2组CD40/CD40L虽有下降,但差异无统计意义。Masson染色结果显示:与对照组相比ICI+E2组和PHTTP+E2组胶原纤维降解少,斑块稳定。结论雌激素可能通过雌激素受体α(ERα)发挥预防或治疗妇女AS的作用,ERα可能是妇女心血管疾病的保护性因素。; 陈瑛赵焕英杨颖宋学英郭伟薛冰; 关键词：雌激素替代疗法雌激素受体Α 雌激素受体Β

基于EnVision多标记读板仪的细胞内钙信号检测技术的研究被引量：1: 2015年; 目的研究使用En Vision多标记读板仪检测细胞内钙信号的可行性。方法分别用卡巴胆碱和凝血酶刺激LN229、SKN-MC细胞或者磷脂酶C抑制剂U73122预处理的LN229细胞,使用En Vision多标记读板仪检测细胞内钙信号强度的变化。结果卡巴胆碱诱导的LN229细胞内钙信号变化呈现浓度依赖性;卡巴胆碱和凝血酶诱导的细胞内钙信号变化趋势不同;凝血酶诱导的钙信号变化具有细胞特异性;U73122对凝血酶诱导的钙信号的抑制作用呈现剂量依赖性。结论 En Vision多标记读板仪作为细胞内钙信号检测仪器,具有快速、可重复性好和灵敏度高等优势,适用于钙信号相关的研究和小分子抑制剂的筛选等领域的工作。; 杨颖殷爱红武文琦赵春娟赵君朋; 关键词：G蛋白偶联受体

16S rDNA克隆文库法与PCR-DGGE法在口腔菌群分析中的对比研究被引量：5: 2013年; 目的比较16S rDNA克隆文库法与变性梯度凝胶电泳联合PCR法(PCR-DGGE)在口腔微生物多样性研究中的检测效率。方法采集6例逆行性牙髓炎患者根管细菌样本,提取细菌总DNA,采用细菌通用引物27F/1492R、HAD-1/2分别扩增16S rDNA的全长或V2-V3区域,PCR产物分别经琼脂糖凝胶电泳和DGGE分离,纯化目的条带后克隆测序。测序结果与数据库序列比对,鉴定细菌组成。结果琼脂糖电泳分离到16S rDNA约1.5 kb条带,每个样本检测到8-15种细菌;DGGE分离到V2-V3区约含6-12条位置不同的239 bp谱带,每个样本检测到6-12种细菌。结论与DGGE法相比,16S rDNA克隆文库法测得的菌群更全面,敏感性和特异性更高。; 赵焕英尚佳健张琛关蕊杨颖; 关键词：RDNA PCR-DGGE 克隆测序

MAGI3促进E-cadherin翻译修饰并影响β-catenin亚细胞定位被引量：1: 2016年; 目的：研究MAGI3对细胞黏附连接关键蛋白E-cadherin翻译后修饰及其对β-catenin在细胞内分布的影响，为探讨MAGI3通过调控细胞黏附连接影响肿瘤侵袭、转移的可能机制提供线索。方法首先采用Western印迹方法检测过表达MAGI3后E-cadherin蛋白表达条带的迁移变化，研究其翻译后修饰的变化；然后应用RT-PCR方法检测E-cadherin的表达在mRNA水平的变化，研究MAGI3对其转录水平的影响；进一步利用核质膜分离实验检测MAGI3对β-catenin胞内定位的影响。结果过表达MAGI3使E-cadherin蛋白翻译后修饰发生变化（ P＜0.05），但在mRNA水平没有明显变化。同时，过表达MAGI3后分布到细胞质膜上的β-catenin明显增多（P＜0.05）。结论 MAGI3可能通过促进E-cadherin的翻译后修饰，并促进β-catenin在细胞膜上的分布。; 张丽洁刘华杨颖彭志强贺俊崎

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杨颖