杨燕
- 作品数：56 被引量：77H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- HBV-C基因型复制细胞系的构建与鉴定
- 2021年
- 目的构建HBV临床分离株复制细胞系,为抗病毒药物筛选提供新的细胞模型。方法从乙型肝炎患者血清中PCR扩增乙肝病毒全长基因组,经SapI酶切,T4连接酶连接环化后作为模板,PCR扩增0.2拷贝HBV基因组(nt1402-nt1989)及1.0拷贝HBV基因组(nt1402-nt3215-nt1407);依次克隆入pcDNA3(-)-EGFP-ΔCMV载体得到p1.2×HBV-EGFP质粒;用Lipofectamine 2000将重组质粒转染HepG2细胞,使用含G418(700μg/mL)培养基培养2~3周,挑选阳性克隆,进一步传代培养获得HBV复制细胞系(HepG2X15)。收集细胞系培养上清ELISA检测HBsAg和HBeAg水平;Real-time PCR检测HBV病毒含量。收集培养细胞,Southern blot检测细胞内HBV复制中间体;免疫荧光检测细胞内HBsAg和HBcAg。结果筛选出1株来源于临床分离株的HBV-C基因型复制细胞系,在培养上清中检测到高水平HBsAg、HBeAg及HBV DNA,细胞内检测到HBV复制中间体,免疫荧光检测到细胞内高水平HBsAg和HBcAg。与HepG2.2.15细胞系相比,上清中HBsAg和HBV DNA水平更高。结论成功建立来源于临床分离株的HBV-C基因型复制细胞系,该细胞系稳定表达HBsAg、HBeAg和HBcAg,并支持高水平的HBV复制,可以用于抗HBV药物筛选及临床分离株的耐药机制等研究。
- 李瑞明杨燕曾宪煌孟忠吉
- 关键词：乙型肝炎病毒临床分离株细胞系
- pRNA介导的RNA干扰抑制HBV表达和复制的研究被引量：4
- 2006年
- 为了研究由pRNA携带的siRNA(HBVsi18-42)所介导的RNAi过程能有效地抑制HBV的基因表达和病毒复制,我们利用细胞模型和高压注射小鼠模型评价HBVsi18-42对HBV复制和基因表达的抑制作用。通过Western印迹检测细胞内的HBsAg含量,用ELISA检测细胞培养上清和小鼠血清中的HBsAg水平,采用Southern印迹检测HBV的复制中间体,通过免疫组织化学检测肝组织切片中HBcAg的表达情况。试验结果显示,HBVsi18-42能以剂量依赖的方式在293T细胞中抑制HBsAg的表达以及在HepG2细胞中下调病毒HBsAg和HBeAg的表达和病毒复制中间体的水平。在小鼠模型中,注射后的3d内HBVsi18-42使小鼠血清中HBsAg的水平分别下降了98.98%、77.07%和60.73%,免疫组织化学检测显示,在注射后的第3天小鼠肝组织内HBcAg阳性细胞数减少了79.1%。初步结果显示HBVsi18-42无论是在细胞或是在小鼠模型中都能下调HBV的复制和基因的表达。本研究为我们下一步实现由pRNA介导的靶向RNAi及基因治疗提供了理论和技术支持。
- 张正茂田拥军杨燕王宝菊郭培宣杨东亮
- 关键词：RNA干扰PRNA乙型肝炎病毒
- 表达人去唾液酸糖蛋白受体分子细胞系的建立
- 2009年
- 目的构建稳定表达人肝细胞表面分子去唾液酸糖蛋白受体（asialoglycoprotein receptor，ASGPR）的细胞系。方法逆转录PCR扩增人肝组织ASGPR大亚基H1全编码序列，插入到真核表达载体plRES2EGFP中，重组质粒pIRES2EGFP／ASGPRH1转染HeLa细胞，G418筛选，RT—PCR，Western印迹及免疫荧光检测ASGPRH1的表达。结果成功构建了pIRES2EGFP／ASGPRH1重组质粒，该质粒转染HeLa细胞后，Western印迹及免疫荧光均检测到ASGPRHI蛋白的表达。结论成功建立了稳定表达人ASGPRH1的细胞系，为进一步研究ASGPR分子奠定了基础。
- 胡斌杨燕刘嘉马镭勇郝友华黄红平杨东亮
- 关键词：去唾液酸糖蛋白受体真核表达稳定转染
- 人结肠癌Caco-2细胞羧酸酯酶的表达及代谢活性被引量：3
- 2010年
- 目的:评价Caco-2细胞对酯类药物的水解活性及羧酸酯酶(CES)表达的影响.方法:采用人类CES1(hCE-1)和CES2(hCE-2)特异性底物咪达普利和伊立替康(CPT-11)与Caco-2细胞S9组分共同孵育,HPLC法测定原药及代谢产物浓度,评价Caco-2细胞的药物水解活性,并通过RT-PCR法测定细胞内hCE-1和hCE-2表达.结果:Caco-2细胞与正常小肠微粒体酶相比,更倾向于代谢咪达普利,而几乎不水解CPT-11.RT-PCR结果发现,Caco-2细胞CES表达与正常肠道上皮组织不同,表现为hCE-1高表达,而几乎不表达hCE-2.结论:Caco-2细胞CES表达与正常肠道上皮组织存在较大差异,因此在使用Caco-2细胞评价酯类药物口服吸收时应十分谨慎.
- 刘东张程亮杨燕向道春高静王新桃
- 关键词：羧酸酯酶CACO-2细胞伊立替康咪达普利
- 多基因联合化疗药物治疗肿瘤的实验研究
- 杨燕张桂梅冯作化
- 人宫颈癌基因小干扰RNA抑制HepG2细胞生长的作用及其机制被引量：7
- 2008年
- 目的利用RNA干扰技术探讨人宫颈癌基因（HCCR）对肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法构建表达HCCR小干扰RNA的真核表达质粒pRIV2-siHCCR，将其转染肝癌细胞株HepG2细胞，定量PCR、Western blot检测HCCR及其相关基因的表达，四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖状态，流式细胞术观察细胞凋亡与细胞周期变化。结果成功构建真核表达质粒pRIV2-siHCCR，其表达的HCCR siRNA可有效抑制HepG2细胞内HCCR的表达，细胞增殖受到抑制，细胞凋亡增加。Western blot结果显示HCCR小干扰RNA作用HepG2细胞后。细胞内P53蛋白的表达降低，P15蛋白的表达明显升高，而PTEN、P16、P27蛋白水平没有明显改变。结论HepG2细胞中HCCR蛋白下调后，细胞增殖受到抑制，凋亡细胞增多，其作用机制可能与蛋白质P53、P15有关。
- 杨燕周学锋刘安定张正茂田拥军刘慎沛赵西平陆蒙吉杨东亮
- 关键词：蛋白质P53小干扰RNA人宫颈癌基因
- PPM1A和P-Smad2在原发性肝癌中表达及意义研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨肝癌及癌旁组织中P-Smad2蛋白与PPM1A的表达及意义。方法采用免疫组织化学技术检测31份肝癌(HCC)、25份癌旁组织及13份非癌性肝组织中P-Smad2蛋白和PPM1A的表达。结果①癌旁和病理分级小于Ⅱ级的癌组织中PPM1A表达以核为主,胞浆表达弱或不表达,病理分级大于Ⅲ级及以上的癌细胞中则以胞浆表达为主,正常、慢性肝炎和肝硬化组织中,PPM1A表达以核为主,胞浆无表达,差别有统计学意义(P<0.05)。②P-Smad2在正常肝细胞、慢性肝炎、肝硬化、癌旁和病理分级Ⅰ-Ⅱ级的癌组织中表达以胞核和胞浆明显,胞浆表达主要聚集在核周,病理分级分级Ⅱ-Ⅲ级及以上的癌组织中,P-Smad2表达则以核为主,差别有显著性(P<0.05)。③PPM1A和P-Smad2在癌组织的表达部位呈现负相关性(r=-0.345,P=0.001)。结论PPM1A与P-Smad2在肝癌组织的胞核和胞浆表达转位及强度与其组织病理改变有密切关系,二者可能通过其相互作用,共同参与肝癌的发生发展机制。
- 吴淑坤王宝菊杨燕鲍俊杰田拥军冯新华杨东亮
- 关键词：原发性肝细胞癌
- 化疗诱导的衰老细胞胞外囊泡的分离及相关特性研究
- 2020年
- 目的:探讨化疗诱导的衰老肿瘤细胞分泌的胞外囊泡(EVs)特性及其对肿瘤细胞与巨噬细胞的影响。方法:化疗药物阿霉素、顺铂及极光激酶抑制剂MLN8237作用神经母细胞瘤细胞系,分析细胞衰老及细胞周期阻滞情况,建立化疗诱导的细胞衰老模型。分离衰老细胞培养上清中的EVs,Western blot及Nanosight分析EVs纯度、粒径大小与浓度。分别用肿瘤细胞及巨噬细胞孵育EVs,Western blot与RT-qPCR检测胞内蛋白与细胞因子表达。结果:低浓度MLN8237作用IMR32细胞成功诱导细胞衰老;衰老细胞分泌的EVs(SAEs)数量低于未处理细胞,但大小在30~150 nm的外泌体组分含量偏高;与EVs孵育组相比,SAEs孵育的IMR32细胞BRD4与C-MYC表达水平明显下调;EVs与SAEs孵育的THP-1细胞均发生形态改变:贴壁并伸出伪足,呈现极化状态;但THP-1细胞内细胞因子表达水平明显不同:在EVs与SAEs组,IL-4与TNF-α水平明显比未处理组低;与EVs组相比,SAEs组IL-1β、IL-10与TGF-β水平明显降低。结论:SAEs能够抑制肿瘤细胞BRD4表达并下调巨噬细胞分泌IL-10与TGF-β水平,有利于肿瘤预后,但具体机制还需要进一步研究。
- 周琦丁丽丽李芬刘爱国周学锋杨燕
- 双生子队列研究在遗传-环境-健康风险评价中的应用
- 2019年
- 随着科技的进步和生活水平的提高,越来越多研究进行儿童生长发育、心理和认知发育等健康相关问题的病因探究。双生子队列被认为是开展非传染性慢性疾病遗传和环境因素研究的良好资源。本文将结合双生子队列研究的特征,分析国内外双生子队列研究现状,再围绕国内双生子队列研究存在的主要问题进行讨论,并对其设计和实施过程中的关键问题进行阐述。
- 杨少萍梅红张丹杨燕张艳梅慧彭安娜赵瑾珠谭亚飞张斌
- 关键词：双生子队列研究环境因素
- 64例老年患者呼吸道感染不动杆菌的耐药分析被引量：1
- 2009年
- 目的了解不动杆菌的耐药性，为治疗提供依据。方法查阅2007年6月-2008年6月我院微生物室有关不动杆菌感染的临床资料与数据，采用WHONET5软件统计分析。结果不动杆菌对青霉素类药物、三代头孢菌素耐药率超过84％，对第四代头孢菌素中头孢吡肟耐药率为43％，对氟喹诺酮表现出极高的耐药性。但对阿米卡星比较敏感，敏感率为62．5％。结论老年人下呼吸道感染不动杆菌逐渐增加，且耐药菌株亦有增加趋势，对轻、中度呼吸道感染患者建议首选氨基甙类。
- 邓三季邹玖明杨燕刘亮宝
- 关键词：呼吸道感染耐药分析
