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杨晓: 作品数：274 被引量：788H指数：16; 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>

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小鼠主动脉血管平滑肌原代细胞的分离培养及鉴定被引量：9: 2010年; 目的:血管平滑肌细胞在人类心血管疾病中具有重要的作用,而作为重要的遗传学研究模式生物的小鼠血管平滑肌材料有限,因此建立一种简单高效的小鼠血管平滑肌原代细胞分离培养方法很重要。方法:分离小鼠主动脉中膜层,胶原酶消化法获得原代平滑肌细胞,免疫荧光方法检测细胞的纯度和分化状态;分离平滑肌细胞特异的报告小鼠的平滑肌细胞,LacZ染色鉴定。结果:用该方法分离的原代平滑肌细胞生长迅速,3d后即可达5×106个。免疫荧光显示,细胞传至第3代后纯度在98%以上,细胞传至8代分化状态没有改变。LacZ染色鉴定报告小鼠分离的3代平滑肌细胞98%以上显示特异的蓝染。两种实验证明,应用此方法分离原代平滑肌细胞可以满足平滑肌体外功能实验的需求。结论:与传统的组织块培养法相比,该方法操作简便、经济,可以获得更多高纯度的血管平滑肌细胞。; 张鹏林福玉张迎梅杨晓; 关键词：血管平滑肌原代培养胶原酶小鼠

基因打靶技术平台的建立及肝细胞癌和骨关节炎小鼠模型的研究: 杨晓; 肝细胞癌和骨关节炎是中国的常见病和多发病，仍然缺乏有效的预防、早期诊断和治疗方法。该项目利用基因打靶技术研制的小鼠模型对于这些疾病发生发展分子机制的研究以及治疗方案和药物的评价具有重要的意义。1.国内外首先建立了HBsA...; 关键词：; 关键词：肝细胞癌骨关节炎基因打靶技术

实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体被引量：13: 2006年; 目的建立检测恙虫病东方体的实时荧光定量PCR(quantitative real-ti me PCR)方法。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计引物和探针,以克隆的56kD基因片段作DNA模板,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.999)。荧光定量PCR检测恙虫病东方体的灵敏度约为套式PCR的100倍,并且具有良好的重复性。用该定量PCR检测其它相关立克次体和病原菌DNA样本,检出结果均为0。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肺脏、肝脏标本,结果脾脏中东方体出现最早和检出量最多,肝脏和肺脏次之。血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立的荧光定量PCR方法具有很高的特异性和敏感性,可用于东方体感染早期血样本的快速检测作恙虫病感染早期诊断,并且可以定量分析评价恙虫病东方体感染的程度。; 朱丽娜张晶波陈梅玲温博海牛东升李青凤孙长俭杨晓; 关键词：恙虫病东方体实时荧光定量PCR

人α-半乳糖苷酶转导克服异种移植HAR的小鼠实验研究被引量：5: 2003年; α 半乳糖苷酶可以特异地清除半乳糖α 1,3 半乳糖抗原 (Galα1,3Galantigen) ,此抗原是引起异种器官移植超急性排斥反应 (HyperacuteRejection ,HAR)的主要异种抗原 .将构建好的α半乳糖苷酶转基因载体通过显微注射的方式注入小鼠受精卵 ,培育出了转基因小鼠 .结果表明 ,转基因小鼠的心、肝、肾、脾、肺组织中均有人α 半乳糖苷酶基因的表达 ,其表达可以有效减少小鼠器官表面Galα1,3Gal抗原的表达水平 ,可以降低转基因小鼠脾细胞对补体介导的杀伤作用的敏感性 .研究表明人源α半乳糖苷酶基因可用于研制不表达Galα1,3Gal抗原的转基因动物 ,从而可以降低异种器官移植HAR的反应强度。; 贾延军程萱任会明高新杨晓章扬培; 关键词：转导超急性排斥反应

氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分Q热疫苗的免疫原性和免疫保护性的实验研究: 贝氏柯克斯体(又称Q热立克次体)为Q热病原体。该病原体为专性细胞内寄生菌,可通过气溶胶传播,对人和动物的感染性极强,是一种重要的生物战剂/生物恐怖剂。人、畜对贝氏柯克斯体普遍易感,畜牧相关从业人员是高危人群。不管是预防贝...; 孙长俭陈梅玲杨晓温博海; 关键词：免疫保护免疫原性贝氏柯克斯体 Q热立克次体; 文献传递

表达SARS冠状病毒受体人ACE2转基因小鼠的建立被引量：3: 2008年; 目的:建立表达SARS冠状病毒的功能性受体人ACE2的转基因小鼠。方法:克隆人2型血管紧张素转换酶(hACE2)的cDNA,连入PCAGGS构建转基因表达载体,以显微注射的方法将5.6kb的转基因片段引入小鼠的受精卵。采用PCR、Southern印迹、RT-PCR、Western印迹、免疫荧光染色的方法对转基因小鼠进行鉴定。结果与结论:获得了在小鼠肺组织中表达有SARS病毒功能性受体hACE2的两个转基因小鼠系,证明了SARS病毒的S蛋白能很好地和转基因小鼠肺组织中表达的hACE2受体结合,这将为SARS的研究提供一种良好的感染动物模型。; 刘珠果吴晓洁周艳荣杨晓黄培堂林福玉陈红星; 关键词：SARS病毒基因表达

在小鼠进行基因打靶的研究进展被引量：23: 2000年; 基因打靶是在生物活体研究基因功能的有效手段．通过基因打靶可以对小鼠染色体组进行特异性的遗传修饰，包括简单的基因剔除、点突变的引入、染色体组大片段的删除和重排以及外源基因的定位整合等．近年来的研究表明，对基因打靶进行时间和空间上的调控已成为可能．; 杨晓黄培堂黄翠芬; 关键词：基因打靶基因剔除基因敲入小鼠

实时荧光定量PCR检测普氏立克次体被引量：6: 2006年; 目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测普氏立克次体的实时荧光定量PCR方法。方法根据普氏立克次体外膜蛋白B的基因(ompB)序列设计引物和探针,以克隆的OmpB基因片段作DNA模板,在荧光定量PCR检测仪(ABI 7900型)上建立实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0．999)；与巢式PCR相比较,荧光定量PCR检测敏感性是其100倍。用荧光定量PCR检测莫氏立克次体及其他相关立克次体和细菌DNA,检出结果均为阴性。用荧光定量PCR检测普氏立克次体感染的豚鼠血标本,某些样本检测为阳性,而用巢式PCR检测的结果均为阴性。结论研究中建立的检测普氏立克次体实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,适合于快速检测样本中微量普氏立克次体DNA,可用作临床实验室快速确诊流行性斑疹伤寒。; 杨晓陈梅玲温博海牛东升朱丽娜李青凤孙长俭; 关键词：流行性斑疹伤寒普氏立克次体实时定量PCR

角质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立被引量：17: 2003年; 构建了含有角质细胞特异性角质素 5启动子、Cre重组酶基因和人生长激素基因polyA的转基因载体pK5 Cre hGH。以显微注射的方法将 4 2kb的转基因片段K5 Cre hGH引入小鼠基因组 ,共注射 72 0枚受精卵 ,其中 6 95枚移植至 2 9只假孕母鼠的输卵管中发育 ,获得子代小鼠 48只 ,经基因型鉴定有 12只小鼠在其基因组上整合有Cre基因 ,整合率为 2 5 %。将带有Cre重组酶基因的小鼠与基因组上携带loxP位点的Smad4条件基因打靶小鼠杂交以检测Cre重组酶组织特异性表达情况以及介导重组的功能。结果表明 ,K5 Cre转基因小鼠只在皮肤组织中表达Cre重组酶并能在体内成功地介导loxP位点的重组。; 毛春明杨晓程萱吕娅歆周江黄翠芬; 关键词：CRE 转基因小鼠组织特异性

Smad4诱导大规模染色质伸展结构域定位: 2004年; 目的 :了解Smad4能否调节大规模染色质结构改变并对其功能区域进行定位。方法 :将Smad4及其缺失突变体与 pRC lac载体上lac的阻遏物融合并在AO3 1细胞中表达。该细胞株由CHO细胞衍变而来 ,整合有 2 5 6个拷贝串联排列的lac操纵基因。在lac操纵子基因上游含有DHFR基因 ,可用甲氨蝶呤 (MTX)进行基因共扩增。在细胞中lac阻遏物识别和结合lac操纵子基因。用抗lac阻遏物抗体进行免疫组化试验 ,荧光显微镜下观察染色质结构的改变。结果 :野生型Smad4 (1～ 5 5 2aa)有一定的诱导染色质伸展能力 ,且不依赖于TGF β。N端区域 (1～ 15 0aa)、中间连接区域 (130～ 32 5aa)没有诱导大规模染色质伸展活性。C端区域 (2 6 0～ 5 5 2aa)有一定的诱导染色质伸展能力 ,而C端缺失 38个氨基酸残基的区域 (2 6 0～ 5 14aa)能强烈地诱导大规模染色质伸展。结论 :Smad4诱导大规模染色质伸展结构域位于 2 6 0～ 5 14位氨基酸之间 ,C端 38个氨基酸对Smad4诱导大规模染色质伸展有抑制作用。对Smad4诱导大规模染色质伸展活性特性的研究为揭示Smad4在肿瘤发生发展中的作用机制提供了新的途径。; 严景华方言吕秋军黄翠芬杨晓叶棋浓; 关键词：SMAD4 结构域

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