杨华卫
- 作品数：15 被引量：56H指数：4
- 供职机构：生物芯片北京国家工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育振兴行动计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 直接杂交法检测痰液中结核分枝杆菌被引量：2
- 2001年
- 目的建立了一种高度灵敏、特异、快速和简便的探针杂交检测技术，以解决临床上结核病快速诊断的难题。方法采用简易的方法处理标本，以对结核分枝杆菌特异的生物素标记 １８８ ｈｐ ＤＮＡ探针进行点杂交，与链霉亲合素标记的辣根过氧化酶偶联后，以化学发光自显影方式记录检测信号。结果 此法的敏感性可检出２００个菌，较ＰＣＲ法为高。对２０种分枝杆菌和９种非分枝杆菌检测时发现只有结核分枝杆菌呈阳性。以本法检测１０４例临床标本，结果发现，对其中４５例结核病人痰涂片阳性标本，４１例结核病人痰涂片阴性标本和１８例非结核标本，检测阳性率分别为１００％、６５．９％和０．０％。结论本法简便，特异。
- 杨华卫杨树德庄玉辉张灵霞
- 关键词：结核分枝杆菌痰液
- rDNA探针杂交检测病人痰标本中结核杆菌的研究被引量：10
- 2000年
- 应用结核分枝杆菌特异的rDNA探针杂交检测痰标本中的结核杆菌rDNA ,评价其在临床标本检测中的应用价值。方法 用引物b对结核分枝杆菌 1 6S - 2 3SrDNA间隔区序列进行扩增 ,同时加入生物素标记 ,制成 2 50bp的rDNA探针。对该探针的敏感性、特异性进行了研究 ,并对 90份结核病人 ,30份非结核病人痰标本的PCR产物进行了斑点杂交检测。结果 rDNA探针检测引物bPCR扩增产物的敏感性为 1 0 0pg。rDNA探针与受试 2 4种分枝杆菌和 1 1种非分枝杆菌引物bPCR扩增产物杂交只有结核分枝杆菌、胃分枝杆菌为阳性杂交 ,特异性较高。而rDNA探针对 90份结核病人痰标本引物b扩增产物检测的阳性率为 80 .2 % ,高于PCR扩增产物电泳检测结果 (64% )。rDNA探针与 30份非结核病人痰标本杂交结果均为阴性杂交。结论 rDNA探针与引物bPCR扩增相结合能提高结核病人痰标本检测的敏感性与特异性。
- 张灵霞庄玉辉杨华卫李邦印夏湘萱
- 关键词：结核分枝杆菌聚合酶链反应肺结核
- 两种DNA探针杂交检测结核分支杆菌方法的研究被引量：4
- 2000年
- 为改进结核杆菌DNA探针的特异性与实用性,研制了以生物素标记的两种对结核分支杆菌特异的DNA探针:一个5’端标记的20bp的寡核苷酸探针和一个采用PCR方法合成的188bp长链探针。两种探针分别与结核分支杆菌的全染色体DNA,以及基因组上IS6110序列的一段317bp的PCR扩增产物进行斑点杂交,以碱性磷酸酶(AP)催化的染色反应检测,测试了两个探针的敏感性和特异性。系统地比较研究了两种探针杂交检测条件:探针的浓度选择,杂交温度与洗膜温度的选择,以及杂交与洗膜温度对检测的敏感性与特异性的影响。寡核苷酸探针和188bp探针杂交检测纯化结核分支杆菌基因组DNA的敏感性分别为100ng与6ng,杂交检测PCR产物的敏感性分别是400pg与50pg。两探针的最佳杂交浓度均为40～160ng/ml,最佳杂交温度分别是42℃与68℃,最佳洗膜温度分别是60℃与60～68℃之间。两种探针均仅与结核分支杆菌及BCG有杂交信号,而与其它受试分支杆菌及非分支杆菌杂交结果都呈阴性。它们的特异性都很强,但188bp探针的敏感性约是寡核苷酸探针的7～16倍,而且188bp探针检测本底较低。
- 杨华卫杨树德庄玉辉李国利李邦印
- 关键词：斑点杂交结核分支杆菌DNA探针
- 细菌荧光酶报告基因载体构建及在Hela细胞中的表达
- 1999年
- 采用ＰＣＲ点突变技术，构建含有细菌荧光酶融合ｌｕｘＡＢ报告基因的重组哺乳动物载体ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ，脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染和Ｇ４１８抗性筛选稳定转染的Ｈｅｌａ细胞。ＰＣＲ和酶切电泳证明构建的正确性；经稳定转染ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ的Ｈｅｌａ细胞，用发光仪可测得较强的发光强度（最大值为４．１２ｍＶ／４０μｇ细胞总蛋白粗提物）。而亲本及ｐｃＤＮＡ３稳定转染的Ｈｅｌａ细胞则在本底值范围，ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ稳定转染与亲本及ｐｃＤＮＡ３稳定转染的Ｈｅｌａ细胞在细胞形态和培养条件等方面无明显差异。本工作为细菌荧光酶作为报告基因在肿瘤细胞中的表达和应用建立了基础。
- 茆灿泉杨树德赵玫范云霞徐枫杨华卫黄常志
- 关键词：报告基因PCR
- 应用DNA探针杂交化学发光自显影检测结核分枝杆菌被引量：10
- 2002年
- 杨树德杨华卫高振翔
- 关键词：DNA探针原位杂交化学发光结核分枝杆菌
- 结核杆菌痰标本前处理液及其应用
- 一种辣根过氧化物酶标记核酸探针杂交的结核杆菌痰标本前处理液，它包括初处理液和裂解液，所述的初处理液为NaOH溶液，其浓度为4mol/L，所述的裂解液包括NP40，Tris-HCl，NaCl，MgCl<Sub>2</Sub...
- 杨树德杨华卫
- 文献传递
- 两种DNA探针杂交在检测结核杆菌中的应用研究
- 为建立一种敏感、特异、快速诊断结核病的方法，本研究以PCR联用探针方法作为对照，对两种类型，两利酶标的DNA探针直接杂交检测结核杆菌的方法与条件及其临床应用做了较系统的研究。
制备、标记两种...
- 杨华卫
- 关键词：结核分枝杆菌显色反应化学发光
- 文献传递
- 产碳青霉烯水解酶不动杆菌的耐药机制研究
- 首次在中国发现了产碳青霉烯酶的临床不动杆菌菌株,此碳青霉烯酶等电点(PI)为8.9,并且受EDTA抑制.碳青霉烯类抗生素是治疗产超广谱酶(extended spectrum beta-lactamase,ESBLs)和染...
- 杨华卫
- 关键词：EDTA
- SARS冠状病毒基因芯片的制作与初步临床样本验证被引量：16
- 2003年
- 为了实现对非典(SARS)冠状病毒感染患者的早期诊断,构建了一套以基因芯片为基础的SARS冠状病毒基因分析检测系统。首先从患者痰、血样本中快速分离出SARS冠状病毒的RNA,然后通过巢式RT-PCR对分离的RNA进行扩增获得特定的DNA片段,最后让固定在基因芯片上的DNA探针与扩增产物进行杂交以检验扩增产物的序列匹配性,达到最终确认SARS冠状病毒感染患者的目的。对首期两例患者痰样本和两例全血样本的分析结果表明,这4例患者样本中均存在SARS冠状病毒。
- 陶生策杨仁全李泽张治位周一鸣张琼朱沛轩杜建宇赵传赞马清梅任丽丽王璨蒋迪刘彦华杨华卫荣利安爽李喆王健伟程云刘欧郑重左焕琮闪全忠阮力吕占秀洪涛程京
- 关键词：SARS冠状病毒基因芯片
- 用DNA芯片检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇基因突变的研究被引量：2
- 2006年
- 目的利用DNA芯片快速检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇embB基因突变。方法根据结核分枝杆菌embB基因序列设计探针并制作DNA芯片,根据结核从分枝杆菌embB基因突变的热点片段设计引物,该片段用TAMRA荧光标记PCR扩增增后与DNA芯片杂交,同时以PCR—SSCP和DNA测序法为对照。结果120株结核分枝杆菌临床分离株中,35株敏感株DNA芯片杂交结果与标准株完全相同；85株耐乙胺丁醇临床分离株中有50株检测到embB基因突变[58．8％(50／85)],均为306位密码子突变,该突变与PCR-SSCP和测序结果完全一致；85株耐药株中后有35株未检测到突变,占41．2％(35／85)。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株的embB基因突变,可协助临床医生制定合理的治疗方案,特别是复治患者,可帮助选择有效药物。
- 张俊仙吴雪琼张琼梁建琴张洪恩鲁红利李洪敏陆阳杨华卫阳幼荣王全立
- 关键词：结核分枝杆菌乙胺丁醇EMBB基因DNA芯片
