李明华
- 作品数：26 被引量：28H指数：3
- 供职机构：北京大学深圳医院更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TGF-β_2特异性siRNA载体干扰人结膜囊成纤维细胞表达的研究被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨人转化生长因子TGF-β2特异性siRNA真核表达载体转染人结膜囊成纤维细胞后对其TGF-β2mRNA表达的影响。方法:体外分离并培养人结膜囊成纤维细胞,在培养后传代3次的细胞以TGF-β2特异性siRNA真核表达载体进行转染,并以未转染细胞作为对照。转染后分别于24,48和72h收集细胞,采用RT-PCR技术检测TGF-β2特异性siRNA真核表达载体对TGF-β2mRNA表达的影响。结果:分离的人结膜囊成纤维细胞于接种约4h左右开始贴壁,同时细胞变长成为梭形,表现出明显的成纤维细胞特性,约36h后达到融合状态;RT-PCR结果示:与对照组相比,转染24,48和72h后的细胞TGF-β2表达抑制率分别为17.40%,52.80%和79.20%,抑制效率呈现随时间延长有所加强的趋势。结论:TGF-β2特异性siRNA真核表达载体能抑制人结膜囊成纤维细胞TGF-β2mRNA的表达。
- 乔芳张芳婷傅培李明华
- 关键词：TGF-Β2SIRNA
- 睾丸移植物间质细胞4种基因的表达分析
- 2011年
- 目的研究新生小鼠睾丸组织异体异位移植后，4种在睾丸间质细胞中起重要作用的基因表达情况，为异体异位睾丸组织移植模型用于科研及临床的可行性提供进一步实验数据。方法将162只1-2d昆明小鼠的睾丸移植到54只7-12w去势雄性免疫缺陷小鼠背部；在移植后9个时间段（3d和1-8w）取出移植物；选取4种在睾丸间质细胞中表达或高表达的基因313．hsd、1r、p450scc和star，采用聚合酶链反应，对发育不同阶段移植物中4种基因的表达情况进行分析，并与正常小鼠相应各年龄段睾丸中的基因表达情况相比较。结果在9个时间段取出的移植物中，所测定4种基因的表达趋势与在正常小鼠睾丸中所见基本相同。结论新生小鼠睾丸组织异体异位移植到免疫缺陷小鼠体内后，间质细胞4种受试基因的表达趋势与在正常小鼠中的表现基本相同。
- 徐安平夏勇杨会林龙霞李明华万汇涓于洁
- 关键词：莱迪希细胞基因表达
- miR-34和miR-19与其靶基因在甲状腺乳头状癌中的表达被引量：4
- 2017年
- 目的通过研究miR-34和miR-19与其靶基因在甲状腺乳头状癌中表达情况,探讨其在甲状腺癌发病中的作用。方法采用荧光定量PCR技术检测miR-34、miR-19、survivin和PTEN基因在甲状腺乳头状癌和非癌组织标本中转录表达水平。
- 范昭刘淼胡慧李明华龙霞叶静
- 关键词：甲状腺乳头状癌SURVIVINPTEN
- 异体异位发育小鼠睾丸组织中精子功能相关基因和蛋白的表达研究被引量：2
- 2011年
- 目的采用已建立的未成熟睾丸组织移植模型，研究异体异位生长发育的小鼠睾丸组织中精子功能相关基因Asrgll、Gpx4、Asp、Prdx4和spa17及其相关蛋白GPX-4和PRX-IV的表达，以进一步评估该移植模型在生殖医学中应用的可行性。方法以1-2d小鼠睾丸组织为供体，7-12周雄性免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植；移植8周后收取移植物组织，采用荧光定量PCR法检测移植物中Asrgll、Gpx4、Asp、Prdx4和spa17的表达情况，并与正常小鼠睾丸组织进行对比；同时采用Western blot检测GPX-4和PRX-IV2种蛋白的表达情况。结果基因检测显示，5种受试基因在移植物中的表达与8周正常小鼠睾丸组织相比均有下调；蛋白分析提示，GPX-4和PRX-IV2种蛋白在8周正常小鼠睾丸组织中表达而在小鼠睾丸组织移植物中表达缺陷。结论几种主要在精子运动、精子项体形成及精子的受精功能中发挥作用的基因和蛋白在移植物中表达下调及缺失提示。
- 杨会林龙霞虎义平李明华徐安平高书颖于洁
- 关键词：免疫缺陷小鼠
- 血管紧张素Ⅱ对肝癌细胞系HEPG2发生上皮间质转化的影响被引量：1
- 2015年
- 目的通过血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激肝癌细胞系HEPG2,探讨其是否可以促进HEPG2发生上皮间质转化(EMT)。方法使用AngⅡ刺激HEPG2,进而采用蛋白印记法对HEPG2中Vimentin和E-cadherin蛋白表达水平进行检测;探讨其发生EMT的合适时间;并使用AngⅡ的抑制剂Ang1-7和Ang1-7的抑制剂A779进行干预,明确AngⅡ诱导HEPG2发生EMT的作用。结果 AngⅡ刺激下,HEPG2中E-cadherin转录水平下降,Vimentin转录水平升高;最适宜刺激时间是48 h。AngⅡ诱导HEPG2发生EMT的作用可部分被抑制剂Ang1-7抑制。结论 AngⅡ刺激下,HEPG2可以发生EMT。
- 齐明华叶静虎义平漆正宇李明华孙亮万汇涓刘吉奎尹耀新欧希余光银
- 关键词：肝癌细胞系上皮间质转化
- 异体异位发育小鼠睾丸组织中凋亡相关基因和DNA损伤修复基因表达的研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨异体异位移植睾丸中生精细胞退化的可能机制。方法以新生1～2 d小鼠睾丸组织为供体,免疫缺陷的雄性去势裸鼠为受体进行组织移植,分别在移植后不同时间(3 d和1～8周共9个时间段)收集移植物组织,提取移植物总RNA,采用半定量RT-PCR检测不同发育阶段移植物中凋亡相关基因fas、bcl-2、bax和caspase3以及DNA损伤修复基因xrcc1、ogg1、ercc1、brca1和brca2的表达,并与相应年龄段正常小鼠睾丸组织中的基因表达进行比较分析。结果与正常发育的小鼠睾丸组织相比,小鼠睾丸移植物中生精细胞退化增加,凋亡相关基因bcl-2表达降低,fas、bax和caspase3表达增加;DNA损伤修复基因xrcc1、ogg1、ercc1、brca1和brca2的表达量均有不同程度的降低。结论新生小鼠睾丸组织移植到免疫缺陷裸鼠体内后,生精细胞退化增加,这可能与促凋亡基因表达增加和抑制凋亡基因表达降低,以及DNA损伤修复基因表达降低有关。
- 代延朋李明华龙霞叶静于洁
- 关键词：睾丸基因DNA修复
- 白藜芦醇对大鼠冻存卵巢组织自体异位移植功能影响的研究被引量：1
- 2020年
- 目的:探究白藜芦醇对大鼠冻存卵巢组织自体异位移植功能的影响。方法:选取24只成熟雌性Wister大鼠,并分为空白对照组、移植组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组,每组各6只。移植组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组采用手术摘取卵巢,使用玻璃化冷冻保存2周。低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组卵巢组织在白藜芦醇溶液中平衡,且在大鼠冻存卵巢组织自体异位移植前、后分别腹腔注射5、10μmol/L白藜芦醇处理,移植组注射等量生理盐水。使用HE染色后光镜下观察卵泡情况,并记录各组大鼠异常卵泡数目百分比。记录各组大鼠月经恢复情况,检测各组大鼠血清内氧化应激相关物质超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧基团(ROS)含量水平。分别于第4、8周检测各组大鼠血清激素E2及P的分泌情况。结果:相比空白对照组,移植组异常卵泡数目百分比、ROS含量水平均显著升高,SOD含量及第4、8周大鼠E2及P含量均显著降低(P<0.05);相比移植组,低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组异常卵泡数目百分比、月经恢复时间、ROS含量水平均显著降低,第4、8周E2、P和SOD含量均显著升高(P<0.05)。结论:白藜芦醇对大鼠冻存卵巢组织自体异位移植功能恢复有促进作用,同时可以降低大鼠氧化应激反应保护大鼠卵巢。
- 付敏李明华耿岚
- 关键词：卵巢组织自体异位移植白藜芦醇冷冻保存
- Notch1胞内段荧光表达质粒的构建及鉴定
- 2014年
- 目的:构建能够在鼻咽癌细胞株中高效表达人Notch1信号胞内段(NIC)的荧光质粒。方法:通过RT-PCR获得人NIC的cDNA;利用基因重组技术插入到pEGFP-N1中;在脂质体介导下转染人低分化鼻咽癌细胞CNE2后,经荧光显微镜、RT-PCR和Western blot检测NIC的表达情况。结果:RT-PCR方法得到一条2424bp的特异性扩增产物,酶切和基因测序结果表明重组质粒构建成功。转染48h后,检测到绿色荧光表达,RT-PCR和Western blot的结果显示NIC的表达量升高。结论:正确构建了人NIC荧光表达质粒。该质粒能够在鼻咽癌细胞株中高效表达,为研究Notch信号通路在鼻咽癌中的作用奠定了实验基础。
- 李明华张芳婷高书颖于洁
- 关键词：鼻咽癌质粒构建
- AngⅡ通过刺激肝癌细胞发生上皮间质转换促进肝癌转移被引量：1
- 2017年
- 目的探讨肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)在肝癌组织中的表达及血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激肝癌细胞发生上皮间质转换现象.方法搜集56例肝癌手术标本,组织标本石蜡切片,免疫组织化学法测定血管紧张素转化酶1(angiotensin converting enzyme 1,ACE1)、ACE2、vimentin、ecadherin蛋白表达定量;将细胞分组,用AngⅡ刺激肝癌细胞系,比较不同分组细胞系vimentin、ecadherin蛋白表达差异.结果与正常组织相比,肝癌组织ACE1、AT1表达上升,上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)标志物vimentin蛋白表达均上升,ecadherin均下降.AngⅡ刺激下,SSMC7721细胞系的vimentin基因和蛋白表达均上升,ecadherin下降;加入AngⅡ的抑制剂Ang1-7后,这种变化受到抑制;加入Ang1-7的抑制剂A779后,再次出现vimentin上升,ecadherin表达下降.单独加入A779与对照组差别不大.结论 AngⅡ可能通过刺激肝癌细胞发生EMT对肝癌的转移起到促进作用.
- 齐明华刘吉奎叶静李明华万汇涓漆正宇尹耀新欧希余光银
- 关键词：肾素血管紧张素醛固酮系统肝癌细胞
- 重组人Jagged1蛋白促进细胞因子对脐血干细胞的扩增
- 2010年
- 目的探讨重组人Jagged1蛋白对脐血干细胞体外扩增的促进作用。方法利用免疫磁珠法分离人脐带血CD34+细胞,并将其分为4组,分别为:对照组、Jagged1蛋白组、细胞因子组、Jagged1蛋白+细胞因子组。培养6d后,通过台盼蓝染色和MTT等方法检测各组细胞的生长状况;同时采用RT-PCR方法检测干细胞表面标志物CD34+的表达情况。结果以上4组细胞在体外增殖6d后的细胞浓度分别为(0.4±0.1)、(1.3±0.5)、(5.0±0.8)和(10.2±1.5)×104.mL-1;RT-PCR检测显示,各组细胞扩增6d后均有CD34+表达。结论Jagged1蛋白能够促进脐血干细胞的体外扩增,而且Jagged1蛋白与其他促进细胞增殖的因子配伍对脐血干细胞在体外的扩增作用更加明显。
- 王颖李明华龙霞张芳婷于洁
- 关键词：JAGGED脐血干细胞细胞因子体外扩增
