李志
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中山大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶3基因的克隆、表达与免疫原性分析被引量：1
- 2009年
- 目的研究小鼠对阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)半胱氨酸蛋白酶3(TvCP3)重组蛋白的免疫应答。方法用PCR方法从阴道毛滴虫基因组DNA扩增TvCP3基因编码序列,分别用编码前体酶和成熟酶的基因片段构建重组表达质粒pET28b-TvCP3和pET28b-TvCP3C,转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)后进行诱导表达,通过金属螯合层析法(im-mobilized metal affinity chromatography,IMAC)纯化表达产物重组蛋白,复性后免疫BALB/c小鼠。BALB/c小鼠分为TvCP3免疫组、TvCP3C免疫组和对照组3组,每组6只,分别用TvCP3重组蛋白、TvCP3C和PBS免疫小鼠。第1次25μg/只,福氏完全佐剂乳化;第2次25μg/只,福氏不完全佐剂乳化;第3次与第4次12.5μg/只,水剂。前3次免疫间隔2周,第4次间隔1周。末次免疫后1周用ELISA测定血清抗体滴度。采集高滴度小鼠血清制备免疫血清,通过蛋白质印迹(Western blotting)分析抗体所识别的阴道毛滴虫虫体或其分泌物中的特异性抗原组分。结果重组表达质粒pET28b-TvCP3和pET28b-TvCP3C均能在E.coli BL21(DE3)中高效表达,重组蛋白占菌体总蛋白的25%以上;ELISA结果显示,纯化的重组蛋白TvCP3和TvCP3C免疫小鼠4次后血清抗体效价分别达1︰204800和1︰102400;Western blotting分析显示,小鼠免疫血清能特异性识别表达产物中的目的蛋白,以及阴道毛滴虫虫体或分泌物中的特异性抗原组分。结论重组表达质粒pET28b-Tvcp3和pET28b-Tvcp3C可在E.coli BL21(DE3)中高效表达,纯化的表达产物具有良好的免疫原性。
- 贾万忠李志赵亮聂芳芳伦照荣
- 关键词：阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶3重组抗原酶联免疫吸附试验BALB/C小鼠
- 病毒微小RNA的发现及其功能被引量：3
- 2007年
- 病毒微小RNA(microRNA,miRNA)是新发现的一类miRNA.它通过诱导mRNA切割降解、翻译抑制或其他机制调节宿主细胞和/或病毒自身靶基因的表达,改变宿主细胞的生命活动或病毒自身复制,从而对抗和逃避宿主免疫监视,达到保护病毒自身的目的.寻找病毒miRNA分子、作用靶标基因,以及鉴定其生物学功能已成为研究的新热点.本文回顾了病毒miRNA的研究历史,分析了它在基因组中分布特点、生物学功能、作用机制以及病毒miRNA与其他生物miRNA的异同点,最后展望了病毒miRNA的研究方向和在疾病防治中的应用前景.随着病毒miRNA的鉴定和功能的深入研究必将促进相关领域的发展,尤其为病毒病的控制带来新的思路和方法.
- 贾万忠李志伦照荣
- 关键词：病毒MICRORNA基因调控
- 非洲锥虫抗人血清相关基因的进化被引量：1
- 2009年
- 抗人血清相关蛋白(SRA)是非洲睡眠病的病原体布氏锥虫罗得西亚亚种抵抗人血清中的锥虫溶解因子溶解的关键蛋白.该蛋白同时也作为鉴定罗得西亚亚种的重要分子标记.本研究从锥虫亚属各物种的基因组中克隆出与SRA同源的基因片段SRAbc,并对其进行了测序和结构分析.测序结果显示,各物种之间的SRAbc核酸序列同源性高达82%,表明SRAbc在锥虫亚属的种类中具有起源相同并相对保守的特性.由于在罗得西亚亚种内同时存在SRA和SRAbc,故认为SRAbc可以作为VSG重组的"供体VSG",通过复制和插入机制整合表达位点.在自然选择的压力下,SRAbc将可能再次进化成有功能的SRA基因.
- 赖德华王巧平李志JULIUS Lukes伦照荣
- 关键词：进化
- 阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶基因变异分析被引量：2
- 2008年
- 目的研究阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶(TvCP)基因变异特点,为分子种系发生和遗传进化等提供参考资料。方法利用PCR扩增TvCP基因,用pBS-T或pET28b载体构建重组质粒,转化大肠埃希菌,筛选阳性克隆,测定目的基因序列。通过以序列相似性为基础的数据库搜索方法检索同源序列,利用Clustal X、DNAstar等软件分析TvCP基因核苷酸和氨基酸序列多态性、遗传变异和进化规律。结果克隆的TvCP2和TvCP3基因与数据库中相应参考序列在核苷酸和氨基酸水平上的相似性均为99%以上,高度保守。克隆的TvCP4基因与TvCP4参考序列在核苷酸和氨基酸水平上的相似性为97.5%以上,属于TvCP4基因家族的两个不同成员。根据阴道毛滴虫基因组数据库信息,经分析表明TvCP4酶前体由305个氨基酸残基组成,共有大小一致的TvCP4同源分子9个和N-末端缺少部分氨基酸残基的同源分子2个,它们之间的氨基酸序列相似性为62.3%～96.7%。TvCP4、TvCP1-3、TvCP12、TvCP25和半胱氨酸蛋白酶65(CP65)之间也有同源性,氨基酸序列相似性约为61%～88.2%。此外,阴道毛滴虫还拥有为数众多的其他组织蛋白酶L样成员,TvCP构成呈高度多样性。序列联配和聚类分析表明TvCP酶活性位点、酶前体结构中ERFNIN样基序和形成二硫键的半胱氨酸残基数目和位置非常保守,进化树分析也表明它们可能由共同的祖先分子通过基因复制和不断突变进化而来。结论TvCP组成一蛋白酶家族,家族内各成员酶活性位点上残基高度保守,但其他位点上的序列呈现高度多态性;推测TvCP家族各成员可能由一个共同的祖先基因分子进化而来,在保持酶基本功能的同时又赋予多样的功能。
- 贾万忠李志赵亮伦照荣
- 关键词：阴道毛滴虫进化树
- 诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和精氨酸酶(arginase)在大鼠巨噬细胞抵抗弓形虫感染中的作用
- 与小鼠相比,大鼠腹腔巨噬细胞具有较强的自然抵抗弓形虫(Toxoplasma gondii)感染的生物学特性。正常生理状态下,巨噬细胞中的诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和精氨酸酶(arginase)共用同一底物L-精氨酸...
- 李志聂方方伦照荣
- 文献传递
- 人血清锥虫溶解因子与锥虫抗血清相关蛋白被引量：1
- 2008年
- 分布于非洲的锥虫亚属布氏锥虫罗得西亚亚种和冈比亚亚种可感染人,引起人的非洲锥虫病,而布氏锥虫指名亚种、伊氏锥虫和马媾疫锥虫却不能感染人。人血清中的锥虫溶解因子和锥虫抗血清相关蛋白在其中起着关键作用。本文对人血清锥虫溶解因子和锥虫抗血清相关蛋白的研究进展进行了综述。
- 李志伦照荣
- 源于不同地里区域的伊氏锥虫虫株对人血清的自然耐受性及其在选择压力下的适应性
- 赖德华王巧平李志Simon Reid伦照荣
