李嘉杰
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒的构建及其在人神经胶质瘤U251细胞中的稳定过表达被引量：1
- 2012年
- 目的建立稳定过表达pcDNA3.1/连接蛋白43(Cx43)重组质粒的人神经胶质瘤U251细胞系。方法设计人Cx43的引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从低表达Cx43的U251细胞中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒,经酶切、PCR、测序检测构建的正确性。采用脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,G418筛选出稳定转染的细胞系,采用RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染pcDNA3.1/Cx43重组质粒的U251细胞中Cx43基因、蛋白的表达水平。结果酶切、PCR及测序表明pcDNA3.1/Cx43重组质粒构建成功,筛选获得稳定过表达Cx43的U251细胞。结论构建了pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒及稳定过表达Cx43的U251细胞株,为下一步以Cx43为靶标进行人神经胶质瘤的基因治疗研究奠定了实验基础。
- 李嘉杰闻海兵邹树峰严剑洪涛
- 关键词：质粒连接蛋白43逆转录聚合酶链反应
- 过表达缝隙连接蛋白Cx43与人脑胶质瘤细胞U251侵袭性的研究
- 2011年
- 目的通过上调脑胶质瘤细胞U251的Cx43表达水平,检测其对U251侵袭能力的影响,为抑制肿瘤的恶性浸润提供新的治疗途径。方法通过构建缝隙连接蛋白Cx43真核表达重组质粒,并转染U251细胞,过表达U251细胞缝隙连接蛋白Cx43,RT-PCR及Weston-blot检测Cx43 mRNA及蛋白表达水平变化。用Traswell细胞培养板结合MTT法测定U251细胞侵袭能力的改变。结果 (1)成功构建pCMV-Cx43 cDNA重组质粒。(2)成功转染U251细胞并筛选稳定转染过表达Cx43细胞株。(3)Traswell细胞培养板结合MTT法,检测到过表达Cx43后U251细胞侵袭能力较正常组下降。结论过表达缝隙连接蛋白Cx43能抑制人脑胶质瘤细胞U251侵袭能力。
- 闻海兵邹树峰李嘉杰洪涛
- 关键词：质粒转染缝隙连接蛋白CX43人脑胶质瘤细胞侵袭性
- 转染缝隙连接蛋白CX43在脑胶质瘤化疗旁观者效应影响的体外实验研究被引量：2
- 2011年
- 背景与目的:肿瘤细胞受损伤时,其旁边未受损肿瘤细胞也出现损伤的现象称为旁观者效应,国内外研究发现多种肿瘤组织在体内外存在该效应,为进一步明确脑胶质瘤在药物化疗时是否存的旁观者效应以及CX43(缝隙连接蛋白43)对该效应的影响,通过构建并转染pCMV-Cx43cDNA质粒入C6细胞,上调缝隙连接蛋白CX43表达,增强缝隙连接功能,探讨转染缝隙连接蛋白CX43对脑胶质瘤化疗体外旁观者效应影响。方法:(1)通过C6细胞培养,并提取总RNA,行RT-PCR、质粒酶切及连接等,构建缝隙连接蛋白CX43真核表达重组质粒pCMV-Cx43cDNA;(2)通过脂质体行重组质粒pCMV-Cx43cDNA转染C6细胞,过表达C6细胞缝隙连接蛋白CX43,RT-PCR及Weston-blot检测CX43 mRNA及蛋白表达水平变化。划痕荷载染料传输实验法检测转染缝隙连接蛋白CX43后缝隙连接功能;(3)通过体外TRASWELL细胞共培养模型,将转染pCMV-Cx43cDNA、空载体细胞分别分成化疗药物替膜唑胺处理组与替膜唑胺未处理组细胞,然后将两组细胞按一定比例分别接种TRASWELL细胞共培养板膜两侧,检测未化疗处理细胞存活率及凋亡率,观察体外转染CX43对体外化疗旁观者影响。结果:(1)成功构建带CX43目的基因的真核表达pCMV-Cx43cDNA重组质粒;(2)成功转染C6细胞并筛选稳定转染过表达CX43细胞株(C6-Cx43)及转染空载体的细胞株(C6-non),C6-Cx43细胞Cx43mRNA及CX43蛋白表达显著增加;(3)在体外TRASWELL细胞共培养模型中,观察到体外未化疗细胞凋亡的旁观者效应,(C6-Cx43)组与对照组差异存在明显统计学意义。结论:(1)C6细胞转染重组质粒pCMV-Cx43cDNA,缝隙连接蛋白CX43表达增高,C6细胞GJIC功能增强;(2)在体外化疗时,C6-Non、C6-Cx43都存在化疗旁观者效应,而C6-Cx43的化疗旁观者效应显著。即转染缝隙连接蛋白CX43能放大体外化疗的旁观者效应。
- 闻海兵李嘉杰邹树峰严剑魏敏俊刘先波颉奎洪涛
- 关键词：化疗旁观者效应缝隙连接蛋白CX43质粒构建转染
- 脑血管痉挛中缝隙连接蛋白Cx43、Cx40磷酸化水平及其磷酸化位点分析
- 目的：
心脑血管系统中主要表达和起作用的缝隙连接蛋白为Cx43和Cx40，其磷酸化在许多心脑血管疾病中扮演着重要角色。本实验在前期研究的基础上，分析脑血管痉挛中缝隙连接蛋白Cx43、Cx40的磷酸化水平并利用质谱技...
- 李嘉杰
- 关键词：磷酸化位点脑血管痉挛缝隙连接蛋白
- 缝隙连接蛋白S368位点突变的慢病毒载体构建及鉴定
- 2012年
- 蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛（CVS）的发生发展机制一直是神经科学研究领域的难题。临床上其发病率高，总体治疗效果和愈后不佳。我们的研究结果显示缝隙连接蛋白（Cx43）与SAH后CVS的发生发展有着紧密关联。
- 刘先波李嘉杰邹树峰魏敏俊严剑洪涛
- 关键词：缝隙连接蛋白位点突变慢病毒蛛网膜下腔出血脑血管痉挛
