李会娟
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 双歧杆菌介导的肿瘤基因-放射治疗基础研究:双歧杆菌的转化研究
- 目的双歧杆菌是专性厌氧的人体益生菌,可选择性地在实体肿瘤的乏氧组织中滞留并增殖,是肿瘤基因-放射治疗中较理想的治疗基因递送载体.但目前双歧杆菌的转化是一个技术难题,与大肠杆菌等宿主菌的高转化效率不同,采用普通的原核质粒无...
- 杨业鹏石屹李载权周梅李会娟张志豹李五岭
- 关键词：双歧杆菌电转化穿梭质粒
- 双歧杆菌介导的肿瘤基因-放射治疗基础研究:双歧杆菌中质粒高效启动子的筛选
- 目的 构建双歧杆菌中启动子活性报告载体,检测不同启动子作用下报告基因的表达状况,以筛选出双歧杆菌质粒的高效启动子、实现治疗基因在双歧杆菌中的高效表达,为深入开展以双歧杆菌为基因递送载体的肿瘤基因-放射治疗研究奠定基础.方...
- 杨业鹏李会娟李载权周梅石屹上官文学李五岭
- 关键词：双歧杆菌启动子胞嘧啶脱氨酶
- 一种含双歧杆菌种属特异性复制子的新型大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒的构建
- 2010年
- 目前,双歧杆菌的转化是一个技术难题,与大肠杆菌等宿主菌的高转化效率不同,采用普通的原核质粒无法转化双歧杆菌.为此,本文提出双歧杆菌转化对质粒复制子具有"种属特异性"要求,并通过构建含有双歧杆菌特异复制子的新型穿梭质粒,以求解决这一难题.首先从GenBank获取长双歧杆菌隐性质粒pMB1的序列信息,采用Overlap-PCR方法获得其全长DNA,作为拟构建质粒的复制子;继而采用重组技术,将其与pMK4质粒片段(含大肠杆菌复制子pUC和抗氯霉素基因Cat)重组,构建大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒;用电穿孔法将重组质粒转化双歧杆菌,通过观察不同电转参数下的转化效率,选择双歧杆菌转化的最佳条件.结果,成功获得全长1899bp的pMB1复制子并构建成功含有pMB1和pUC双复制子的原核重组质粒,经酶切和测序鉴定正确,命名为pCMB1.以重组质粒成功转化了长双歧杆菌NCC2705和NQ1501,而其它3种野生型双歧杆菌(包括1株长双歧杆菌)未能转化成功.结论:质粒中含有双歧杆菌种属特异的复制子是实现双歧杆菌转化的必要条件;即使是含有特异复制子的质粒也只能转化有限数量种型甚至有限数量种株的双歧杆菌;选择最佳电转化条件能显著提高转化效率.
- 石屹杨业鹏李载权周梅李会娟张志豹李五岭
- 关键词：双歧杆菌复制子穿梭质粒
