李丽
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 供职机构：首都医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：北京市教育委员会科技发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人rBPI_(23)在大肠杆菌DH5α中的表达及其多克隆抗体的制备被引量：5
- 2007年
- 目的制备人rBPI23蛋白并免疫家兔获得特异性多克隆抗体。方法将本室制备的pBV220-synBPI600表达载体转化感受态E.coliDH5α,温控诱导后,获得以包涵体形式表达的目的重组蛋白;用SDS-PAGE鉴定分子质量,West-ernblot鉴定抗原性;免疫家兔获得抗rBPI23抗血清,经饱和硫酸铵沉淀获得多克隆抗体,间接法ELISA检测抗体效价,Westernblot分析抗体的特异性。结果重组蛋白主要以包涵体形式表达,SDS-PAGE显示其分子质量约23ku,与预期结果相符;重组蛋白能与市售兔抗人BPI抗体特异性结合;免疫家兔获得高效价(1∶320000)抗血清,上述抗体能与rBPI23及人BPI标准品特异性结合。结论成功制备了人rBPI23,免疫家兔获得高效价抗人rBPI23多克隆抗体,为制备单克隆抗体及后期建立BPI免疫学检测方法奠定基础。
- 龙军李蕴陈艳秋李丽吕喆安云庆
- 关键词：原核表达多克隆抗体制备
- 小鼠BPI N端功能基因片段的克隆及其表达产物的胞内杀菌作用被引量：2
- 2008年
- 目的:克隆小鼠BPI36-259基因片段,转染细胞获得具有杀菌作用的目的抗菌蛋白。方法:采用生物信息学方法,构建PUC57-muBPI1-281质粒;PCR扩增获得muBPI36-259基因片段,制备pcDNA3.1(+)-muBPI36-259重组质粒;采用电穿孔法将上述重组质粒转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白在胞内的表达;建立胞内杀菌实验模型,检测muBPI36-259目的蛋白对胞内寄生菌(伤寒杆菌)的杀伤作用。结果:muBPI36-259目的蛋白在RAW264.7细胞内成功表达,对胞内寄生菌-G-伤寒杆菌具有杀伤作用。结论:成功克隆了小鼠BPI36-259基因片段,转染RAW264.7细胞获得具有生物学活性目的抗菌蛋白。
- 李丽冯颖吕喆庆利刘振龙赵冬高燕王炜安云庆
- 关键词：RAW264.7细胞伤寒杆菌
- 小鼠BPI_(36-259)抗菌蛋白在原核细胞中的表达及其抗血清的制备被引量：8
- 2008年
- 目的采用原核表达系统获得小鼠BPI36-259目的抗菌蛋白,免疫家兔制备目的蛋白特异性抗血清。方法利用生物信息学方法预测小鼠BPI功能片段,构建pUC57-muBPI1-281质粒;PCR扩增获得mu BPI36-259基因片段,构建pET28a-mu BPI36-259重组质粒;用IPTG诱导重组质粒转化的E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得以包涵体形式表达为主的mu BPI36-259目的蛋白;用变性目的蛋白免疫家兔获得兔抗鼠BPI36-259蛋白特异性抗血清;用间接ELISA法检测血清抗体特异性及其效价。结果成功构建了pET28a-mu BPI36-259重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)获得以包涵体表达形式为主的目的蛋白;用变性目的蛋白免疫家兔获得小鼠BPI36-259蛋白特异性抗血清(效价1∶10000)。结论在原核细胞中成功获得了以包涵体表达形式为主的抗菌蛋白,免疫家兔获得的特异性抗血清可用于小鼠BPI36-259目的抗菌蛋白的检测。
- 冯颖李丽龙军范宜强刘振龙孔庆利吕喆王炜安云庆
- 关键词：E.COLIBL21(DE3)
