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α-2b干扰素重组质粒的建立及在毕赤酵母中的表达被引量：1: 2007年; 目的:采用基因工程手段构建基因工程菌表达α-2b干扰素。方法:根据毕赤酵母密码子嗜好性原理设计并合成α-2b干扰素基因序列,将其插入到毕赤酵母Pichia pastoris的分泌型表达质粒pPIC9K中,得到重组分泌表达质粒pPIC9K-IFNα-2b,并用电转化法转化P.pastoris GS115。筛选出整合型His+Muts菌株,进一步用G418筛选获得高拷贝转化子,经5d诱导表达后SDS-PAGE检测。结果:菌落PCR和序列测定结果显示重组表达质粒已成功构建,SDS-PAGE结果显示目的蛋白已成功表达。结论:在毕赤酵母中成功表达α-2b干扰素。; 丁鹏方斌梁布锋何光源; 关键词：Α-2B干扰素毕赤酵母 PPIC9K SDS-PAGE

烟草黄酮醇合成酶基因的克隆及其序列分析被引量：8: 2006年; 根据已知的黄酮醇合成酶cDNA保守序列设计引物,用RT-PCR技术从烟草叶片中扩增获得黄酮醇合成酶cDNA片段,再用RACE方法得到其两端序列。根据获得的序列,设计引物分离得到完整的1188bp的黄酮醇合成酶基因,其开放阅读框编码346个氨基酸。序列分析显示,烟草黄酮醇合成酶与高杯花、矮牵牛和马铃薯的同源性分别为87%、86%和84%,与其它物种中的同源性也在80%左右,表明不同物种中黄酮醇合成酶基因具有高度同源性。此外,在氨基酸水平上,该酶与其它依赖于2-酮戊二酸的双加氧酶及其相关酶也具有同源性。; 黄伟伟杨曦张常娥方斌马靓常俊丽杨广笑何光源; 关键词：烟草 RACE

应用密码偏好性合成的α2b-干扰素在毕赤酵母中的超表达: 干扰素是于1957年发现的一组天然抗病毒药物,后来的研究中又发现了许多不同亚型的干扰素。特别是α2b-人干扰素,它是干扰素家庭中应用最为广泛的成员。α2b-人干扰素具有广谱抗病毒作用,抑制肿瘤细胞增殖,增强免疫功能等功能...; 方斌; 关键词：合成基因毕赤酵母; 文献传递

粗山羊草高分子量谷蛋白亚基组成分析被引量：5: 2007年; 为了发现能够用于小麦品质改良的优异高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS),应用SDS-PAGE技术分析了47份粗山羊草Glu-Dt1位点的HMW-GS组成,分别检测到5种x-型亚基(1.1t、1t、1.5t、2t、3t)和4种y-型亚基(10.1t、11t、12t、12.4t)。其中,1Dx1.1t是1种新的x-型亚基,它的迁移率比普通小麦的1Ax1亚基稍慢,这是目前在粗山羊草中发现的分子量最大的HMW-GS。供试粗山羊草中有8种HMW-GS组合类型:1.1t+11t、1t+11t、1.5t+12t、2t+10.1t、2t+11t、2t+12t、2t+12.4t和3t+11t。其中,1.1t+11t和2t+12.4t未见报道。; 张常娥刘勇方斌罗杰何光源; 关键词：粗山羊草高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE

高大山羊草Aegilops longissima puroindoline b基因的克隆与表达分析: 2005年; 籽粒硬度是小麦加工品质的重要影响因素。puroindoline a(Pina)和puroindoline b(Pinb)是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报导的小麦Pinb基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对高大山羊草Aegilops longissima(SS)的基因组DNA和胚乳RNA进行Pinb基因扩增、克隆、序列测定和表达分析,发现了一个新型Pinb等位基因。基因长360bp,编码119个氨基酸残基,对应于麦类作物Puroindoline B(PinB)成熟蛋白的结构区域,具有麦类作物Pinb基因特有的WPTKWWK的色氨酸结构域基因序列和10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构。与软粒小麦cv.Capitole的Pinb-D1a相比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别为93.3%和92.4%。RT-PCR证实了Pinb基因在籽粒胚乳中的表达。研究结果表明,高大山羊草中包含着与小麦差异较大的籽粒硬度控制基因,为栽培小麦品质改良提供了丰富的遗传资源。; 陈明洁方倜李克秀张常娥方斌唐涛何光源; 关键词：PUROINDOLINE 籽粒硬度克隆

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方斌