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三氧化二砷对HL-60细胞端粒酶hTERT启动子活性的影响: 2013年; 目的:探讨三氧化二砷(As2O3)抑制HL-60细胞端粒酶hTERT表达的分子机制。方法:构建含有hTERT启动子不同片段的荧光素酶基因表达载体,转染HL-60细胞,分别在有无As2O3作用下检测各组荧光素酶活性变化,间接反映As2O3对hTERT启动子不同片段活性的影响。结果:在As2O3作用下,含有hTERT启动子不同片段的荧光素酶基因表达载体的荧光素酶活性均下降(P<0.05～P<0.01)。结论:As2O3对HL-60细胞端粒酶hTERT启动子活性具有抑制作用。; 孙淼章尧陈昌杰杨清玲黄丽珠李友建房兵丁淑琴; 关键词：三氧化二砷人端粒酶反转录酶启动子活性 HL-60细胞

三氧化二砷对人乳腺癌SKBR-3细胞增殖及Notch1表达的影响被引量：4: 2012年; 目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人乳腺癌SKBR-3细胞增殖和迁移力及Notch1表达的影响。方法以SKBR-3细胞为研究对象,以不同浓度As2O3培养24h和终浓度8μmol/L培养24、48、72h后,MTT比色法检测As2O3对SKBR-3细胞增殖的影响;Transwell检测As2O3对SKBR-3细胞迁移力的影响;RT-PCR检测Notch1mRNA表达;Western blot检测Notch1蛋白表达。结果 As2O3能显著抑制人乳腺癌SKBR-3细胞增殖,且呈现浓度、时间依赖关系(P<0.05);并能抑制SKBR-3细胞的迁移力(P<0.05);RT-PCR及Western blot结果显示As2O3作用SKBR-3细胞后,可使Notch1mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。结论 As2O3能够抑制SKBR-3细胞Notch1的表达及抑制细胞增殖和迁移力,初步揭示As2O3可能是通过Notch1信号通路影响人乳腺癌细胞生物学行为,从而为临床砷剂治疗乳腺癌提供理论和实验依据。; 李友建夏俊赵锐孙淼房兵王惠; 关键词：三氧化二砷 SKBR-3细胞 NOTCH1 细胞增殖

融合蛋白d-EGF的结构预测及其意义: 2012年; 目的对融合蛋白d-EGF二级、三级结构进行预测，为构建相应结构重组分子的可能性提供理论指导。方法以融合蛋白基因序列为基础。用DNAStat软件预测其蛋白质的二级结构；用InsightII软件对其三级结构进行建模预测。结果DNAStar软件的GamierRobson方法预测融合蛋白d-EGF含较多争折叠结构；ChargeDensity-Charge显示其3～22，31～48区段含丰富的正电荷。Insight II软件对其三级结构进行建模显示融合蛋白d-EGF存在一个由六个链内二硫键组成曲结构域，同时存在3个反向平行的β-折叠结构，这些结构是融合前β-defensin-3，EGF两分子生物学活性所必需的部分。结论融合蛋白d-EGF的二、三级结构预测结果显示该组合分子可能具有β-defensin-3，EGF两种分子的功能，该方法可以为构建具有相应结构重组蛋白的可能性提供理论基础。; 房兵孙淼李友建李娜耿家珍邵先安; 关键词：融合蛋白

人β-防御素-3与人表皮生长因子融合蛋白的克隆及原核表达: 2012年; 目的:克隆融合蛋白d-EGF成熟链基因,构建原核表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)表达体系中进行有效表达、分离纯化并鉴定其特异性。方法:以蛋白基因序列为基础,RT-PCR扩增人防御素-β和表皮生长因子基因,分别构建β-防御素-3(β-defensin-3)、EGF重组质粒,应用重组PCR方法,将EGF的DNA序列拼接到β-defensin-3 DNA序列的3'端,将基因克隆入原核表达载体pET-SUMO,构建重组质粒pET-SUMO-d-EGF。采用PCR、测序等方法鉴定后转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,Ni-trap柱纯化,SDS-PAGE检测表达及纯化结果,最后以Western blot对其进行特异性鉴定。结果:成功构建β-defensin-3、EGF重组质粒,经重组PCR成功扩增出294 bp的目的片段,重组体PCR结果与预期结果一致,测序正确。转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导经SDS-PAGE分析得到28 kDa左右的目的蛋白条带。Western blot鉴定出融合蛋白含有抗EGF、β-防御素-3两种抗原特异性的蛋白。结论:成功构建原核表达载体pET-SUMO-d-EGF,并获得纯化的融合蛋白,为进一步的活性分析奠定了实验基础。; 房兵孙淼李友建武晓茜耿家珍邵先安; 关键词：基因表达 Β-防御素

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房兵