张程
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：河北大学化学与环境科学学院药物化学与分子诊断省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 支化滚环扩增均相光散射检测单核苷酸多态性
- 2011年
- 结合简便、高效的支化滚环扩增反应与光散射技术,建立了一种均相、无标记检测单核苷酸多态性的方法。通过设计与突变型DNA完全匹配的锁式探针,突变型DNA可作为模板,使锁式探针在连接酶作用下于45℃连接成环,由Phi29 DNA聚合酶在33℃引发支化滚环扩增反应,生成大量的长链DNA产物。反应产物在0.2 mol/L HClO4介质中变性、聚集,产生强烈的光散射信号。野生型DNA与锁式探针的3%末端有一个碱基错配,不能使锁式探针连接成环和引发支化滚环扩增,仅产生很弱的光散射信号。依据二者产生的光散射信号差异,可特异性区分单碱基差别。方法灵敏度高、成本低,可准确测定1 pmol/L突变型DNA和定量检测基因突变频率。所有的成环反应、支化滚环扩增反应及光散射测定可逐步完成,无需分离、洗涤步骤,操作方便、减小了污染的风险。
- 张程焦肖霞成永强李正平
- 关键词：单核苷酸多态性光散射
