张毅 作品数:26 被引量:41 H指数:3 供职机构: 军事科学院 更多>> 发文基金: 天津市自然科学基金 北京市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 哲学宗教 更多>>
STAT1-CXCL9-10信号通路调控间充质干细胞免疫抑制作用的实验研究 被引量:1 2019年 目的探究间充质干细胞(MSC)在炎症微环境下,通过STAT1-CXCL9-10信号通路发挥免疫抑制作用的机制。方法分离并培养小鼠骨实质来源MSC,采用流式细胞术结合诱导分化等方法检测MSC自身生物学特性;炎症因子TNF-α、IFN-γ刺激MSC,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测趋化因子CXCL9、CXCL10表达;Western印迹检测STAT1及p-STAT1表达;进一步,RT-PCR检测转染STAT1-siRNA后MSC在炎症因子TNF-α、IFN-γ刺激下STAT1、CXCL9及CXCL10的mRNA表达量;Western印迹检测STAT1及p-STAT1蛋白表达量。结果分离培养的MSC呈成纤维样,涡旋状贴壁生长,高表达CD29、Sca-1和CD90,不表达或低表达CD11b、CD31、CD34、CD45和MHCⅡ;诱导分化结果显示,细胞出现大量脂滴,碱性磷酸酶活性显著增加;成脂关键转录因子CEBPα和PPARγ、成骨关键转录因子骨钙素和Runx2表达显著增加(P<0.001);炎症因子TNF-α、IFN-γ刺激后MSC中CXCL9、CXCL10、STAT1及p-STAT1表达量均显著增加(P<0.001)。采用siRNA敲低MSC中STAT1表达后,在同样的炎症因子刺激下CXCL9、CXCL10、STAT1及p-STAT1表达量均显著降低(P<0.001)。结论MSC在炎症微环境(TNF-α、IFN-γ)中,通过高表达STAT1促使趋化因子CXCL9及CXCL10高表达,进而影响MSC的免疫抑制作用。 周斌 刘伟江 查兰兰 李培 刘元林 樊月 于丰实 李雪 王洋 郑荣秀 郑荣秀关键词:间充质干细胞 炎症因子 STAT1 CD200调控人脐带来源间充质干细胞增殖的实验研究 被引量:1 2023年 目的探究CD200(OX⁃2)对人脐带来源间充质干细胞(hUC⁃MSC)增殖的影响。方法体外培养hUC⁃MSC,采用吉姆萨染色观察细胞形态、流式细胞术分析细胞表型、碱性磷酸酶(ALP)染色和油红O染色分别检测细胞的体外成骨和成脂分化能力,实时荧光定量PCR(qPCR)检测成骨和成脂关键转录因子的表达差异。采用流式细胞分选仪分选CD200+hUC⁃MSC和CD200-hUC⁃MSC,CCK⁃8法检测两群细胞的增殖能力,流式细胞术检测两群细胞的细胞周期是否发生改变,同时利用qPCR和Western印迹技术检测相关细胞周期蛋白P53、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1/CDC2)与细胞周期蛋白B1(CyclinB1)的表达。结果体外培养的hUC⁃MSC在形态、细胞表型和诱导分化能力上均符合国际认证的MSC判定标准。流式细胞仪检测发现,CD200+hUC⁃MSC中CD200的表达明显高于hUC⁃MSC与CD200-hUC⁃MSC,且CD200+hUC⁃MSC细胞增殖能力提高,G2/M期细胞所占比例降低,CDC2与CyclinB1表达升高(P<0.01)。结论CD200可促进hUC⁃MSC的增殖。 疏梦 张夏茹 刘元林 李雪 王洋 张毅关键词:CD200 细胞增殖 细胞周期 基于模式生物斑马鱼的高通量筛选在药物毒性测试中的应用 模式生物斑马鱼是毒理学研究中公认的模型。斑马鱼模型填补了体外模型和哺乳动物生物医学模型之间的缝隙。斑马鱼与人类基因组相似度高达87%,与人类有着相似的毒性特征和信号传导通路,同时斑马鱼各器官和组织在解剖学、生理学和分子水... 张瑞华 张毅 刘东鑫 徐建富 李丽琴关键词:斑马鱼 高通量 毒性测试 尾静脉注射链脲佐菌素构建幼龄小鼠1型糖尿病模型的实验研究 被引量:2 2018年 目的探讨利用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)快速高效建立幼龄C57BL/6小鼠1型糖尿病(T1DM)模型的方法。方法选择3周龄雄性C57BL/6小鼠为受试鼠,尾静脉注射不同剂量STZ,分别为30(V30)、50 mg/kg(V50),连续给药4 d;以腹腔注射70 mg/kg STZ(P70)连续给药5 d为阳性对照,观察各组小鼠体质量与血糖的变化,采用组织病理学法检测小鼠胰岛、肾及肺的改变,实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附实验检测小鼠体内炎症因子INF-γ和TNF-α的表达。结果尾静脉注射组V30、V50和腹腔注射组P70均出现体质量增加缓慢和血糖升高,其中以V50组和P70组表现显著,符合T1DM标准,成模率分别为87. 5%和75. 0%。组织病理学检测结果表明,V50组和P70组胰岛组织减少,形态不规则,胰岛素分泌量减少,肾纤维化病变明显,肺泡壁塌陷与炎性浸润显著。实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附实验检测小鼠体内炎症因子INF-γ和TNF-α的表达亦上调。结论尾静脉注射STZ可快速高效建立幼龄小鼠T1DM模型,为深入研究儿童T1DM提供了一种简便可行的实验方法。 孟祥宇 周娜 刘伟江 李苹 王洋 王鹏 樊月 刘元林 李雪 郑荣秀 张毅关键词:幼龄小鼠 链脲佐菌素 尾静脉 胰岛素 TGFBI基因调控人脐带间充质干细胞向成骨细胞的分化 被引量:2 2020年 目的探讨转化生长因子β诱导蛋白(TGFBI)基因调控人脐带来源间充质干细胞(huc-MSC)的成骨分化作用。方法培养huc-MSC,流式细胞术检测细胞表面标志物CD14、CD34、CD45、CD73、CD90、CD105,油红O染色和碱性磷酸酶(ALP)染色检测体外成脂肪细胞和成骨细胞的诱导分化能力,实时荧光定量PCR(q-PCR)检测成脂和成骨关键转录因子的表达。采用si-RNA瞬时转染技术敲低huc-MSC的TGFBI基因,并研究其对huc-MSC生物学特性的影响;进一步利用慢病毒载体构建稳定敲低TGFBI基因的huc-MSC(TGFBI-/-huc-MSC),并对TGFBI-/--hucMSC进行成骨细胞诱导分化,ALP染色鉴定细胞ALP活性,q-PCR检测成骨分化关键转录因子ALP及骨桥蛋白(OPN)的表达差异。结果培养的huc-MSC表达MSC表面标志物CD14-CD34-CD45-CD73+CD90+CD105+,TGFBI基因敲低后不影响huc-MSC表面标志物的表达;成脂肪诱导分化后,出现大量红色脂滴,成脂分化关键转录因子Adi和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)表达显著增加(P<0.001);成骨诱导分化后,ALP活性增加,成骨分化关键转录因子OPN和ALP表达亦显著增加(P<0.001),证明敲低TGFBI基因的huc-MSC仍具有向成脂、成骨分化的特性,但其成骨诱导分化能力较未敲除组增强,其中ALP活性、ALP基因(P<0.001)及OPN基因(P<0.001)的表达均显著增高。结论TGFBI基因能抑制huc-MSC的成骨分化。 李培 刘伟江 周斌 查兰兰 刘元林 樊月 于丰实 李雪 王洋 郑荣秀 郑荣秀关键词:间充质干细胞 成骨诱导分化 新兵心理体检的症状自评量表结果分析 被引量:3 2012年 目的了解征兵时增加心理体检对提高新兵整体素质的重要性。方法将2001-2009年某部全体新兵应用症状自评量表(SCL-90)的测试结果,以2005年为界,进行前后比较、分析。结果 2005-2009年新兵组(实验组)各因子测评分明显低于2001-2004年新兵组(对照组),两组总分比较有非常显著性差异(t=-23.03,P<0.001),各因子测评分比较也有非常显著性差异,躯体化(t=-15.56,P<0.001)、强迫(t=-19.35,P<0.001)、人际(t=-16.82,P<0.001)、抑郁(t=-22.65,P<0.001)、焦虑(t=-23.46,P<0.001)、敌对(t=-12.14,P<0.001)、恐怖(t=-14.75,P<0.001)、偏执(t=-18.40,P<0.001)、精神病性(t=-24.23,P<0.001)。结论在征兵中增加心理体检对提高新兵整体素质有重要意义。 艾旭 张丽萱 张毅关键词:心理健康水平 症状自评量表 新兵 1型糖尿病发病及应用间充质干细胞治疗机制的研究进展 2020年 1型糖尿病(T1DM)是在遗传易感性基础上,由外界环境因素作用引起自身免疫功能紊乱,导致胰岛细胞损伤和破坏,最终致胰岛功能衰竭的一种自身免疫性疾病。自身免疫系统的紊乱是其主要发病机制,表现为机体中枢及外周免疫耐受的破坏、免疫细胞的活化、局部和循环炎症因子的分泌,以及氧化应激反应靶向破坏胰岛β细胞。间充质干细胞具有多向分化和低免疫原性等生物学特性,可分泌大量细胞因子,激活免疫调节系统,诱导免疫耐受,从而抑制T1DM的自身免疫反应,因而成为T1DM治疗研究的热点。该文就T1DM发病机制及间充质干细胞治疗T1DM的作用机制研究进展做一综述。 苏菲娅 郑荣秀 张毅关键词:1型糖尿病 间充质干细胞 免疫系统疾病 三种方法建立大鼠种植体周炎模型的比较 2023年 目的:比较传统棉线结扎与种植体周围局部注射牙龈卟啉单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导法,以及两种方法联合建立大鼠种植体周炎模型的效率和效果,以探索大鼠种植体周炎模型建模的最佳方法。方法:纳入39只雄性SD大鼠,拔除上颌左侧第一磨牙,拔牙窝愈合4周后植入钛种植体。种植体植入4周骨结合后,将39只大鼠随机分为4组,分别采取棉线结扎(n=12)、种植体周围局部注射LPS(n=12),以及两种方法联合(n=12)诱导大鼠种植体周炎,同时设无任何处理对照组(n=3)。记录实验组大鼠诱导前及诱导后2周和4周时的探诊深度(probing depth,PD)、探诊出血(bleeding on probing,BOP)和牙龈指数(gingival index,GI)。收集种植体周围牙龈组织,提取RNA,实时荧光定量分析(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)表达。分别于诱导2周和4周时处死实验组动物,收集上颌骨,采用微型CT(micro-CT)观察种植体边缘骨吸收状况。结果:种植4周后,种植体骨结合良好。3个实验组均可见牙龈红肿,质软,种植体边缘骨吸收。诱导2周和4周时,各实验组PD、GI和BOP均较诱导前增加,但仅BOP在3组间差异有统计学意义(P<0.05)。炎症诱导2周时,棉线结扎组和联合组在每个位点均可见边缘骨吸收,且联合组每个位点边缘骨吸收程度均大于棉线结扎组,但差异不具有统计学意义(P>0.05);局部注射组部分种植体的部分位点可见边缘骨吸收。炎症诱导4周时,各实验组各位点均可见边缘骨吸收,其中棉线结扎组和联合组边缘骨吸收大于局部注射组,差异有统计学意义(P<0.05)。诱导2周和4周时,实验组TNF-α和IL-1β均较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:相比于种植体周围局部注射LPS,棉线结扎及两种方法联合可以更好且更快地诱导大鼠种植体周炎� 孟令玮 李雪 高胜寒 李悦 曹瑞涛 张毅 潘韶霞关键词:动物模型 POSTN基因调控人脐带间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究 被引量:3 2022年 目的 探讨骨膜蛋白调控人脐带来源间充质干细胞(hUC-MSC)向成骨细胞分化的作用。方法 培养并鉴定hUC-MSC,利用慢病毒载体构建稳定敲低POSTN基因的hUC-MSC(sh-POSTN-MSC)和对照组hUC-MSC(sh-NC-MSC),流式细胞术检测细胞表面标志物,油红O和碱性磷酸酶(ALP)染色比较两组细胞体外成脂和成骨诱导分化能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测成脂分化关键转录因子和成骨分化标志物表达的差异。结果 培养的sh-NC-MSC和sh-POSTN-MSC表面标志物均为CD73^(+)/CD90^(+)/CD105^(+)/CD14^(-)/CD34^(-)/CD45^(-),POSTN基因敲低后不影响hUC-MSC表面标志物的表达。成脂诱导后,sh-NC-MSC和sh-POSTN-MSC经染色均观察到红色脂滴出现。qRT-PCR结果显示,与自分化组相比,诱导组的脂肪酶(ADI)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达均明显增加(P<0.001)。成骨细胞诱导后,sh-NC-MSC和sh-POSTN-MSC经染色均观察到胞内ALP活性;qRT-PCR结果显示,二者诱导组成骨细胞标志物骨桥蛋白(OPN)表达均显著增加(P<0.001,P<0.01),提示sh-NC-MSC和sh-POSTNMSC具有成脂、成骨分化能力;同时,与sh-NC-MSC成骨诱导组相比,sh-POSTN-MSC成骨诱导组的胞内ALP活性明显降低,OPN和ALP的mRNA相对表达均显著降低(P<0.001)。结论 敲低POSTN基因的hUC-MSC成骨诱导分化能力降低,POSTN参与调控hUC-MSC的体外成骨分化作用。 于丰实 刘伟江 白海涛 袁福临 刘元林 李雪 王洋 张毅关键词:间充质干细胞 成脂分化 成骨分化 SHRNA 幼龄1型糖尿病模型小鼠脂肪来源干细胞的鉴定及其成脂分化能力 被引量:3 2021年 目的比较幼龄1型糖尿病(T1DM)模型小鼠和幼龄正常小鼠脂肪来源干细胞(ADSC)的成脂分化能力,为阐明T1DM发病机制提供理论基础和实验依据。方法3周龄C57BL/6J小鼠,连续5 d ip给予小剂量(50 mg·kg^(-1))链脲佐菌素(STZ)制备幼龄T1DM小鼠模型;正常对照组ip给予等体积柠檬酸缓冲液;7 d后连续3 d小鼠尾静脉采血检测空腹血糖水平,空腹血糖均值≥16.7 mmol·L^(-1)认为幼龄小鼠T1DM建模成功。建模成功14 d后,取皮下脂肪和性腺周围脂肪组织,用组织酶消化法培养小鼠ADSC,倒置显微镜下观察细胞形态;用流式细胞术检测细胞表面标志物Sca-1、CD29、CD90、CD31、CD34、CD45、主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ和CD11b。选取第3代(P3代)ADSC进行成骨和成脂诱导分化,分别用油红O染色和碱性磷酸酶染色检测细胞的成骨和成脂诱导分化能力,实时荧光定量PCR检测ADSC成骨关键转录因子骨钙素(Ost)和Runt相关转录因子2(Runx2)及成脂关键转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPα)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA表达。结果成功建立幼龄T1DM小鼠模型,并从T1DM模型小鼠脂肪组织分离获得ADSC,细胞形态呈成纤维样、贴壁生长,高表达CD29,CD90和Sca-1,低表达CD45,CD34,MHCⅡ,CD11b和CD31。幼龄T1DM模型小鼠P3代ADSC成骨诱导分化后,碱性磷酸酶染色阳性,Ost和Runx2 mRNA表达显著增高(P<0.01);成脂诱导分化后,油红O染色可见ADSC脂滴明显增多(P<0.01),PPARγ和CEBPαmRNA表达显著增高(P<0.01)。与正常对照组相比,幼龄T1DM模型小鼠ADSC脂滴数增多(P<0.01)且增大,PPARγ和CEBPαmRNA表达亦显著增高(P<0.01)。结论幼龄T1DM模型小鼠ADSC体外成脂分化能力增强。 张金霞 刘伟江 苏菲娅 张晗 于丰实 白海涛 袁福临 刘元林 李雪 王洋 郑荣秀 郑荣秀关键词:幼龄小鼠 1型糖尿病 成脂分化