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张旻: 作品数：38 被引量：36H指数：3; 供职机构：河南科技大学动物科技学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术发展基金公益性行业(农业)科研专项更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生文化科学更多>>

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牛源肉孢子虫多重PCR检测方法的建立被引量：2: 2022年; 为了准确快速鉴别检测牛源肉孢子虫的种类,本研究根据毛样肉孢子虫、黑氏肉孢子虫、人肉孢子虫、枯氏肉孢子虫和罗氏肉孢子虫5种牛源肉孢子虫的18S rRNA或COX1基因序列设计多重PCR引物,优化并建立了能够同时检测这5种牛源肉孢子虫的多重PCR方法。结果显示,多重PCR对毛样肉孢子虫、黑氏肉孢子虫、人肉孢子虫、枯氏肉孢子虫和罗氏肉孢子虫扩增产物的大小依次为1007 bp、643 bp、535 bp、400 bp和287 bp。特异性试验结果显示,该方法除了对毛样肉孢子虫、黑氏肉孢子虫、人肉孢子虫、枯氏肉孢子虫和罗氏肉孢子虫可扩增出相应大小的目的条带外,对米氏肉孢子虫、刚地弓形虫、犬新孢子虫的检测结果均为阴性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法对5种牛源肉孢子虫重组质粒标准品的检测下限均为6拷贝/μL,敏感性较高。利用本研究建立的多重PCR方法对34份随机采集的牛肉样品检测,结果显示,多重PCR与肌肉压片镜检法的阳性符合率为100%,阴性符合率为92%,总符合率为94.1%,表明本实验建立的该多重PCR方法可用于临床检测。本研究首次建立了牛源肉孢子虫的多重PCR鉴别检测方法,为牛和人肉孢子虫病诊断和分子流行病学研究提供更有效的技术手段。; 韩利方马超锋钱伟锋张旻位治国闫文朝; 关键词：肉孢子虫多重PCR 特异性敏感性

TLR3参与新孢子虫致怀孕小鼠胎盘的炎性损伤: 2021年; 为探究TLR3是否参与了新孢子虫致小鼠胎盘的炎性损伤,本试验将2×106新孢子虫Nc-1株速殖子通过腹腔注射给怀孕7.5 d的C57BL/6小鼠,利用病理组织切片、免疫组化和荧光定量PCR等方法检测小鼠胎盘组织中TLR3及其相关细胞因子表达水平。结果显示,在小鼠感染新孢子虫后第2、5、8 d小鼠胎盘组织分别出现了不同程度的坏死、炎性细胞浸润和细胞核变形崩解等病理损伤;免疫组化结果显示,新孢子虫感染组的小鼠胎盘内巨细胞层、海绵滋养层和迷路滋养层细胞TLR3的表达量均明显增多;荧光定量PCR结果显示,感染组小鼠胎盘中TLR3 m RNA的表达量显著高于对照组(P<0.05),是对照组的2.5~4倍,与免疫组化检测结果基本一致;感染组小鼠胎盘中TNF-α、IFN-γ和IL-2 m RNA的相对表达水平分别是对照组的1.5~3倍、4~5倍和2~3倍,差异均显著(P<0.05)。结论,新孢子虫感染可显著上调小鼠胎盘内TLR3的表达量,进而使TLR3介导的炎性细胞因子的表达量升高,参与新孢子虫致怀孕小鼠胎盘的炎性损伤,该研究为进一步揭示新孢子虫的致病机理提供了重要数据。; 白荣臻钱伟锋苏钰闫文朝张旻吕超超王天奇; 关键词：新孢子虫小鼠胎盘病理损伤炎性细胞因子

日本血吸虫PHB1的克隆、表达及其免疫保护效果评估: 2022年; 为了探讨日本血吸虫抗增殖蛋白1(SjPHB1)的免疫保护潜力,应用PCR技术扩增SjPHB1基因,克隆至pMD19-T克隆载体,对其进行测序及生物信息学分析;然后构建pET32a(+)-SjPHB1重组表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,对重组菌进行鉴定、诱导表达,并纯化重组蛋白;再利用Western blot检测重组蛋白的反应原性;最后以小鼠为动物模型,评估重组蛋白抗日本血吸虫病的免疫保护效果。结果显示:SjPHB1基因ORF序列为825 bp,编码274个氨基酸,具有2个优势辅助T细胞抗原表位和6个优势B细胞抗原表位;rSjPHB1以包涵体的形式表达,分子量约为47 kDa,能被anti-His的小鼠血清、人工感染日本血吸虫的小鼠阳性血清特异性识别,表明获得正确表达;该重组蛋白能被免疫小鼠血清识别,具有良好的反应原性;rSjPHB1刺激小鼠产生了较高水平的特异性IgG抗体,但未诱导产生显著的减虫率和肝脏减卵率。本研究结果为进一步探讨SjPHB1基因的生物学特性提供了基础。; 张旻杨珊珊张燕周思含黄明月洪炀林矫矫傅志强; 关键词：日本血吸虫克隆免疫保护效果

一种改进型麦克马斯特虫卵计数板的应用效果研究: 改进型麦克马斯特虫卵计数板为河南科技大学动物科技学院寄生虫学实验室的授权专利产品(专利号:ZL201820602559.5),该改进型麦克马斯特虫卵计数板是基于经典麦克马斯特虫卵计数板进行改进设计和研制的升级产品。通过独...; 韩利方李天恩谢月华刘易扬王天奇钱伟锋张旻位治国闫文朝; 关键词：粪样虫卵卵囊包囊

日本血吸虫体被表膜蛋白磷酸二酯酶-5(NPP-5)基因的研究: NPP-5为膜外核苷酸焦磷酸酯酶/磷酸二酯酶家族(NPPs)的一个成员,该家族为具有相同保守结构的外膜蛋白,都具有水解膜外核苷酸、磷脂、胆碱磷酸酯的焦磷酸酯键/磷酸二酯键而释放5’-核苷单磷酸的活性,该活性被称为NPP活...; 张旻韩艳辉朱珠李东洪炀吴秀娟傅志强林矫矫; 文献传递

日本血吸虫重组抗原及其制备方法和应用: 本发明公开了一种日本血吸虫重组抗原，该重组抗原包含：日本血吸虫磷酸甘油酸激酶的SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。本发明还公开了该日本血吸虫重组抗原的制备方法及其在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗或药物中的应用。本发明的日...; 林矫矫黄莉妮洪炀傅志强张旻韩艳辉王馨茁李长健曹晓丹伍妙梨郭小勇韩倩刘艳涛马帅; 文献传递

日本血吸虫钙调神经磷酸酶B基因的克隆表达及表达产物的免疫保护效果的评估被引量：1: 2014年; 为掌握日本血吸虫钙调神经磷酸酶B亚基(CNB)特性并评估其作为候选疫苗分子的潜力,采用PCR方法扩增日本血吸虫CNB基因,构建重组质粒pET-28a(+)-CNB,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用His-Bind亲和层析纯化获得重组蛋白rCNB。Western-blot结果显示,rCNB能被该重组蛋白免疫小鼠血清识别,具有较好的免疫原性。免疫组织化学分析表明,CNB主要分布在日本血吸虫虫体的睾丸、卵巢等生殖器官中,在表膜中也有少量分布。用重组蛋白rCNB结合ISA206佐剂免疫BALB/c小鼠,结果 rCNB诱导小鼠产生了27.93%(P<0.05)的减虫率和42.93%(P<0.01)的肝减卵率。结果表明,日本血吸虫CNB具有一定的免疫保护效果,为深入研究日本血吸虫钙调神经磷酸酶的生物学功能奠定了基础。; 伍妙梨韩艳辉曹晓丹张旻马帅郭小勇李长健王馨茁洪炀陆珂林矫矫傅志强; 关键词：日本血吸虫免疫保护

雨课堂在兽医寄生虫学混合式教学中的应用与教学效果分析被引量：6: 2021年; 用信息化教学工具和慕课资源实施混合式教学是高校提高人才培养质量的重要举措。笔者利用雨课堂工具及其内置学堂在线慕课资源设计和实施兽医寄生虫学混合式教学,结果学生课堂教学参与度高,师生互动和教学效果等显著提高。文章总结和分析了教学设计方案和实施效果,以期为高校教师提高课程教学效果提供参考。; 闫文朝杨文丰韩利方钱伟锋张旻王天奇; 关键词：兽医寄生虫学混合式教学教学设计教学效果

新孢子虫硫氧还蛋白的生物信息学分析及其原核表达的鉴定: 2024年; 为研究新孢子虫硫氧还蛋白(Trx)的生物学特性,本研究利用PCR扩增犬新孢子虫Trx(NcTrx)基因的编码区序列,构建pET-32a(+)-NcTrx原核表达载体,经双酶切与测序鉴定正确后,利用系列生物信息学软件分析NcTrx基因及其编码氨基酸序列的生物信息学特征,并对其蛋白互作网络中排名前100的蛋白进行GO功能和KEGG信号通路的富集分析。重组质粒中NcTrx基因的测序结果显示,NcTrx基因片段为1 287 bp,编码428个氨基酸;该蛋白含1个信号肽,1个跨膜区,主要位于内质网上;NcTrx蛋白的二、三级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲组成,有12个B细胞抗原表位;该蛋白属于硫氧还蛋白家族,存在典型的氧化还原基序“-CXXC-”,有38个磷酸化位点、10个O-糖基化位点;与NcTrx蛋白互作最强的为酪氨酸激酶样蛋白,二者通过氢键和静电作用实现相互对接;GO功能及KEGG信号通路的显著性富集分析结果显示,NcTrx与其互作的蛋白主要参与蛋白质转运、蛋白质二硫键异构酶活性等生物学过程,与内质网蛋白质加工、硫代谢等信号通路密切相关。将pET-32a(+)-NcTrx转化BL21(DE3)感受态细胞,并经IPTG诱导表达后采用镍亲和层析法纯化重组NcTrx蛋白(rNcTrx),经SDS-PAGE检测该蛋白的表达及纯化效果,采用Bradford法测定纯化蛋白的浓度。采用western blot鉴定rNcTrx的反应原性。SDS-PAGE结果显示,rNcTrx分子量约66 ku,主要以包涵体的形式表达,且纯化效果较好,浓度为0.8 mg/mL。Western blot检测结果显示,纯化的rNcTrx能够与鼠His MAb、新孢子虫感染的小鼠血清发生特异性反应,在66 ku处出现特异性条带。本研究首次经PCR扩增NcTrx基因,对NcTrx基因及其蛋白进行了生物信息学分析,并经原核系统表达及鉴定了NcTrx蛋白,为后续深入探究该蛋白的生物学功能提供参考依据。; 齐闻新张旻李晨周思含徐啊慧钱伟锋胡苏辉王天奇位治国洪炀闫文朝; 关键词：新孢子虫硫氧还蛋白生物信息学原核表达

日本血吸虫SjIrV1的基因特性及免疫保护效果: 2013年; 钙结合蛋白是日本血吸虫生长发育不可缺少的蛋白,具有非常广泛而重要的功能。在课题组日本血吸虫体被表膜蛋白研究基础上,利用PCR技术克隆了中国大陆株日本血吸虫66 kDa钙结合蛋白(SjIrV1)编码基因的cDNA序列,BLAST分析与菲律宾株日本血吸虫SjIrV1 cDNA编码序列一致,荧光定量PCR分析表明该基因在童虫和成虫期不同发育阶段均有表达,其中在35 d和42 d成虫中表达量较高,在42 d雌虫中该基因表达水平远高于42 d雄虫。构建重组表达质粒pET28a(+)-SjIrV1,在大肠杆菌中成功诱导表达,重组蛋白主要以可溶性形式存在,通过高效液相色谱法(RP-HPLC)以及串联质谱法(MS/MS)鉴定所获蛋白为目的蛋白SjIrV1。蛋白质印迹(Western blotting)分析结果显示重组蛋白能被感染日本血吸虫鼠血清和免疫鼠血清所识别,SjIrV1蛋白在虫体各发育阶段中均表达。免疫荧光染色实验观察表明SjIrV1主要分布在日本血吸虫成虫的表膜。应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫鼠血清中检测到较高水平的特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体。结果表明SjIrV1可能在日本血吸虫的生长发育过程中起着重要作用。; 魏梅梅熊雅念洪炀黄莉妮孟培培艾德宙张旻傅志强刘升发林矫矫; 关键词：日本血吸虫钙结合蛋白免疫原性免疫保护

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