张惊宇
- 作品数：53 被引量：153H指数：8
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第四医院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金黑龙江省青年科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体的构建及体外表达检测
- 2009年
- 目的构建携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体,并检测其体外表达目的基因的能力。方法应用基因克隆技术将大鼠BDNF基因克隆入慢病毒载体pFUW中,经过PCR、酶切和测序鉴定后,与包装质粒共转染293T细胞,制备并收集携带BDNF基因的慢病毒,重组病毒感染体外培养Hela细胞,利用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法检测BDNF的表达情况,观察病毒转染效果。结果PCR、酶切和测序鉴定,成功克隆了pFUW-BDNF重组子。所包装的重组慢病毒对Hela细胞的感染效率>90%,实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法可以检测到重组慢病毒感染Hela细胞后能高水平表达BDNF。结论成功构建了携带BDNF基因慢重组病毒载体,并可在体外高水平表达其所携带的目的基因,为将其进一步应用于神经系统损伤性疾病的治疗研究奠定了方法学基础。
- 张惊宇杨安萍李金星刘路然赵虹杨子超
- 关键词：BDNF慢病毒载体基因治疗
- 辛伐他汀对IFN-γ诱导的人外周血单个核细胞OX40L表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨经IFN-γ刺激后,人外周血单个核细胞OX40L表达的变化,以及辛伐他汀对单个核细胞OX40L表达的影响。方法:将实验标本随机分为2组,分别干扰素-γ(IFN-γ)刺激组、辛伐他汀干预组。应用RT-PCR及Western blotting技术,观察IFN-γ诱导的人外周血单个核细胞OX40L表达情况及辛伐他汀对人单个核细胞OX40L表达的影响。结果:1.1000 U/ml IFN-与人单个核细胞共同培养24h后,OX40L mRNA和蛋白水平的表达明显增加。2.预先给予10 mol/L的辛伐他汀干预1h可以明显降低IFN-诱导的OX40L表达。结论:IFN-可诱导人单个核细胞OX40L表达。辛伐他汀可以抑制IFN-诱导人单个核细胞OX40L表达的增强,从而可能抑制了OX40L信号通路介导的与炎症有关的血管损伤,延缓动脉粥样硬化的进程。
- 刘彬王凤军苏丹颖张惊宇陈修芬于美婷初婷婷刘欧侯丹慧张双彦
- 关键词：辛伐他汀OX40配体动脉粥样硬化
- 成体干细胞治疗缺血性脑血管病的研究进展被引量：1
- 2009年
- 缺血性脑血管病的致残率高,治疗效果多不理想,成体干细胞由于其独特的性质,对缺血性疾病的治疗有特殊的优势。随着干细胞的发现和对其研究的日益深入,应用成体干细胞治疗卒中前景广阔。该文查阅了近年来的国内外文献,主要综述成体干细胞移植治疗缺血性脑血管病的研究进展。
- 李金星杨子超张惊宇
- 关键词：成体干细胞神经干细胞干细胞移植缺血性脑血管病
- β-连锁蛋白在脑胶质瘤中的表达及其与病理分级的关系研究被引量：1
- 2016年
- 目的分析β-连锁蛋白在脑胶质瘤中的表达,探讨其与病理分级的关系。方法 82份脑胶质瘤标本（脑胶质瘤组）及40份对照标本（对照组）均购自上海锐赛生物技术有限公司,采用免疫组化SP法检测脑胶质瘤组和对照组β-连锁蛋白表达情况。比较脑胶质瘤组与对照组β-连锁蛋白表达阳性率,不同病理分级脑胶质瘤标本β-连锁蛋白表达阳性率,并分析β-连锁蛋白对高级别脑胶质瘤的预测价值。结果β-连锁蛋白主要表达于细胞膜,极少数表达于细胞质。脑胶质瘤组β-连锁蛋白表达阳性率高于对照组（χ-2=11.858,P=0.000）。Ⅰ级与Ⅱ级脑胶质瘤标本β-连锁蛋白表达阳性率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;Ⅲ级及Ⅳ级脑胶质瘤标本β-连锁蛋白表达阳性率高于Ⅰ级、Ⅱ级脑胶质瘤标本,Ⅳ级脑胶质瘤标本β-连锁蛋白表达阳性率高于Ⅲ级脑胶质瘤标本（P〈0.05）。ROC曲线显示,β-连锁蛋白预测高级别脑胶质瘤的AUC为0.742,当β-连锁蛋白阳性细胞百分比≥5%时,其灵敏度为95.7%、特异度为52.8%、阳性预测值为72.1%、阴性预测值为52.8%、准确率为76.8%。结论β-连锁蛋白在脑胶质瘤中呈高表达,其表达水平与脑胶质瘤病理分级有关,可能参与脑胶质瘤的发生和进展,因此下调β-连锁蛋白的表达可能成为治疗脑胶质瘤的新途径。
- 张惊宇张力娜郑永慧孙永奇刘路然赵虹杨子超
- 关键词：神经胶质瘤病理分级
- NMNAT1基因对体外原代培养神经元树突发育的影响
- 2013年
- 目的评价NMNAT1基因对原代培养小鼠神经元树突发育的影响。方法我们在体外建立了原代培养小鼠神经元模型,并通过RNA干扰和基因过表达的方法控制NMNAT1基因的表达水平。应用电穿孔转染,我们上调或下调NMNAT1基因的表达水平,应用免疫细胞化学方法研究神经元树突的形态。在所有的功能试验中,把FK-866(CAS658084-64-1)一种高效的特定的非竞争性NMNAT1抑制剂用作药物学对照。结果在体外原代培养的皮层神经元中下调NMNAT1基因能减缓树突生长和减少树突的数目。结论 NMNAT1基因在原代培养的皮层神经元形态发生中起显著作用,表明NMNAT1基因的丢失可能会引起中枢神经系统神经元变性。
- 赵虹张惊宇车守梅赫丹丹郭朝晖
- 关键词：树突神经系统退行性疾病
- 腺相关病毒介导的脑源性神经营养因子基因对大鼠海马神经元树突生长的影响被引量：3
- 2009年
- 目的研究重组腺相关病毒介导的脑源性神经营养因子基因（rAAV-BDNF）的表达对体外培养的大鼠海马神经元树突生长的影响。方法取孕18d大鼠建立体外培养的海马神经元模型,感染rAAV-BDNF病毒。在检测了BDNF稳定的表达水平后,用MAP2染色法来标示神经元树突形态。用荧光显微镜采样,统计胞体约15～20μm的MAP2阳性细胞初级树突的数目和长度。对照组神经元为感染表达绿色荧光蛋白的腺相关病毒。结果感染rAAV-BDNF的海马神经元初级树突数目为（14±3）个,对照组的初级树突数目为（6±1）个。rAAV-BDNF感染的海马神经元树突总长度为（1500±150）μm,对照组的树突总长度为（700±50）μm,两组无论是树突数目还是长度,差异均有统计学意义（t=3.088和6.238,均P〈0.05）。结论rAAV-BDNF转染大鼠体外培养的海马神经元后,能起到促进树突生长的作用。
- 张惊宇赵节绪
- 关键词：脑源性神经生长因子海马神经元树突
- STUB1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的:构建人STUB1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定。方法:针对筛选确定的人STUB1基因RNAi有效靶点序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeI和EcoRI酶切后的pMagic 4.0载体连接,产生短发卡RNA慢病毒载体。PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,并包装成慢病毒颗粒。结果:PCR鉴定与DNA测序证实,合成的含STUB1 shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。STUB1 shRNA慢病毒载体在293T细胞中成功包装成慢病毒颗粒。结论:成功构建人STUB1基因RNAi慢病毒载体以及包装成功慢病毒颗粒,为研究STUB1在胶质瘤发生发展过程中相关信号通路的作用,提供了稳定感染细胞的载体。
- 赵虹赵虹张惊宇徐万海杨子超
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体LENTIVIRAL慢病毒表达载体胶质瘤发生阳性克隆
- YAP蛋白在神经肌肉接头中作用机制的研究
- 2023年
- 目的探讨YAP蛋白对神经肌肉接头的影响及其机制。方法以质粒为模板构建YAP敲低的shRNA,用Western Blot方法检测shYAP的敲低效率,并在此基础上将shYAP包进AAV8并感染C2C12肌管,通过免疫荧光染色检测乙酰胆碱受体的长度和荧光强度。将agrin加入至分化成熟的C2C12肌管中,通过免疫荧光染色检测加入agrin后细胞核中YAP的表达情况和乙酰胆碱受体聚集情况。采用Western Blot方法检验样本在agrin处理后YAP磷酸化的合成水平和YAP结合β-环联蛋白的生成体量。结果YAP shRNA构建成功;肌管形成后敲低YAP能抑制乙酰胆碱受体聚集;agrin能促进C2C12肌管中的YAP进入细胞核;agrin能减弱YAP蛋白S127位的磷酸化。结论YAP作为agrin下游信号分子调节神经肌肉接头形成。
- 杨滨瑞赵琳琳汪煜楠初婷婷郑永慧张惊宇
- 关键词：神经肌肉接头
- 三叉神经痛的分类及临床诊疗被引量：2
- 2023年
- 三叉神经痛是一种发生于头面部三叉神经分布区域内,症状表现为骤发、骤停、闪电样、刀割样、烧灼样、顽固性、难以忍受的剧烈疼痛的疾病。其发病机制尚不明确,可能与神经病变、免疫炎症机制及离子通道相关。目前,治疗三叉神经痛仍以药物治疗为主,药物治疗无效时可考虑电生理治疗或手术治疗,包括射频热凝术、微血管减压术以及球囊压迫术等。文章综述了三叉神经痛的分类及临床诊疗的研究进展,以期为其临床尽早确诊及治疗提供新的理论基础。
- 赵琳琳汪煜楠张惊宇
- 关键词：三叉神经痛临床诊疗
- 大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测被引量：2
- 2009年
- 目的:建立成年大鼠海马脑区注射脑源性神经营养因子(BDNF)慢病毒表达载体的方法,并检测BDNF慢病毒载体体内表达目的基因的能力。方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH)、生理盐水组(NS)、GFP慢病毒注射组(GFP)和BDNF慢病毒注射组(BDNF),每组15只。所有实验大鼠在脑立体定位仪下定位海马组织。NS、GFP和BDNF组分别给予盐水(2μL)、GFP慢病毒(2μL)和BDNF慢病毒(2μL),SH组只实行手术操作。注射手术7d、14d和30d后,分别处死大鼠并进行在冰上取各组大鼠海马组织,分别提取海马总RNA和总蛋白质通过RT-PCR和Western blot检测各组大鼠海马组织BDNF mRNA和蛋白表达水平的变化。同时通过原位杂交方法检测BDNF的表达水平和脑区分布。结果:BDNF慢病毒注射成年大鼠7d、14d和30d后,均可以成功检测到BDNF在mRNA和蛋白水平在海马脑区都有明显的表达,同假手术组相比具有显著性差异;原位杂交检测显示BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区7d、14d和30d的BDNF表达水平和脑区分布均保持稳定。结论:成功地建立了BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区的方法,并可在注射后不同时间段检测到BDNF高水平的表达和均匀的海马脑区分布,为进一步将其应用于神经系统损伤性疾病的治疗奠定了基础。
- 张惊宇李金星孙永奇赵虹杨子超
- 关键词：BDNF慢病毒海马注射
