张康
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院毒物药物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- cAMP反应元件萤光素酶报告基因载体的构建被引量：1
- 2014年
- 目的:构建含有cAMP反应元件(CRE)的萤光素酶报告基因载体。方法:以含有gal4位点的萤光素酶报告基因质粒为模板,利用PCR方法,在去除gal4位点的同时,连入4个CRE元件得到pCRE-luc;将该载体与G蛋白偶联受体(GPCR)共转染人胚肾细胞HEK293,测定萤光素酶活性;应用蛋白激酶A(PKA)抑制剂确认CRE的活性是否与Gs通路相关。结果:pCRE-luc的活性直接相关于GPCR的激活程度,并依赖Gs信号通路。结论:CRE萤光素酶报告基因载体构建成功,可用于检测Gs偶联GPCR的活性,为基于GPCR的高通量药物筛选奠定了基础。
- 马晓芸于金梅卓仁恭张康郑建全
- 关键词：报告基因萤光素酶G蛋白偶联受体
- 真核表达载体pEGFP-N1-ASIC2a的构建及功能验证
- 2017年
- 目的构建含大鼠ASIC2a全长互补脱氧核糖核酸(cDNA)的绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFPN1-ASIC2a并转染至HEK293细胞,观察其表达和分布情况。方法设计、合成ASIC2a基因引物,利用聚合酶链反应(PCR)技术,以现有质粒pc DNA3.1-ASIC2a为模板扩增出含有限制性内切酶(XhoⅠ与EcoRⅠ)酶切位点的ASIC2a基因片段与载体pEGFP-N1酶切后连接形成重组质粒pEGFP-N1-ASIC2a,并瞬时转染至HEK293细胞中,利用细胞膜片钳方法观察其表达电流的情况。为进一步明确其亚细胞定位,将质粒EGFPN1-ASIC2a、pDs Red-Monomer-Mem和pDs Red2-ER共同转染至HEK293细胞中。结果 PCR扩增得到正确的ASIC2a基因片段,酶切鉴定和测序证实获得重组质粒pEGFP-N1-ASIC2a,并将其瞬转至HEK293细胞后,成功记录到ASIC2a同聚体电流。然后利用共转染的方法观察到,pEGFP-N1-ASIC2a主要在HEK293细胞内质网表达,细胞膜表达较少。结论重组绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1-ASIC2a构建成功,且在HEK293细胞中主要表达于内质网,为下一步研究ASIC2a的功能,特别是为ASIC2a在缺血性神经元损伤中的作用及其机制的研究奠定基础。
- 李栋张康马晓芸袁维秀刘晓燕
- 关键词：真核表达载体绿色荧光蛋白
- TREK-2双孔钾离子通道的内门调控机制
- 目的 探讨TREK-2通道的内门调控机制。方法 采用分子生物学定点突变、爪蟾卵母细胞表达和双电极电压钳技术,以TREK-2激动剂(2-APB)为工具,探讨TREK-2通道的内门调控机制。结果 电生理特征分析表明,2-AP...
- 马晓芸卓仁恭张康刘晓燕魏晓莉郑建全
- 关键词：双孔钾通道
