廖芳
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 狂犬病病毒受体P75^(NTR)原核表达的抗原性分析及多克隆抗体制备被引量：2
- 2015年
- 【目的】分析狂犬病病毒(Rabies virus,RV)神经营养因子受体P75(P75NTR)原核表达的抗原性及制备出多克隆抗体,为进一步研究RV与P75NTR的相互作用机制奠定基础。【方法】采用RT-PCR从感染Flury株的NA细胞中克隆P75NTR基因,选取P75NTR基因的418~681 nt和831~1080 nt两个区域(共513 nt,编码171个氨基酸),与p ET-32a(+)重组构建原核表达载体,然后转化BL21(DE3)感受态细胞进行表达,再以纯化的P75NTR重组蛋白免疫昆明小鼠制备抗P75NTR抗体,并以Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测其抗原性。【结果】以原核表达载体p ET-P75-513转化BL21(DE3)感受态细胞,经0.2 mmol/L IPTG诱导6 h可获得较高表达量的P75NTR重组蛋白,且主要以可溶性蛋白形式进行表达,可用Ni-NTA树脂分离柱进行纯化。经Western blotting和IFA检测,发现制备获得的抗P75NTR抗体能与NA细胞表面自然的P75NTR及转染BHK-21细胞表达的P75NTR发生良好反应,且抗体效价高,可达1∶16000。【结论】原核表达的RV受体蛋白P75NTR抗原性强,免疫小鼠获得的多克隆抗体特异性高,反应性良好。
- 钟桃珍邢杏伟廖芳彭可可邓朝谦蒋元欧阳伶宣覃雨阳罗廷荣
- 关键词：抗原性原核表达多克隆抗体
- 小鼠抗病毒基因viperin的原核表达及其抗原性探索被引量：6
- 2014年
- Viperin是一种由Ⅰ型和Ⅱ型干扰素诱导的宿主蛋白,在进化上高度保守。本研究以小鼠脑组织为原材料,通过RT-PCR扩增得到包括完整open reading frame(ORF)的1 155 bp的viperin基因序列,成功亚克隆并构建了原核表达载体pET-32a-vip,将其转化到大肠杆菌Rosetta中进行原核表达。结果表明:原核表达的重组蛋白viperin主要以包涵体的形式表达,用镍离子亲和层析法获得纯度较高的viperin蛋白,为探讨原核表达的viperin抗原特性,将纯化的viperin蛋白免疫4周龄昆明小鼠,制备得到抗viperin多克隆抗体。经Western blot和IFA检测,该抗体能与真核细胞自然表达的viperin反应,特异性良好且效价高,表明原核表达的viperin具有良好的抗原性。获得的多克隆抗体为进一步研究viperin的抗病毒生物学功能奠定了良好的基础。
- 唐海波钟桃珍罗扬邢杏伟钟一治廖芳马净李晓宁廖素环梁晶晶罗廷荣
- 关键词：原核表达抗原性小鼠
