崔静
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院感染性疾病分子生物学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学历史地理更多>>
- HBV全基因组1.3倍体构建新策略及初步应用
- 乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是全球性的公共卫生问题，全世界有超过3.6亿的慢性感染者。进行病毒体外研究是HBV研究的重要方面，但目前缺乏有效的HBV体外感染模型，这极大地限制了HBV复制...
- 崔静
- 关键词：乙型肝炎病毒病毒复制耐药机制抗病毒药物药敏实验
- 文献传递
- RtS246T变异对HBV恩替卡韦敏感性的影响--一种新的HBV体外表型分析策略
- 胡接力黄爱龙崔静郭进军张文露袁作为李青岭邓小燕曾爱中唐霓
- 靶向HBV核心蛋白二聚体形成的药物筛选细胞模型
- 目的：本课题立足于开发靶向 HBV核心蛋白的新型抗病毒药物，通过对核心蛋白进行基因工程改造，利用分段海肾荧光素酶互补技术，建立一种表征核心蛋白二聚体形成的新方法，将其发展成为一种有效的靶向HBV核心蛋白的药物筛选模型，并...
- 崔静
- 关键词：药物筛选荧光素酶抗病毒药物
- SAMHD1通过调控p27表达抑制肝细胞癌细胞增殖的研究被引量：3
- 2020年
- 背景与目的:不育α基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1(sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain-containing protein 1,SAMHD1)具有抑制多种肿瘤细胞生长的作用,但其调节肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用及机制尚未见报道。探究SAMHD1调控p27的表达对HCC细胞Huh7的增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:首先通过蛋白质印迹法(Western blot)检测正常肝细胞和不同类型HCC细胞中SAMHD1的表达情况。利用基因修饰技术构建过表达SAMHD1、dNTP酶活性位点突变体(SAMHD1-D207N)和磷酸化位点突变体(SAMHD1-T592E)的重组质粒,然后利用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测过表达SAMHD1及其突变体或siRNA干扰沉默SAMHD1对HCC细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡情况。在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中分析SAMHD1和p27表达的相关性。结果:HCC细胞中SAMHD1表达上调,过表达SAMHD1、SAMHD1-D207N和SAMHD1-T592E可以抑制Huh7细胞增殖,细胞周期停滞在G1/G0期;相反,干扰SAMHD1后细胞增殖加快,细胞周期停滞在G2/M期。机制研究表明,SAMHD1上调细胞周期蛋白激酶抑制因子p27的表达。在HCC组织中,p27的表达与SAMHD1表达呈正相关。结论:过表达SAMHD1可以上调p27的表达,导致细胞周期停滞在G1/G0期,从而抑制HCC细胞增殖,这种抑制作用不依赖于其dNTP酶活性和磷酸化修饰。
- 皮思蝶郑小川毛彬力崔静胡源
- 关键词：肝细胞癌P27
- 抑制HBV核心启动子转录活性的化合物筛选与鉴定被引量：1
- 2021年
- 目的构建靶向核心启动子转录的稳定细胞系,筛选影响乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转录的药物。方法利用HepG2细胞,以重组慢病毒的方式构建由HBV核心启动子驱动的Gaussia荧光素酶稳定表达细胞系(HepG2-Pcore-Gluc)。通过检测荧光素酶活性来反映核心启动子的活性变化情况。在HBV复制细胞模型中,通过Southern blot、荧光定量PCR等进一步评估经多轮筛选得到的化合物对HBV RNA、HBV DNA的影响。结果利用HepG2-Pcore-Gluc细胞模型筛选1450种小分子化合物,第1轮筛选到41种化合物,能影响荧光素酶活性2倍以上。将这41种化合物进行第2轮剂量依赖性测试,得到2种化合物:逆转素(Reversine)、SCH58261。进一步验证发现:Reversine在瞬时转染HBV1.3倍体的HepG2和HepG2.2.15细胞中,能够有效降低HBV RNA、HBV DNA以及HBeAg、HBsAg的水平。结论建立了一种新型、高效的抗乙肝药物筛选细胞模型(HepG2-Pcore-Gluc),利用该模型筛选到一种新型分子Reversine,该分子可以通过抑制HBV核心启动子的转录活性来抑制HBV RNA的转录。
- 孙瑜雪魏霞飞李杰崔静王瑜伟胡接力
- 关键词：核心启动子细胞模型药物筛选
- MicroRNA122真核表达载体的构建及在HepG2细胞中的表达与检测被引量：2
- 2008年
- 为进一步研究microRNA的功能及作用靶标提供技术平台,构建microRNA真核表达载体。从HepG2215细胞基因组DNA扩增microRNA122前体,克隆到pEGFP-C1的载体上,经测序鉴定后转染至HepG2细胞中,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况并提取基因组总RNA,RT-PCR检测microRNA122表达,TA克隆鉴定。结果表明,成功构建microRNA122真核表达载体,并证实其在真核细胞HepG2中表达。此方法成功构建microRNA表达,并为后续研究提供良好的技术平台。
- 郝美君张祯祯张文露曾爱中崔静黄艺丹黄爱龙
- 关键词：MICRORNA绿色荧光蛋白真核表达载体
- Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶真核表达载体的构建及其表达鉴定被引量：2
- 2009年
- 为构建单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV1TK)的真核表达载体pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK,鉴定其在真核细胞中的表达和功能。以pORF-HSV1TK为模板,PCR扩增的目的基因HSV1TK片段与pMD18-T载体相连接构建重组克隆pMD18-T/HSV1TK。再双酶切出HSV1TK片段,插入pcDNA3.1-EGFP多克隆位点,构建pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK真核表达载体并进行酶切、测序鉴定[1]。分别用荧光显微镜观察和RT-PCR方法检测脂质体介导pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK在卵巢癌细胞SKOV3的表达;分别用MTT法和光镜检测胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV1TK/GCV)系统对SKOV3体外杀伤作用及旁观者效应。结果表明,重组载体酶切鉴定结果与预期结果一致,基因序列与GenBank上报道的HSV1TK基因序列完全一致。荧光显微镜观察转染后的细胞发出绿色荧光;RT-PCR结果表明HSV1TK基因能在SKOV3内有效表达。MTT和光镜结果显示转染HSV1TK基因的SKOV3细胞,加入前体药物丙氧鸟苷(GCV)处理后对其有明显的杀伤作用和旁观者效应。成功构建的真核表达载体pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK能在SKOV3细胞中稳定表达,且HSV1TK对卵巢癌细胞株SKOV3体外有强大的杀伤作用和旁观者效应。
- 樊萍杨竹胡接力崔静汤雄文王露颖甘胜伟
- 关键词：自杀基因真核表达载体旁观者效应卵巢癌
