宋希文
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：南京工业大学食品与轻工学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划江苏省高校自然科学研究项目江苏省“青蓝工程”基金更多>>
- 相关领域：化学工程生物学轻工技术与工程更多>>
- Ca^(2+)对枯草芽孢杆菌γ-谷氨酰转肽酶活性和热稳定性的影响被引量：1
- 2011年
- γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)可将γ-谷氨酰基从酰基供体催化转移至相应的受体上,形成新的γ-谷氨酰基化合物。今针对GGT稳定性差的缺陷,采用添加Ca2+的方法对其进行稳定化。研究了Ca2+对枯草芽孢杆菌GGT活性及热稳定性的影响。以4 mmol·L-1 CaCl2于37℃下处理30 min后,GGT的热稳定性得到了显著改善,且随温度升高Ca2+处理的效果更明显;测定了Ca2+处理后GGT酰基化反应动力学常数Km、Vmax和反应活化能Ea,其值分别为0.23 mmol·L-1,0.015 mmol·L-1·min-1和10.50 kJ·mol-1。与未经Ca2+处理时相比,酰基化反应米氏常数和反应活化能显著降低;GGT的失活反应活化能Ed为60.47 kJ·mol-1,与未加Ca2+时(50.42 kJ·mol-1)相比明显提高。表明Ca2+能提高GGT的活性和热稳定性,有效缓解酶的受热失活。
- 宋希文肖彦羚周治姚忠徐虹韦萍
- 关键词：Γ-谷氨酰转肽酶热稳定性CA2+反应动力学活化能
- 离子交换法分离S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸被引量：1
- 2009年
- 采用离子交换法对酶法合成的S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸(S-Bzl-GGC)进行了分离纯化.研究了QSephroseFF阴离子交换树脂对S-Bzl-GGC的吸附等温线,很好地符合Sips吸附等温线模型.考察了pH值、洗脱梯度、流速和进样量等条件对纯化效果的影响,建立了一套基于QSephroseFF阴离子交换树脂的纯化方案.结果表明,在pH8.2、洗脱梯度0～30%B(Tris-HCl缓冲液+1mol/LNaCl)12mL、流速2mL/min、进样量500μL的优化条件下,经一步分离,产物纯度可达98.5%,经1H-NMR鉴定产物结构正确.
- 刘步云周治姚忠吴明刚宋希文佘维娜肖彦羚韦萍
- 关键词：吸附等温线离子交换纯化
- 固定化γ-谷氨酰转肽酶催化合成γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸被引量：4
- 2009年
- 以环氧基树脂EupergitC250L为载体对B.subtilisNX-2GGT进行了共价固定化。固定化酶的最适作用pH为9.0,最适作用温度为60℃。固定化酶的热稳定性和贮存稳定性均较游离酶有显著的提高,经100d20个批次转化后,固定化残余酶活仍能保持初始值的80%左右。以固定化酶为催化剂,在反应条件为L-谷氨酰胺(Gln)20mmol/L、S-苄基-半胱氨酸(S-Bzl-cys)20mmol/L、酶浓度0.0375U/mL和pH9.0条件下,40℃水浴反应22h,转肽产物S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸(S-Bzl-GGC)得率为4.3mmol/L,较游离酶提高了11.96%。S-Bzl-GGC经酸解脱除保护基后可得γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸,产物纯度可达94.1%。
- 宋希文周治姚忠肖彦羚徐虹韦萍
- 关键词：Γ-谷氨酰转肽酶固定化酶法合成
- WRK对枯草芽孢杆菌NX-2产出的γ-谷氨酰转肽酶的不可逆抑制动力学被引量：2
- 2010年
- γ-谷氨酰转肽酶(GGT;EC2.3.2.2)催化的酰基转移反应可用于制备各种具有生理活性的谷氨酰化合物,对其开展酶活力不可逆抑制动力学研究对于阐明GGT的作用机制具有重要意义。今以化学抑制剂Woodward's Reagent K(WRK)与枯草芽孢杆菌NX-2产出的GGT进行不可逆抑制反应,根据邹氏理论测得WRK对GGT不可逆抑制反应的微观速率常数ki为0.03015s-1,WRK与酶结合常数KI为1.352mmol·L-1。有抑制剂存在下GGT与供体γ-谷氨酰对硝基苯胺的亲和力常数Km*=3.245mmol·L-1,GGT酰基化最大反应速度Vmax*=0.3771mmol·(L·s)-1。通过对GGT的失活动力学分析得到,失活反应级数为1.313,说明在GGT活性部位至少有一个谷氨酸(或天冬氨酸)残基参与催化反应。
- 肖彦羚周治姚忠宋希文佘维娜刘步云徐虹韦萍
- 关键词：动力学
