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重组人HMGB1 A box的表达纯化及对单核细胞的抑制作用被引量：2: 2010年; 目的:克隆人高迁移率族B1Abox(HMGB1 A box)基因,构建高效稳定的大肠杆菌(E.coli)表达菌株,并探讨其对免疫复合物(IC)刺激单核细胞活化的抑制作用。方法:根据本室优化合成的HMGB1基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段并插入克隆载体pMD19-T,菌落PCR、酶谱分析及DNA测序鉴定阳性克隆。重组克隆载体经NdeⅠ和XhoⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳分离目的基因,插入表达载体pQE-T7-2的相应位点,菌落PCR鉴定重组表达载体。重组菌株经IT-PG诱导,SDS-PAGE分析及Western blot鉴定重组蛋白。Ni2+-NTA层析柱纯化重组人HMGB1 A box,RT-PCR检测其对IC刺激单核细胞活化的抑制作用。结果:获得重组人HMGB1 A box的表达菌株,目的蛋白占菌体总蛋白的40%左右。Western blot显示重组蛋白能与抗人HMGB1多克隆抗体和抗His-Tag多克隆抗体特异反应。目的蛋白纯度高达90%以上,并能有效抑制IC诱导单核细胞分泌BAFF、IFN-γ及TNF-α。结论:成功构建了重组人HMGB1 A Box的表达载体,纯化的重组蛋白能有效抑制IC刺激单核细胞活化后细胞因子的分泌。; 朱敏崔彬焦玉莲王来城曲芸芸孙新平刘晓雯徐洁赵跃然; 关键词：BOX 活性测定

用免疫细胞化学染色法检测尿液中足细胞在肾小球疾病诊断中的初步应用被引量：2: 2013年; 足细胞（podocyte）损伤和脱落是肾小球疾病最早期的病理改变。目前判断慢性肾脏病损伤程度的金标准是肾活检。而尿液检测取材方便、无创伤性、易被患者接受。本研究用免疫细胞化学染色法,检测肾小球疾病患者和健康人对照者尿液足细胞标志蛋白podocalyxin（PCX）并进行足细胞计数,结果报道如下。; 张春芝白雪丽孙新平李丽叶辉张健卢志明; 关键词：足细胞肾小球损伤免疫细胞化学染色

人HMGB1真核表达载体的构建及其在单核细胞的表达: 2009年; 目的构建人高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达载体,并探讨其免疫调节作用。方法从HMGB1克隆载体酶切分离HMGB1基因片段,插入增强型绿色荧光蛋白载体pCITE-EGFP,菌落PCR和酶谱分析鉴定重组载体。重组表达质粒转染人单核细胞系(U937),梯度G418筛选,荧光和Western blot检测HMGB1的表达。结果菌落PCR和酶谱分析显示目的基因被正确插入真核表达载体,获得重组质粒pCITE-EGFP-HMGB1,转染U937细胞随培养基中G418浓度的升高而增强,转染细胞中目的蛋白HMGB1表达量明显升高。结论成功构建重组载体pCITE-EGFP-HMGB1,并获得稳定表达人HMGB1的单核细胞系,为研究HMGB1对单核巨噬细胞的作用及其机制奠定基础。; 徐洁崔彬焦玉莲游力张捷刘晓雯曲芸芸朱敏孙新平赵跃然; 关键词：高迁移率族蛋白质类真核细胞单核细胞

免疫复合物对单核巨噬细胞的调节作用被引量：8: 2010年; 目的研究免疫复合物对单核巨噬细胞的增殖、细胞因子的分泌及吞噬功能的调节作用。方法免疫复合物组:细胞坏死上清+系统性红斑狼疮(SLE)患者血清;对照组有5组:坏死上清+正常人血清组、坏死上清组、SLE血清组、正常人血清组和培养基组,以上分别作用于U937细胞和U937细胞诱导产生的巨噬细胞。24h后,用CCK-8法检测U937细胞的增殖,RT-PCR法检测U937细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和B细胞活化因子(BAFF)的变化,中性红比色法检测诱导产生的巨噬细胞的吞噬功能。结果与对照组相比,免疫复合物能明显促进U937细胞的增殖(P<0.05),TNF-α和BAFF的mRNA表达水平明显增加(P<0.05),并明显抑制巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。结论在免疫复合物作用下,单核巨噬细胞系统(MPS)处于异常活化状态,使免疫复合物的形成增多而清除减少,从而参与了SLE的发生发展。; 曲芸芸马春燕朱敏刘晓雯孙新平徐洁赵跃然; 关键词：红斑狼疮免疫复合物单核巨噬细胞增殖分泌

shRNA干扰沉默RAGE基因对前列腺癌细胞的生物学行为影响: 研究背景根据2009年美国肿瘤协会最新的统计,美国新发前列腺癌患者是192,280例,每年有27,360名男性死于前列腺癌。为了更好的获得此疾病的信息,根据其他国家现有的报道,中国、德国、以色列、牙买加、瑞典、乌干达的男...; 孙新平; 关键词：前列腺癌高级糖基化终产物小分子干扰RNA DU145细胞; 文献传递

人高迁移率族蛋白B1 Abox的基因合成及其在大肠杆菌中的表达: 目的:克隆人高迁移率族蛋白B1 Abox（human HMGB1 ABOX）基因,构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。方法:根据GenBank报道的人HMGB1 ABOX基因序列,对其基因序列进行优化,按照优化后的基因序列设...; 朱敏焦玉莲王来成张捷崔彬曲芸芸刘晓雯徐洁孙新平高学军赵跃然; 关键词：BL21 蛋白纯化; 文献传递

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孙新平