公共文化服务平台

共 8 条记录，以下是 1-8

全选清除导出

排序方式：

非分型流感嗜血杆菌Hap_s蛋白的分离纯化被引量：2: 2007年; 目的优化非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白质片段的分离纯化方法。方法采用盐析、透析脱盐、超滤浓缩、弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化Haps蛋白,优化Haps蛋白质片段的洗脱条件,包括pH值和离子强度,测定各洗脱液样品在280nm波长处的光吸收值(D280),用折线图显示,SDS-PAGE电泳检测分布图中处于峰值的样品,观察目的蛋白条带的出现。结果弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化HapS蛋白,缓冲液1洗脱液的D280分布为基线,缓冲液2洗脱液的D280分布折线图中有峰值出现,但峰有拖尾,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰主要为低分子量的蛋白条带;五种不同离子强度的缓冲液3洗脱液在100mmol/LNaCl离子强度时,D280的分布折线图显示有较高洗脱峰出现,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰有较明显的110000D的目的条带,其余离子强度下均未见明显洗脱峰出现。结论Sepharose CM FF层析柱分离纯化HapS蛋白质片段时,不同pH值的缓冲液对目的蛋白的洗脱没有明显影响,而主要影响杂蛋白的洗脱;100mmol/LNaCl离子强度的缓冲液3洗脱液获得较好的洗脱效果。; 李婉宜邝玉李明远杨远蒋中华姚锋陈长春; 关键词：蛋白纯化

不可分型流感嗜血杆菌Hap基因的克隆及原核表达被引量：1: 2009年; 构建不可分型流感嗜血杆菌(Non-typeable Haemophilus influenzae,NTHi)Hap基因的原核表达载体,并诱导其表达Hap融合蛋白。以NTHi标准株ATCC49247基因组DNA为模板扩增出Hap目的基因片段,双酶切后连接于原核表达载体pET-32a(+),构建Hap重组原核表达质粒pET-32a(+)-Hap,将经PCR、酶切及DNA测序鉴定正确者转化E.coliBL21(DE3),诱导表达带有His标签的Hap融合蛋白。SDS-PAGE电泳分析重组蛋白的相对分子量大小及表达形式,Western blot进一步鉴定表达产物的特异性。通过PCR成功扩增出NTHi Hap基因,构建了具有正确基因序列的Hap原核表达质粒pET-32a(+)-Hap,SDS-PAGE电泳分析成功表达出相对分子量(Mr)为176000的重组融合蛋白,该蛋白主要以包涵体的形式存在;Western blot结果表明该重组融合蛋白可与抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合。NTHi Hap蛋白在原核表达系统中的成功表达,将为Hap蛋白免疫活性的深入研究及NTHi新型保护性疫苗的开发奠定实验基础。; 李婉宜邝玉姚锋杨远陈长春蒋忠华李明远; 关键词：不可分型流感嗜血杆菌原核表达

重组小鼠β-防御素2的纯化及其体外抗NTHi活性的研究: 目的:在原核系统中表达并纯化重组MBD2融合蛋白,并对其体外抗NTHi的活性进行初步研究。方法:利用本实验室已经构建好的原核表达质粒PET32-mBD2,在优化的表达条件下诱导重组质粒高效表达;采用亲和层析法对目的蛋白进...; 姚锋邵京京李明远陆顺顺孟俊杰桑云璐李婉宜; 文献传递

重组MBD2体内抗不可分型流感嗜血杆菌机制的初步研究: 2011年; 目的观察实验小鼠体内注射重组鼠β防御素2(MBD2)后细胞因子的变化,评价重组MBD2对不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)感染小鼠的治疗效果,并对其抗感染机制进行初步探讨。方法重组MBD2蛋白注射实验小鼠,利用PCR半定量检测小鼠肺组织中TLR2、IL-1β、TNF-α、MBD2和β-Actine mRNA的表达;重组MBD2治疗NTHi肺部感染小鼠,通过肺指数、肺组织病理切片及肺部荷菌数检测,对其治疗效果进行评价。结果体内注射重组MBD2可显著提高实验小鼠肺组织TLR2、IL-1β、TNF-α及MBD2等细胞因子的表达量;重组MBD2的应用能显著降低NTHi肺部感染小鼠的肺指数及肺组织内的NTHi荷菌数,并能减轻感染小鼠肺组织的炎性浸润程度,明显改善其肺部病变。结论重组MBD2在体内对NTHi感染有较好的治疗效果,其作用机制可能与重组MBD2对机体特异性免疫应答的诱导密切相关,为防御素抗感染机制的进一步完善奠定了良好的实验基础。; 丰锋姚锋李婉宜李燕张强李明远邵京京; 关键词：不可分型流感嗜血杆菌细胞因子

风湿科需慎重选择非甾体类抗炎药被引量：2: 2011年; 对风湿科医师来说,已经有很多的药物来治疗关节炎,包括镇痛药、非甾体类抗炎药(NSAIDs)、激素、缓解疾病抗风湿药、生物制剂等。非选择性NSAIDs或者环氧化酶2选择性抑制剂已经被风湿科医师广泛应用于关节炎患者,但是随之而来的是使用NSAIDs药物患者的心血管疾病、肾脏疾病和胃肠道疾病的发病率逐渐增加。不同的NSAIDs药物这些不良反应的差异较大。治疗方案中,使用NSAIDs一定要考虑导致这些不良反应的风险。风湿科医师在处方时一定要根据个体差异来评估使用NSAIDs的利弊。; 姚锋李婉宜; 关键词：非甾体类抗炎药塞来昔布双氯芬酸心血管不良反应胃肠道出血

抗人SOCS1单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定被引量：1: 2009年; 目的制备高效价的抗人SOCS1单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-SOCS1融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA及Western blot鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、Ig亚类及相对亲和力。结果筛选到一株可稳定分泌抗人SOCS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Western blot显示在相对分子量为6.0×104处出现特异性反应带。杂交瘤细胞培养上清效价为1∶1280,腹水效价为1∶102400,Ig亚类为IgG1,相对亲和力达1.17×107L/mol。结论成功制备出能特异性识别人SOCS1的单克隆抗体,为进一步研究人体细胞因子信号传导的负反馈调节及SOCS1在微生物感染中的免疫调节作用奠定了基础。; 陈长春李婉宜康熙元姚锋邝玉丰锋; 关键词：SOCS1 单克隆抗体杂交瘤细胞

重组小鼠β-防御素2体外抗不可分型流感嗜血杆菌活性的研究: 目的:在原核系统中表达并纯化重组MBD2融合蛋白,并对其体外抗NTHi的活性进行初步研究。方法:利用本实验室已经构建好的原核表达质粒pET32-mBD2,在优化的表达条件下诱导重组质粒高效表达;采用亲和层析法对目的蛋白进...; 潘兴姚锋陆顺顺孟俊杰桑云璐李婉宜; 关键词：不可分型流感嗜血杆菌抗菌活性; 文献传递

不可分型流感嗜血杆菌重组Hap蛋白的表达及其生物学活性分析被引量：3: 2010年; 目的在原核系统中表达并纯化不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)的重要粘附因子Hap蛋白,并对其免疫原性和粘附活性进行初步研究。方法 IPTG诱导重组质粒pET32a(+)-Hap在E.coliBL21中高效表达,Ni2+亲和层析柱纯化表达产物。用纯化的Hap重组蛋白进行体外竞争黏附实验,SEM观察及菌落形成单位计数法分析该重组蛋白的黏附活性。纯化蛋白与黏膜免疫佐剂CT-B联合鼻腔免疫BALB/C小鼠,ELISA检测小鼠抗Hap的IgA及IgG抗体水平。结果纯化产物的SDS-PAGE分析显示获得单一的目的蛋白条带,Gelanalysis软件分析蛋白纯度可达85%,纯化产物超滤浓缩后,测得其蛋白浓度为3.2g/L。体外竞争黏附实验观察到Hap重组蛋白的加入可明显抑制NTHi对胞外基质的黏附,且细菌黏附量的减少与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。该重组蛋白与免疫佐剂CT-B联合免疫小鼠,可刺激机体产生较高水平的IgG或IgA抗体,与重组抗原单独免疫组相比,差异具有显著性(P<0.05)。结论 Hap蛋白在原核系统中获得较高浓度和纯度的表达,纯化Hap重组蛋白具有良好的免疫原性和粘附活性。; 姚锋李婉宜邝玉李明远丰锋冯伟张强; 关键词：不可分型流感嗜血杆菌免疫原性粘附活性

全选清除导出

共1页<1>

姚锋

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

姚锋

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈