化文平 作品数:31 被引量:175 H指数:9 供职机构: 陕西师范大学生命科学学院西北濒危药材资源开发国家工程实验室 更多>> 发文基金: 陕西省自然科学基金 国家自然科学基金 中央高校基本科研业务费专项资金 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 医药卫生 交通运输工程 更多>>
丹参GGPP合酶基因的克隆及表达分析 丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)是我国一种药用植物,以根及根茎入药,具有活血调经、祛癖生新、镇静安神、凉血消痈、消肿止痛等功效,被广泛应用于冠心病、脑血管病、肝炎、肝硬化、慢性肾衰竭、月经不调和... 化文平关键词:丹参 丹参酮 实时定量PCR 顺式作用元件 文献传递 向日葵异戊烯焦磷酸异构酶基因(ipi)的电子克隆和生物信息学分析 被引量:13 2008年 用电子克隆方法获得向日葵异戊烯焦磷酸异构酶(IPI)基因,并用生物信息学方法对此基因编码产物从氨基酸组成、理化性质、二级和三级结构以及功能进行预测和分析的结果表明,向日葵IPI为亲水性α/β蛋白,含有IPP异构酶结构域,其与其他植物的IPI在序列组成、结构及活性位点均有高度的相似性。 化文平 王喆之关键词:电子克隆 向日葵 生物信息学 丹参法呢基焦磷酸合酶基因(SmFPPS1)的表达模式 被引量:6 2013年 克隆了丹参中萜类物质合成相关的法呢基焦磷酸合酶基因(farnesyl diphosphate synthase,SmFPPS1,HQ687768),并对其序列特征进行了分析,发现该基因编码产物含有异戊烯基转移酶的特征结构域定位于细胞质中.功能互补分析显示,SmFPPS1不具有牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(geranylgeranyldiphosphate synthase,GGPPS)活性.实时荧光定量PCR分析结果显示,SmFPPS1在丹参生长的各个时期具有一定的组成性表达,在其花期的各器官中主要在花中表达,而且其表达受到茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)和真菌诱导子信号的诱导. 周露 化文平 杨滢 王喆之 李翠芹关键词:丹参 山麦冬的组织培养与快速繁殖 被引量:8 2006年 取幼嫩叶片做为外植体,在不同激素浓度的培养基中诱导形成愈伤组织、不定芽、不定根及完整植株。结果:诱导形成愈伤组织的最佳培养基是:M S+6-BA 2m g/l+NAA 0.2 m g/l;M S+6-BA2 m g/l+NAA 0.5 m g/l;M S+6-BA 2 m g/l+NAA 1 m g/l;诱导不定芽分化的最佳培养基是:M S+6-BA 2 m g/l+NAA 0.2 m g/l;最佳生根培养基是:1/2 M S+NAA 0.3 m g/l。 李勇慧 化文平 李向民关键词:山麦冬 快速繁殖 干涉丹参SmORA1对植物抗病和丹参酮类次生代谢的影响 被引量:8 2016年 【目的】乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是植物特有的一类转录因子,普遍参与植物各类胁迫反应。前期从药用植物丹参(Salvia miltiorrhiza)中筛选得到了一条与长春花(Catharanthus roseus)中Cr ORCA3高度同源的ERF转录因子编码基因(命名为Sm ORA1)。论文旨在通过干涉丹参Sm ORA1的表达,进一步明确Sm ORA1在植物抗病反应与丹参酮合成代谢调控中的作用。【方法】扩增Sm ORA1基因片段,构建Sm ORA1基因干涉载体pk-ORAi并采用农杆菌介导的叶盘转化法转化丹参,经抗生素抗性筛选和PCR鉴定获得阳性转基因丹参植株;采用分光光度法或酶联免疫方法检测立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)侵染后转基因株系中丙氨酸解氨酶(phenylalnine ammonialyase,PAL)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)等抗性相关酶活性和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、脯氨酸(proline,Pro)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量等抗性相关生理指标的变化;采用HPLC法考察干涉Sm ORA1表达对二氢丹参酮、隐丹参酮和丹参酮ⅡA等丹参酮类次生代谢物含量的影响;采用实时定量PCR考察干涉Sm ORA1对丹参株系抗性基因和丹参酮合成相关关键酶基因表达的影响。【结果】经抗生素和PCR筛选获得了11个阳性株系,进一步采用实时定量PCR分析得到3个Sm ORA1表达显著下调的转基因株系(RNAi-11、RNAi-18、RNAi-22),干涉效率达到80%以上。立枯丝核菌对丹参植株有明显的致病力,可以有效诱导丹参发病;其侵染后,Sm ORA1-RNAi转基因株系病情指数显著高于野生型(WT)和空载(VK)对照株系,病情更严重;Sm ORA1-RNAi转基因株系中的MDA含量显著高于WT和VK对照株系,说明干涉Sm ORA1的丹参株系抗衰老能力显著下降;植物抗性相关的PAL、CAT和SOD等酶活性以及GSH和Pro等物质含量显著低于对照株系,说明干涉Sm ORA1的丹参株系抗病性也呈现明显减弱;进一步研究 化文平 刘文超 王喆之 李翠芹关键词:丹参 抗病性 丹参酮 基于丹参基因组的COI1基因抗虫与次生代谢调控功能研究 被引量:9 2018年 本草基因组学极大地推动了药用植物分子育种、次生代谢网络调控和品质成因等研究的进程.本研究基于本草基因组学,从模式药用植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)基因组中克隆丹参COI1(SmCOI1)基因并初步分析其蛋白特征及表达模式.利用RNAi技术获得丹参COI1沉默株系(iCOI1).抗虫性检测结果显示,与对照相比iCOI1株系叶片损伤指数上升,对昆虫咬噬耐受性减弱;同时,抗性相关基因WKRY70和NPR1的表达量在iCOI1株系中显著降低.进一步检测iCOI1株系中主要次生代谢产物合成与积累情况,结果表明iCOI1株系中迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮及丹参酮ⅡA的含量较野生型显著降低,其生源合成途径中的关键酶基因C4H,RAS,HCT,HMGR,GGPPS,CPS,KSL,CYP76AH1的表达量较野生型显著下调,且与丹参COI1的沉默显著正相关.上述结果表明,丹参COI1基因参与调控丹参抗虫性及主要次生代谢产物合成和积累过程.本研究为丹参抗性研究和次生代谢过程调控提供理论依据,也为优质高产药用植物品种选育奠定了基础. 陈尘 曹晓燕 化文平 黄英 吕婷婷 张媛 张媛关键词:丹参 抗虫性 次生代谢 丹参变应原基因(Sam a1)的克隆及其原核表达 被引量:6 2008年 Ⅰ型变态反应是小分子植物蛋白结合IgE抗体引起的一种疾病。本文首次从丹参中克隆出变应原蛋白基因,命名为:Sam a1(GenBank注册号:EU122383)。Sama1包含483bp的开放读码框,编码160个氨基酸残基。其推导氨基酸(命名为:Sama1)具有Bet v1结构域,属于病原菌相关的Bet v1蛋白家族,与苹果中变应原mal d1类似蛋白同源性高达66%。三级结构预测模型显示Sam a1含有T细胞主要抗原决定簇的c端仅螺旋。实时定量PCR结果显示:黄瓜细菌性角斑病茵和NaCl溶液诱导下Sam a1的表达呈现上调趋势,表明Sam a1可能与病程相关蛋白和盐胁迫相关。Sam a1转入大肠杆菌M15后,表达出与预测蛋白大小相当的目标蛋白,IPTG诱导后5~7h目标蛋白可大量表达。本研究为从植物分子机制上了解中药变态反应作用机制奠定了基础,尤其对中药产业的发展具有重要的意义。 化文平 王喆之关键词:变应原 REAL PCR 丹参SmPI1和SmPI2基因克隆及胁迫表达研究 被引量:1 2015年 该研究从药用植物丹参中克隆了SmPI1和SmPI2蛋白酶抑制剂基因,采用生物信息学和实时荧光定量PCR方法对其序列及表达模式进行了分析。序列分析结果表明,丹参SmPI1和SmPI2基因分别含有一个长度为222bp和216bp的开放阅读框,编码73和71个氨基酸;2个编码蛋白都无跨膜结构域和信号肽,预测都定位于细胞质中;SmPI1和SmPI2蛋白与川桑、可可、苜蓿等植物的蛋白酶抑制剂基因相似性较高,分别为58%、52%、53%和54%、56%、51%。实时荧光定量PCR结果表明,SmPI1和SmPI2基因受茉莉酸甲酯(MeJA)和甘蓝黑腐病黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.Campestris,XC)显著诱导,说明丹参SmPI1和SmPI2基因可强烈响应这两类胁迫,可能参与丹参中两类胁迫分子途径相关的抗性反应。 孔维维 化文平 王喆之关键词:丹参 蛋白酶抑制剂 葡萄等植物DFR基因家族生物信息学分析 2013年 二氢黄酮醇4-还原酶(Dihydroflavonol 4-reductase,DFR)是花青素合成途径的关键酶之一,也是该途径的关键调控位点之一。该文以葡萄DFR家族为例,对多个物种DFR基因及编码蛋白在基因结构、编码氨基酸基本理化性质、疏水性、功能域、亚细胞定位和进化关系等方面进行了比较分析。为葡萄等富含花青素植物中花青素合成及调控研究提供基础资料。 化文平关键词:DFR 花青素 生物信息学 葡萄 丹参非特异性脂质转移蛋白基因(SmLTP1)的克隆及其表达分析 被引量:7 2011年 对丹参EST序列进行Blast分析,获得一个新的非特异性脂质转移蛋白基因,命名为SmLTP1(GenBank注册号为EF187461)。该基因cDNA全长593bp,包含一个长为357bp的开放读码框,编码118个氨基酸。生物信息学结构分析表明,该蛋白具有植物nsLTP的典型结构,即4对二硫键,4个α-螺旋,1个可结合和容纳脂肪酸分子的类似口袋状的疏水结构。实时荧光定量PCR分析结果表明,SmLTP1基因在丹参不同组织器官中差异表达,其表达受病原菌和茉莉酸甲酯的诱导,显示SmLTP1基因在植物防御反应中发挥作用。 刘梅 生华 化文平 储君 王喆之关键词:丹参 非特异性脂质转移蛋白 基因克隆 生物信息学分析 实时荧光定量PCR