刘海金
- 作品数：16 被引量：32H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 副猪嗜血杆菌平板凝集检测方法的建立与应用被引量：4
- 2015年
- 【目的】建立快速检测副猪嗜血杆菌抗体的平板凝集试验方法,以便能够对副猪嗜血杆菌病进行快速、准确的诊断。【方法】利用9株(Ea、Ec、Ew、A1、A2、B1、B2、C1、C2)副猪嗜血杆菌陕西分离株制备平板凝集抗原,用其免疫健康家兔制备血清抗体,建立副猪嗜血杆菌平板凝集检测方法,对制备抗原的优势菌株进行筛选,并对该方法的特异性、敏感性、抗原最佳工作浓度进行检测。【结果】选出Ew株作为制备抗原的种子菌株,成功建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的平板凝集试验方法;该方法具有良好的特异性和敏感性,抗原最适工作浓度为8×109 CFU/mL。采用本试验建立的副猪嗜血杆菌平板凝集试验方法对临床血清样品的检测结果与临床诊断结果基本一致。【结论】建立的副猪嗜血杆菌平板凝集试验方法能够对副猪嗜血杆菌病做出较为快速、准确的诊断;陕西省存在副猪嗜血杆菌不同程度的感染,规模猪场集中饲养的猪感染副猪嗜血杆菌的比率明显高于散户。
- 高艳张定全杨增岐梁留存刘海金吴朋朋高小龙常旭东杜恩岐
- 关键词：副猪嗜血杆菌抗原制备平板凝集抗体检测
- 1种高效纳米抗体生产方法的建立
- 2013年
- 为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2)Cap蛋白的纳米抗体基因为靶蛋白,构建了pHSIE-Nb(His-Sumo-Intein)、pHSIE-intein-Nb(His-Intein)和pET32a-intein-Nb(His-Trx-Intein)3种表达载体。分别转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,在不同表达条件下比较,选取可溶性表达最好的载体大量表达,用Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化,并利用Intein自剪切去除标签,纯化纳米抗体。且用制备的纳米抗体作为包被抗体,做双抗体夹心ELISA检测其反应原性。结果显示3种不同融合标签的纳米抗体都可成功表达,而融合His-Trx-Intein标签的载体可溶性表达量最高。融合蛋白经pH7、25℃剪切24h后可以得到不含融合标签的纳米抗体。双抗体夹心ELISA检测,统计学分析,制备的抗PCV2Cap纳米抗体蛋白包被的样品组与阳性对照组差异不显著(P>0.05),因此制备的纳米抗体是有活性的。本研究成功建立一种高效表达、纯化纳米抗体的方法,可以增加蛋白表达量、可溶性和简化蛋白纯化过程,获得具有活性的无标签的纳米抗体。为其进一步的纳米抗体理论研究和生产应用提供技术支持。
- 贺生芳付向晶刘阳坤慕国辉刘海金王兴龙杜恩岐杨增岐
- 关键词：融合标签表达纯化
- 一种伪结核棒状杆菌致弱方法及应用
- 本发明公开了一种伪结核棒状杆菌致弱方法及应用，可以实现对伪结核棒状杆菌的人工致弱，通过本方法对伪结核棒状杆菌实现长期传代致弱，可将其作为疫苗株应用于畜禽免疫产业，日后其推广和应用具有巨大的市场需求，能够产生可观的经济和社...
- 王兴龙王斌党如意杨增岐邱立刘海金
- 文献传递
- 用于研究NDV RNA编辑特性的微型基因组系统及差异性表达两种外源基因的方法
- 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及用于研究NDVRNA编辑特性的微型基因组系统及差异性表达两种外源基因的方法。本发明提供的重组基因在NDV中可产生多个转录本，并且使两种目标基因的表达产生恒定比例的差异，编辑位点上游目标...
- 萧飒孟繁星田健霞杨增岐刘海金党如意
- 牛副流感病毒3型全长感染性克隆及其构建方法、用途
- 本发明涉及病毒构建技术领域，具体涉及一种牛副流感病毒3型全长感染性克隆及其构建方法、用途。该牛副流感病毒3型全长感染性克隆的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示。本发明用分离自中国牛群的BPIV3毒株，构建出包含病毒...
- 杨增岐韩宇刘海金
- 长链非编码RNA——病毒与宿主相互作用中的新型调控因子被引量：1
- 2020年
- 长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一类长度>200 nt的非编码RNA,在多种生物学过程中发挥重要调控作用。近年来研究表明,lncRNAs可被病毒诱导表达,其作为一类新型的调控因子介导宿主与病毒相互作用,通过病原识别受体,以不同机制激活或抑制天然免疫应答反馈病毒感染。本文阐述了lncRNAs介导病毒与宿主相互作用中的调控机制,归纳了它们在宿主抗病毒天然免疫应答过程中的调控网络,以期为研究lncRNAs在抗病毒中的作用提供参考,为揭示病毒的致病机制和发现新的抗病毒靶标奠定基础。
- 赵学亮刘海金萧飒王兴龙杨增岐
- 关键词：长链非编码RNA病毒天然免疫
- 天鹅维氏气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌与大肠埃希氏菌混合感染的诊断被引量：4
- 2022年
- 为对饲养于某人工湖的1只病死天鹅进行病原诊断,在临床检查和病理剖检的基础上,无菌采集该天鹅病变组织进行细菌学检测,并对分离菌株进行小鼠致病性试验和药敏试验。经细菌分离培养、革兰氏染色、镜检、生化鉴定和分子生物学鉴定,成功分离到3种革兰氏阴性杆菌分别为维氏气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌和大肠埃希氏菌,小鼠致病性试验结果表明,3株分离菌株均有致病性。纸片扩散法药敏试验结果表明3株分离菌株均对链霉素、庆大霉素敏感,对阿莫西林、泰乐菌素等有耐药性。病例最终确诊该天鹅为维氏气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌和大肠埃希氏菌混合感染致死,能够为珍稀野生保护动物的相关病原研究和防治提供参考。
- 白新栋王斌王晨骁王小园王娟刘海金杨增岐党如意
- 关键词：天鹅维氏气单胞菌大肠埃希氏菌
- 秦岭野鸟源新城疫病毒致病性与F、HN基因分子特征分析被引量：5
- 2013年
- 为研究新城疫病毒(NDV)在秦岭地区野生鸟群中的流行情况,在秦岭地区采集健康野鸟咽喉、泄殖腔拭子各252份,进行NDV的分离、鉴定,并对NDV分离株进行生物学特性研究和遗传进化分析。结果共分离获得5株野鸟源NDV,其致病指数MDT、ICPI和IVPI分别为60.0～76.8h、0.900～1.261、0.41～0.81;对F基因(47～420bp)进行遗传进化分析,5株分离株均属于基因VIb型,F蛋白裂解位点为112 RRQKRF117;HN基因氨基酸相似性为99.5%～99.8%,与鸽源基因VI型NDV相似性为91.4%～98.0%,与LaSota、F48E9相似性分别为87.1%～87.4%、89.0%～89.3%。上述结果表明,基因VIb型NDV在秦岭地区健康野生鸟类中流行,可能源于鸽源NDV,并具有强毒力的分子特征,但对鸡的表现为中等致病力,说明野鸟NDV具有独特的分子特征和致病性。
- 张渭东王丹阳唐文雅王兴龙姜振国陈胜利幕国辉刘海金贺生芳付向晶郝华芳刘阳坤杜恩岐杨增岐
- 关键词：F基因HN基因遗传进化分析
- 我国家禽新城疫病毒流行基因型分析被引量：5
- 2022年
- 新城疫病毒(NDV)为RNA病毒,突变频率高,已进化出21种基因型。NDV强毒株引起的新城疫(ND)对我国养禽业造成巨大威胁。疫苗株与流行株基因型的不匹配导致疫苗效果不佳,影响了ND的防控。NDV可感染多种家禽,在不同宿主中流行的NDV基因型不同。目前,缺乏对我国家禽中NDV流行基因型的系统分析,影响了针对不同家禽ND疫苗的研发。论文对我国家禽中2352株NDV分离株进行统计分析,根据NDV基因型分类标准,就分离于我国的NDV基因型作详细介绍,从而为不同家禽基因匹配型疫苗的研发提供借鉴。
- 赵怡倩赵跃祺吴慧芳杨增岐刘海金
- 关键词：新城疫病毒宿主基因型
- 牛副流感病毒3型全长感染性克隆及其构建方法、用途
- 本发明涉及病毒构建技术领域，具体涉及一种牛副流感病毒3型全长感染性克隆及其构建方法、用途。该牛副流感病毒3型全长感染性克隆的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示。本发明用分离自中国牛群的BPIV3毒株，构建出包含病毒...
- 杨增岐韩宇刘海金
