刘姝 作品数:15 被引量:22 H指数:3 供职机构: 首都医科大学宣武医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 北京市科技新星计划 北京市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
Per1和Per2基因实时荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立 被引量:1 2006年 蔡彦宁 左晓虹 刘姝 谢淑 温玫 陈彪关键词:PER1 PER2 实时荧光聚合酶链反应 小鼠纹状体时钟基因表达的生后发育 被引量:4 2009年 目的研究小鼠纹状体中时钟基因表达的生后发育。方法选新生早期(P3)、断奶前期(P14)和成年(P60)小鼠,光照1h[01Hour-After-Light-On(HALO)=09:00]起取纹状体,连续24h取材,取材时间间隔6h。实时定量RT—PCR检测时钟基因Bmall,Clock,Cryl,Perl和Rev-erbamRNA水平。结果P3组中,5种时钟基因表达均无明显波动;P14组仅有Rev-erb αmRNA表达随时间变化(P=0.027),表达高峰在19-01HALO;而P60组,各基因表达均表现明显波动[Bmall(P=0.004)、Clock(P=0.004)、Perl(P=0.004)、Rev—erbcL(P=0.004)],Bmall,Clock和Cryl的高峰在01HALO,Perl和Rev—erbct分别在13HALO和07HALO。此外每种基因的总体表达水平出生后也呈动态变化,Bmall,Clock,Perl和Rev—erb表达丰度随发育而增加,P3组〈P14〈P60;Cryl则在P3和P60表达相近,P14表达较低。P3和P14组Bmall、Clock分别为1.74和1.16,表明发育早期Bmall的表达高于Clock。结论纹状体时钟基因在出生后逐渐发育,最终形成成年小鼠中调节纹状体生物节律的、功能完善的网络。 左晓虹 蔡彦宁 李宁 刘姝 张燕莉 陈彪关键词:昼夜节律 纹状体 帕金森病睡眠结构改变的研究 <正>帕金森病(Parkinson disease,PD)是一种中老年人常见的神经系统退行性疾病,65岁以上老年人中发病率达1%-2%。患者除运动功能障碍外,还存在睡眠障碍、自主神经功能紊乱和嗅觉障碍等非运动障碍症状。其... 温玫 刘姝 蔡彦宁 陈彪关键词:帕金森病 睡眠 节律 文献传递 MPTP作用下小鼠黑质和纹状体中不同时期基因表达变化 被引量:1 2007年 目的了解帕金森病小鼠模型黑质和纹状体中差异表达的基因以及在MPTP作用后不同时间点基因表达变化的规律。方法取16只SPF级C57BL/6J小鼠,用数字表法随机分为2组。MPTP组:30mg/kgMPTP腹腔注射1次。对照组:注射等量生理盐水。制模后分别在1d和2个月时分离黑质和纹状体。抽提总RNA,利用寡核苷酸芯片分析1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)作用下不同时间点的差异表达基因。结果所检测的1200个基因中,黑质在制模后第1天有13个基因差异表达,2个月时有6个基因差异表达;纹状体中第1天有12个基因差异表达,2个月时有13个基因差异表达。差异表达的基因与多种生理过程,如应激反应、蛋白质磷酸化、蛋白酶体系统、信号转导等密切相关。结论帕金森病的发生、发展过程涉及到多种基因表达水平和多个生理过程的改变。黑质中γ-氨基丁酸通路以及纹状体中蛋白质的磷酸化水平和正确折叠在MPTP小鼠模型中发生了显著变化。 蔡彦宁 温玫 刘姝 陈彪关键词:黑质 纹状体 MPTP 帕金森病睡眠结构改变的研究 2007年 帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种中老年人常见的神经系统退行性疾病,65岁以上老年人中发病率达1—2%。患者除运动功能障碍外,还存在睡眠障碍、植物神经功能紊乱和嗅觉障碍等非运动障碍症状。其中睡眠障碍存在于至少60%-909/6的PD患者中,严重影响病人的生活质量。因此,帕金森病相关的睡眠障碍日益受到关注。 刘姝 蔡彦宁 陈彪关键词:睡眠障碍 帕金森病 中老年人 退行性疾病 神经系统 C57 BL/6J小鼠肝脏中mPer1基因CpG岛甲基化分析 2009年 目的建立分析C57BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区甲基化状态的亚硫氢酸修饰法,检测mPer1表达峰、谷对应的甲基化状态。方法利用实时定量PCR方法检测mPer1基因表达时相特点,并利用亚硫氢酸修饰法对小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区域CpG岛和E-box甲基化情况进行了研究。结果C57BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因表达有显著波动性,表达高峰位于ZT13,低谷位于ZT01。序列分析显示mPer1基因启动子区含有CpG岛,并且该CpG岛覆盖与mPer1波动性表达密切相关的顺式元件E-box1和E-box2。亚硫氢酸修饰测序结果显示,mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均呈低甲基化或非甲基化状态。不同时间点mPer1基因CpG岛甲基化频率无显著变化(P=0.458)。结论肝脏中mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均为开放状态,可以与时钟相关转录因子结合。甲基化不参与调节mPer1基因的节律性表达。 刘姝 蔡彦宁 陈彪关键词:CPG岛 甲基化 实时定量PCR 人类外周血hPer1基因节律性表达的研究 被引量:1 2006年 目的生物节律广泛存在于人类生活和工作中,为研究正常人节律基因表达特点,定量检测正常年轻人外周血中节律基因Per1(humanPeriod1,hPer1)的表达。方法实验对象为7名大学生(H1-H7),年龄24 ̄30岁,男性3名,女性4名。其中H7于实验前1天晚上值夜班。分别在09:00,15:00,21:00,03:00,09:00点抽取肘静脉血6mL,抽提全血总RNA。应用竞争性RT-PCR方法定量检测实验对象外周血中每人每个时间点hPer1基因的表达。结果人类外周血中hPer1基因的表达有显著节律性。表达高峰在09:00而低峰在21:00,两者之间的差异达2.29±0.9倍(P<0.01),第2天09:00hPer1基因表达水平又回到最高峰。结论hPer1基因的表达在外周血中存在节律性。 刘姝 陈彪 蔡彦宁 温玫 左晓虹关键词:生物节律 人类外周血 节律性 基因表达水平 节律基因 C57小鼠肝、肾、脾、胸腺组织时钟基因的表达特点 被引量:6 2007年 目的探测不同脏器组织中时钟基因的表达水平及其波动性。方法用实时荧光定量PCR方法检测C57小鼠肝、肾、脾和胸腺中4种重要时钟基因mBMAL1、mPER1、mCRY1和mCRY2的表达。结果肝和肾中4种时钟基因的表达水平均有显著波动(P<0.01);而脾中仅mBMAL1、mPER1、mCRY1的节律性表达明显(P<0.01,P<0.001,P<0.05),并且波动振幅较为平和;胸腺中4种时钟基因的表达均不具备昼夜波动的特征,同时表达水平也与其他3种组织存在显著差异(P<0.01)。时钟基因所构成的环路在不同组织中也不尽相同,mPER1的负反馈效应在肝中较为主要,mCRY1和mCRY2的负反馈效应在肾和脾中较为主要。结论不同周围组织的分子时钟存在着显著的差异,其相关正负反馈元件和环路有待进一步研究阐明。 刘姝 蔡彦宁 谢淑 关云谦 陈彪关键词:昼夜节律 时钟基因 实时荧光定量PCR 利用荧光定量聚合酶链反应检测小鼠纹状体中Per1基因的表达规律 被引量:3 2006年 目的建立定量检测Per1 mRNA表达水平的系统,并检测小鼠纹状体中该基因的表达规律。方法提取小鼠纹状体总RNA,用Per1基因特异性引物进行聚合酶链反应(PCR),以荧光染料SYBR green I法进行实时检测。结果确定了Per1基因荧光定量的扩增和检测参数。证明在此条件下无非特异扩增,并且扩增效率在90%以上。利用此检测体系发现小鼠纹状体内Per1基因的表达呈节律性波动。结论所建立的方法能够定量测定Per1 mRNA表达水平,具有灵敏度高,线性范围广的特点。纹状体中Per1基因表达的节律性波动提示黑质纹状体系统间的相互调节可能具有昼夜节律性差异。 蔡彦宁 左晓虹 刘姝 谢淑 温玫 陈彪关键词:PERL SYBR 纹状体 MPTP对C57小鼠纹状体DA释放节律的影响 被引量:1 2006年 目的观察MPTP(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶)对C57BL/6J小鼠纹状体DA(多巴胺)、5-HT(5-羟色胺)等神经递质的释放节律性的影响。方法取120只SPF级C57BL/6 J小鼠,随机分为2组:MPTP组连续5 d腹腔注射MPTP-HCl 36mg/(kg.d),对照组注射生理盐水300μL。5 d后24 h内分6个时间点:ZT0、ZT4、ZT8、ZT12、ZT16、ZT20,取纹状体,用HPLC-ECD法检测各时间点2组纹状体中DA、5-HT的水平。结果MPTP组纹状体DA水平明显降低(P<0.05);对照组DA高峰出现在ZT0(即8:30 am),低谷在ZT16(即1:30 am),MPTP组DA的高峰和低谷出现的时相未发生改变。2组5-HT均无明显节律性释放。结论小鼠纹状体的DA水平呈节律性变化,5-HT无节律性变化,MPTP作用后对DA的节律性变化无影响。表明此模型纹状体DA的减少与DA释放节律性之间不存在必然联系。 左晓虹 陈彪 蔡彦宁 吴燕川 刘姝 谢淑 温玫关键词:MPTP 多巴胺 昼夜节律