余大为
- 作品数：8 被引量：17H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家高技术研究发展计划引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 转乳铁蛋白肽和α干扰素基因的牛胎儿成纤维细胞的制备被引量：1
- 2012年
- 旨在构建含有乳铁蛋白肽基因和α干扰素基因的载体,并制备转基因牛胎儿成纤维细胞,为研制抗乳房炎和口蹄疫转基因克隆牛提供供体细胞。本研究构建了由山羊β-酪蛋白启动子启动的牛乳铁蛋白肽基因和由CMV启动子调控的人α干扰素基因的载体,以EGFP基因作为报告基因,neo基因作为筛选基因;分别采用脂质体和电击法转染牛胎儿成纤维细胞,G418筛选得到转基因阳性细胞,并用PCR方法检测转基因细胞中目的基因的整合情况,用Western blotting检测α干扰素蛋白的表达。结果,得到了同时含有牛乳铁蛋白肽基因和人α干扰素基因的转基因牛胎儿成纤维细胞,并且α干扰素蛋白在转基因细胞中能有效表达。
- 余大为张守峰朱化彬张锦霞范宗兴郝海生刘岩赵学明秦彤杜卫华
- 关键词：乳铁蛋白肽Α干扰素转基因牛胎儿成纤维细胞
- 一种改进的核移植方法制备克隆荷斯坦种公牛
- 体细胞克隆技术用于性状优良家畜的快速扩繁，能极大地缩短传统育种方式改良家畜品种的进程。本研究旨在运用一种改进的核移植技术扩繁引进的、优秀的后测荷斯坦种公牛。
- 余大为孙业清杨林任晶晶范宗兴王皓宇郝海生朱化彬杜卫华
- 关键词：荷斯坦牛体细胞克隆核移植良种繁殖
- 家畜转基因育种研究进展被引量：13
- 2011年
- 转基因技术可以将外源基因导入家畜基因组,使其获得新的可遗传性状,为培育优良家畜品种提供了革命性途径。DNA显微注射法和体细胞克隆法是制备转基因家畜最常用的方法。应用转基因技术可以进行家畜抗病育种(抗病毒、抗菌和抗寄生虫),改良家畜的生产性状(胴体组成、奶品质、产毛、繁殖力和生长速度),培育环保型家畜新品种。文章从动物转基因技术入手,阐明其在家畜品种改良方面的研究现状和策略,并探讨家畜转基因育种面临的问题和应用前景。
- 余大为朱化彬杜卫华
- 关键词：转基因家畜育种安全性
- α干扰素在牛转基因细胞和核移植胚胎中的表达与功能研究
- 乳房炎和口蹄疫是危害奶牛养殖业两种严重的疾病，本研究旨在运用转基因克隆技术在牛的乳腺中特异表达乳铁蛋白肽以抵抗乳房炎，全身细胞内表达α干扰素以抵抗口蹄疫，研制同时抵抗细菌性和病毒性疾病的转基因奶牛新品种。 本研究构建了山...
- 余大为
- 关键词：乳房炎口蹄疫乳铁蛋白肽Α干扰素
- 文献传递
- 爪蟾卵母细胞抽提物诱导体细胞重编程研究
- 本实验应用爪蟾卵母细胞抽提物处理体细胞，使其发生重编程，恢复部分全能性。应用此细胞作为核供体，以期在后续的克隆实验中帮助重构胚发育，提高克隆效率。
- 范宗兴余大为郝海生赵学明王栋刘岩秦形朱化彬杜卫华
- 关键词：爪蟾细胞克隆体细胞核移植重编程
- 过表达组蛋白甲基转移酶ASH1L对牛卵丘细胞增殖和凋亡的影响
- 2023年
- 旨在探究缺失的、小的、同源异形1(absent,small,or homeotic 1-like,ASH1L)过表达对牛卵丘细胞(cumulus cells,CCs)增殖和凋亡的影响。本研究将牛ASH1L SET结构域的cDNA序列克隆到pcDNA3.1上,构建牛ASH1L过表达载体;以导入pcDNA3.1+ASH1L载体的牛CCs为过表达组(ASH1L-OE),野生型牛CCs为对照组(Control),采用免疫荧光染色检测两组细胞中ASH1L表达水平和H3K36me1/2/3甲基化水平;通过流式细胞术分析ASH1L过表达细胞的凋亡和增殖情况;采用荧光定量PCR检测两组细胞中凋亡、增殖相关基因的mRNA表达水平。以牛CCs cDNA为模板,PCR扩增获得长2487 bp的牛ASH1L SET结构域DNA片段,与pcDNA3.1载体连接;经Nhe I/Not I双酶切和测序鉴定,成功构建过表达载体pcDNA3.1+ASH1L。过表达载体转染牛CCs后,细胞中ASH 1L mRNA及其蛋白表达水平、H3K36me1/2甲基化水平均显著升高(P<0.05)。另外,ASH 1L过表达显著提高了活细胞率(91.85±1.25)%vs.(87.39±1.71)%,降低了细胞凋亡率(8.08±1.21)%vs.(12.51±1.72)%,并显著下调了凋亡基因BAX和CASPASE-3 mRNA表达水平(P<0.05),上调抗凋亡基因BCL-2 mRNA表达水平(P<0.01)。ASH 1L过表达24、36 h时,细胞增殖率、增殖相关基因PCNA、CCND 2表达水平显著升高(P<0.05)。可见,ASH 1L过表达抑制了牛CCs凋亡,诱导了细胞增殖及H3K36me1/2甲基化水平的升高,为进一步研究ASH1L对CCs生长和卵泡发育的调控提供技术和理论基础。
- 王婉洁陈南珠邹惠影周心仪郝海生庞云渭朱化彬赵学明余大为杜卫华
- 关键词：过表达细胞增殖
- 荧光定量PCR检测牛性别相关基因DAX1表达的标准质粒和标准曲线的构建被引量：2
- 2010年
- 本研究根据GenBank中登录的剂量敏感的性别反转-先天性肾上腺发育不良基因1(dosage-sensitive sex reversal,adrenal hypoplasia critical region,on chromosome X,gene 1,DAX1)设计引物,构建包含DAX1基因cDNA片段的质粒,作为中国荷斯坦牛DAX1基因mRNA定量检测的标准品,建立了DAX1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法特异性好,检测灵敏度达102拷贝,线性范围为102～106拷贝,阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值间有着良好的线性关系(r=0.99975),扩增效率高(E=100%),可以作为检测牛DAX1基因mRNA定量检测方法。
- 徐超杜卫华王宗礼余大为王栋郝海生赵学明朱化彬
- 关键词：荧光定量PCRTAQMAN探针
- 定量检测牛雌性发育候选基因FOXL2表达方法的建立被引量：1
- 2012年
- 本研究根据GenBank中登录的剂量敏感的翼状螺旋/叉头转录因子2(forkhead transcription factor 2,FOXL2)设计引物,构建包含FOXL2基因cDNA片段的质粒,作为中国荷斯坦牛FOXL2基因mRNA定量检测的标准品,建立了FOXL2基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法特异性好,检测灵敏度达101拷贝,线性范围为101～106拷贝,阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r=0.998689),扩增效率高(E=99.62%),可以作为检测牛FOXL2基因mRNA定量检测方法。
- 徐超杜卫华赵家平余大为王栋郝海生李光玉朱化彬
- 关键词：荧光定量PCRTAQMAN探针
