何思志
- 作品数：9 被引量：49H指数：4
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 早期类风湿关节炎患者和正常人血清蛋白质组学分析比较被引量：28
- 2005年
- 目的探讨类风湿关节炎(RA)早期患者血清蛋白质与正常人的差异。方法(1)选取10例病程1年内的早期RA患者血清以及10名正常对照。(2)血清样品处理高分子量蛋白质通过亲和层析以HiTrapTMBlue柱亲和除去白蛋白随后以HiTrapTMrPriteinA柱亲和除去IgG进行富集。低分子量蛋白质通过C18吸附剂吸附梯度洗脱处理血清进行富集。(3)通过双向电泳进行差异比较,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴定差异蛋白点。结果通过比较RA患者与正常对照血清的高分子量及低分子量蛋白质双向电泳,发现了RA患者中存在多个表达异常蛋白质点,差异蛋白质点质谱鉴定结果(1)RA患者血清中髓系相关蛋白(MRP)14阳性比例为10/10,正常对照均阴性;RA中MRP8阳性比例为10/10,正常对照为5/10;RA中泛素阳性比例为9/10,正常对照为1/10。(2)RA患者中载脂蛋白A I(ApoA I)、血清淀粉样蛋白(SA)A1、A2和转甲状腺蛋白含量明显高于正常人。结论MRP14/MRP8,SAA1/SAA2和泛素可能在RA致病过程中发挥了作用。
- 安媛蒲海何思志栗占国
- 关键词：血清蛋白质组学正常人基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱血清淀粉样蛋白类风湿关节炎双向电泳
- 淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑蛋白质组蛋白质表达差异被引量：2
- 2006年
- 目的:以蛋白质组学技术研究淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑蛋白质表达差异,从蛋白质分子水平探索老年性痴呆发病机制。方法:实验于2002-03/2003-10在河北医科大学第二医院、解放军总医院老年医学研究所、北京大学蛋白质工程国家重点实验室完成。淀粉样β蛋白前体转基因小鼠4只与正常C57小鼠4只脑组织经蛋白提取后,分别以固相pH梯度等电聚焦为第一向,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳为第二向进行双向电泳。图像分析软件Im-ageMaster2DElite分析电泳图谱。以MALDI-TOF质谱仪对差异蛋白进行鉴定。结果:8只小鼠均进入结果分析。11个蛋白点在淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑组织表达量明显不同。他们分别被鉴定为热休克蛋白86ku-1、神经丝三联体L、氧化还原酶75ku亚单位前体、血清白蛋白前体、甘油-3-磷酸脱氢酶、三磷酸腺苷合酶α亚单位、α-烯醇化酶、γ-烯醇化酶、泛素结合酶E2、肌酸激酶、天冬氨酸氨基转移酶。结论:通过蛋白质组学技术,寻找并鉴定了淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑差异表达蛋白质。
- 杨国锋彭立威姚建华何思志纪建国于东华李冬梅
- 关键词：淀粉样Β蛋白前体小鼠转基因淀粉样Β蛋白电泳蛋白质组
- Tau蛋白病的蛋白质组研究被引量：3
- 2005年
- 目的 对Tau蛋白病患者与4例正常老年人尸检脑标本进行蛋白质组学研究以期了解Tau蛋白病分子机制并寻找诊断治疗该疾病的蛋白质标记物。方法 颞叶蛋白质以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2 DE),分析电泳图谱,基质辅助激光解析/电离飞行时间(MALDI TOF)质谱或MALDI TOF/TOF串联质谱鉴定蛋白质。结果 18种蛋白质的表达量在Tau蛋白病患者与正常老年人显著不同。分别被鉴定为3 磷酸甘油醛脱氢酶、尿嘧啶DNA糖苷水解酶、Cu Zn超氧化物歧化酶、异柠檬酸脱氢酶亚单位、synaptotagminI、Peroxiredoxin2、胶质纤维酸性蛋白、p25α、烯酰辅酶A水合酶短链1、吡哆醇5′磷酸氧化酶、Mn超氧化物歧化酶、α烯醇化酶、抗氧化蛋白2、铁蛋白H链、谷氨酸脱氢酶、肽基脯氨酸顺反异构酶A、血清白蛋白前体、二氢嘧啶酶相关蛋白2。结论 上述差异蛋白有助于深入理解Tau蛋白病机制并有望在Tau蛋白病的早期诊断及新药开发上发挥作用。
- 杨国锋王鲁宁纪建国何思志朱明伟王青松
- 关键词：蛋白质组电泳凝胶
- APP转基因小鼠与正常小鼠脑蛋白质组双向电泳图谱的比较
- 2005年
- 目的探讨APP转基因小鼠与正常C57小鼠脑蛋白质组双向电泳(2-DE)图谱差异,从蛋白质水平初步探索老年性痴呆发病机制。方法APP转基因小鼠与正常C57小鼠脑组织经蛋白提取后,分别以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行2-DE。图像分析软件ImageMaster 2D Elite分析电泳图谱。结果APP转基因小鼠与正常小鼠脑组织2-DE图谱分别检测出976和947个蛋白点。对两张电泳图进行匹配后,发现有16个蛋白点仅在APP转基因小鼠脑蛋白2-DE图谱检测到表达,而有7个蛋白点只在正常小鼠检测到。部分蛋白在2组小鼠脑组织中含量发生了明显变化。结论差异点的发现初步建立了差异表达蛋白质组学的技术方法;为研究阿尔茨海默病机制及研发新药提供了有益的线索。
- 杨国锋王鲁宁朱明伟何思志
- 关键词：淀粉样Β蛋白电泳蛋白质组
- 银杏叶提取物对海马注射淀粉样β蛋白致阿尔茨海默病大鼠模型神经元凋亡的保护作用被引量：6
- 2006年
- 目的:观察具有神经保护作用的银杏叶提取物对海马注射淀粉样β蛋白的阿尔茨海默病模型大鼠神经元凋亡的影响。方法:实验于2002-03/2003-10在河北医科大学第二医院、解放军总医院老年医学研究所、北京大学蛋白质工程国家重点实验室完成。取清洁级成年雌性SD大鼠共30只,随机分为3组,各10只。其中两组大鼠以淀粉样β蛋白25～353μL(4g/L)注射于海马齿状回,10只于当日起给予银杏叶提取物(购自德国威玛舒培博士药厂)2mL腹腔注射,连续7d,为银杏叶提取物组;10只以等量生理盐水腹腔注射7d,为淀粉样β蛋白组;另外10只动物以生理盐水3μL注射于海马齿状回,为对照组;行脱氧核苷酰转移酶法亦即脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记和免疫组化染色(Bcl-2和Bax)及双向凝胶电泳观察。结果:30只动物全部进入结果分析,无脱失。①淀粉样β蛋白组及银杏叶提取物组神经元均有凋亡发生。其细胞核被染成棕黄色。典型的凋亡细胞表现为染色质凝集,呈新月形聚集于核膜下。由于切面的不同,凝集的染色质可以不同形态散在于核切面的任意位置,有的以圆形位于核膜下,有的位于核中央,但不象坏死那样边界不清,呈絮状。细胞内有棕黄色粗颗粒分布或棕黄色细腻颗粒弥漫分布者为Bcl-2或bax阳性反应细胞。②淀粉样β蛋白组神经元凋亡率高于银杏叶提取物组(55%,21%);淀粉样β蛋白组Bcl-2反应阳性细胞率低于银杏叶提取物组(15%,47%);淀粉样β蛋白组Bax反应阳性细胞率高于银杏叶提取物组(49%,17%)。③通过分析比较得到的双向凝胶电泳图谱,淀粉样β蛋白组与对照组比较,有26个蛋白质点的体积百分含量发生显著性变化(P<0.05)。而在银杏叶提取物组上述26个发生变化的蛋白点有11个出现回调。结论:银杏叶提取物可使海马注射淀粉样β蛋白组对发生变化的蛋白点回调,对大鼠神经�
- 杨国锋姚建华彭立威何思志纪建国李冬梅于东华
- 关键词：淀粉样Β蛋白脱噬作用
- 脑蛋白质氧化修饰与磷酸化修饰的初步研究
- 脑蛋白质及其修饰鉴定对于深入理解脑的结构功能及其病理变化具有重要的意义。本研究针对不同发育阶段的脑组织利用蛋白质组技术进行了初步研究。
(1)脑蛋白质样品处理方法研究：样品处理是进行蛋白质组研究的关键。脑组织结...
- 何思志
- 关键词：氧化修饰磷酸化修饰质谱鉴定神经退行性疾病
- Pick病的蛋白质组研究被引量：4
- 2006年
- 目的为深入理解P ick病分子机制并寻找诊断治疗该疾病的蛋白质标记物,选取3例经病理证实的P ick病患者与4例正常老年人尸检脑标本进行蛋白质组学研究。方法死亡24 h内新鲜取材的尸检额叶、颞叶蛋白质以固相pH梯度等电聚焦为第一向,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)为第二向进行双向电泳(2-DE),图像分析软件Im age M aster 2D E lite分析电泳图谱,基质辅助激光解析/电离-飞行时间(MALD I-TOF)质谱或MALD I-TOF/TOF串联质谱鉴定蛋白质。结果15种蛋白质的表达量在P ick病患者与正常老年人显著不同。8个在P ick病表达量上调的蛋白质被鉴定为热休克蛋白60、Mn超氧化物歧化酶、α-烯醇化酶、3-磷酸甘油醛脱氢酶、胶质纤维酸性蛋白、硫氧还蛋白过氧化物酶1、RNA结合蛋白调节亚基、P25;α7个在P ick病表达量下调的蛋白质被鉴定为peroxiredoxin 5、cofilin、铁蛋白H链、血清白蛋白前体、二氢嘧啶酶相关蛋白2、丙酮酸激酶、碳酰还原酶[NADPH]1。结论氧自由基与抗氧化蛋白的平衡受损及重要代谢酶、神经原纤维缠结相关蛋白的变化同P ick病发病密切相关。
- 杨国锋王鲁宁何思志纪建国姚建华彭立威
- 关键词：蛋白质组学
- 蛋白质组学技术分离及鉴定人脑氧化蛋白质被引量：2
- 2011年
- 背景:氧化修饰蛋白质在脑老化及阿尔茨海默病等老年变性神经病的发病机制中扮演着重要角色。蛋白质组学技术可以发现氧化修饰蛋白质,为相关疾病的药物治疗选择新的靶标。目的:建立以双向电泳结合Western blot及生物质谱技术分离、鉴定人脑氧化修饰蛋白质的方法。方法:取3个无神经系统疾患的男性脑组织蛋白,第一向等电聚焦电泳后,固相pH梯度胶条同二硝基苯肼反应,然后行第二向SDS-PAGE电泳。2张相同凝胶中的1张行考马斯亮蓝染色,另1张凝胶上免疫荧光显色。同PVDF膜上显色点相对应的考染凝胶上的蛋白质点即为氧化修饰蛋白质。凝胶蛋白胶内酶解,基质辅助激光解析飞行时间串联质谱鉴定氧化修饰蛋白质。结果与结论:从提取的脑组织中鉴定出β-肌动蛋白、天冬氨酸氨基转移酶、果糖二磷酸醛缩酶、磷酸甘油酸激酶、1,3-磷酸甘油醛脱氢酶、碳酰还原酶1、磷酸丙糖异构酶、转酮醇酶、丙酮酸激酶、血清白蛋白前体、二氢嘧啶酶相关蛋白质2、热休克蛋白60为氧化修饰蛋白质。说明实验成功建立了用蛋白质组学技术分离及鉴定人脑氧化蛋白质的方法。
- 杨国锋纪建国彭立威何思志
- 关键词：蛋白质组双向电泳质谱
- 人小脑与额叶的比较蛋白质组学分析被引量：5
- 2005年
- 目的对小脑及额叶进行比较蛋白质组学研究以探讨其对变性损伤敏感性不同的原因。方法死亡24h内新鲜取材尸检小脑及额叶组织,经提取蛋白质,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2DE),图像分析软件分析电泳图谱,MALDI TOF质谱或MALDI TOF/TOF串联质谱鉴定蛋白质。结果发现3个蛋白质点在小脑表达量增加,7个蛋白质点在额叶表达量增加。以质谱鉴定了3个小脑中表达量增加的蛋白质点分别为抗氧化蛋白2、肌酸激酶前体(线粒体)和果糖二磷酸醛缩酶C,2个在额叶增加的蛋白质点为胶质纤维酸性蛋白、丙酮酸激酶。30个表达量在额叶及小脑没有显著变化的蛋白质点通过MALDI TOFMS/TOFTOF MSMS和蛋白质数据库检索得到鉴定。结论本研究结果进一步丰富了人脑蛋白质组数据库。额叶与小脑的差异表达蛋白质为深入理解脑老化及变性痴呆分子机制提供了有益的线索。
- 王鲁宁杨国锋何思志纪建国朱明伟王青松
- 关键词：比较蛋白质组额叶小脑固相PH梯度果糖二磷酸
