何侃
- 作品数：6 被引量：13H指数：1
- 供职机构：吉林大学生命科学学院分子酶学工程教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人Bid蛋白的原核表达及纯化
- 2009年
- 目的克隆人Bid基因,原核表达并纯化目的蛋白。方法用PCR方法从HeLa细胞cDNA文库中扩增人Bid基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-Bid,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化。结果PCR扩增得到588bp的DNA片段,重组表达质粒pGEX-6P-1-Bid经双酶切鉴定和测序表明构建正确。表达的目的蛋白相对分子质量约48000,表达量约占菌体总蛋白的50%,纯化后纯度可达97%。结论已成功克隆并原核表达了人Bid基因,得到纯度较高的Bid蛋白,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。
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- 关键词：克隆原核表达纯化
- 人Bik基因的克隆、表达与纯化
- 2008年
- 目的克隆人Bik基因,并进行表达及纯化。方法用PCR方法从HeLa细胞cDNA文库中扩增Bik基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物进行GST亲和层析纯化。结果PCR扩增得到483bp的DNA片段,重组质粒pGEX-6p-1-Bik经酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。表达的重组蛋白占菌体总蛋白的38%,纯化后蛋白纯度达96%。结论已成功克隆并利用原核表达系统表达了人Bik基因,为进一步研究Bik蛋白结构和功能奠定了基础。
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- 关键词：克隆原核表达纯化
- Cyclin A-Cdk2对B细胞成熟因子的体外磷酸化作用
- 2008年
- 目的原核表达并纯化仅含BH3结构域的细胞凋亡调控蛋白BMF,并进行CyclinA-Cdk2特异性底物的体外磷酸化检测。方法从HeLa细胞中扩增人源BMF基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose 4B凝胶柱亲和层析纯化。以纯化的融合蛋白GST-BMF作为底物,免疫共沉淀得到的CyclinA-Cdk2作为酶源,并以Cdk2的已知底物HistoneH1作为阳性对照,进行体外磷酸化试验。结果BMF基因的原核表达载体构建正确,表达的融合蛋白GST-BMF约占菌体总蛋白的40%,纯化后纯度约为90%。在体外磷酸化试验中,未出现与目的蛋白GST-BMF相对分子质量相近的放射自显影带。结论BMF蛋白在无细胞体系中不能被CyclinA-Cdk2磷酸化。
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- 关键词：凋亡CYCLIN
- 重组人Stathmin基因的克隆及表达
- 2006年
- 目的克隆人Stathmin基因,并利用原核细胞进行表达。方法用PCR方法从Hela细胞cDNA文库中扩增Stathmin基因,PCR产物经TA克隆并测序后,克隆至pGEX-4T-1载体,并转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定。结果PCR扩增得到460bp的cDNA片段,经测序分析,与GenBank数据库报道的人Stathmin(NM_203401)序列一致,经SDS-PAGE和Westernblot证实诱导表达的蛋白为GST融合蛋白。结论利用原核表达系统表达了人Stathmin,为进一步研究Stathmin结构和功能奠定了基础。
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- 关键词：STATHMIN克隆原核表达
- 人BimS蛋白的原核表达及纯化
- 2009年
- 目的克隆人BimS基因,原核表达并纯化目的蛋白。方法用PCR方法从HeLa细胞cDNA文库中扩增人BimS基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化。结果PCR扩增得到327bp的DNA片段,重组表达质粒pGEX-6P-1-BimS经双酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。表达的目的蛋白相对分子质量约37000,表达量约占菌体总蛋白的30%,纯化后纯度可达93%。结论已成功克隆并原核表达了人BimS基因,得到纯度较高的BimS蛋白,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。
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- 关键词：原核表达纯化
- 人参皂苷Rh2诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究被引量：13
- 2008年
- 目的研究人参皂苷Rh2(G-Rh2)对人胃癌细胞SGC-7901的影响。方法采用MTT法检测G-Rh2对SGC-7901细胞存活率的影响;流式细胞分析法检测凋亡小体的含量;免疫印迹技术及体外Caspase-3/-7活力测定方法检测Caspase的激活状态。结果G-Rh2对SGC-7901细胞生长有明显的抑制作用,且呈量-效关系,IC50为9.3μg/ml。7.5μg/mlG-Rh2作用SGC-7901细胞24h,凋亡细胞数量为6.97%。7.5μg/mlG-Rh2作用SGC-7901细胞20h,出现多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]断裂,Caspase-3/-7活力开始出现,并随作用时间的延长而增强。结论G-Rh2诱导Caspase参与SGC-7901细胞凋亡。
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- 关键词：人参皂苷RH2胃癌凋亡
