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gcm蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备: 2013年; gcm(glial cells missing)是调控神经元细胞和神经胶质细胞相互转化的一个基因开关.在gcm功能缺损的突变体中,预期的神经胶质细胞发育成神经元细胞;而在gcm过表达的突变体中,预期的神经元细胞转化为神经胶质细胞.此外,gcm还调控血浆细胞发育.为了进一步研究gcm在发育中的功能,需要获得gcm蛋白并制备其抗体.根据已报道的gcm基因序列,以果蝇cDNA文库为模板进行PCR扩增得到gcm部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a载体以获得原核表达载体.重组载体经酶切测序鉴定确认后,转化大肠杆菌(E.coli)BL21,并用IPTG诱导融合蛋白表达.采用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化蛋白,将纯化的His-gcm融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体效价.获得的gcm原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗gcm多克隆抗体,为gcm功能的进一步研究奠定了基础.; 赵阳彭佩莹王静周英张义唐超任恋彭夕洋陈思行李永青吴秀山; 关键词：GCM 融合蛋白多克隆抗体

斑马鱼ISL1蛋白多克隆抗体的制备被引量：1: 2013年; 目的为了进一步研究ISL1作为第二生心区心脏前体细胞的分子标志在心脏发育中的功能,需要获得ISL1蛋白并制备其抗体。方法根据已报道的ISL1基因序列,以斑马鱼mRNA为模板进行PCR扩增得到ISL1部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达载体。将重组质粒进行酶切测序鉴定,然后利用大肠杆菌E.coli BL21对该重组质粒进行表达。经过IPTG诱导,采用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的his-ISL1融合蛋白免疫新西兰大白兔制备ISL1多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体效价。结果获得了ISL1原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗ISL1多克隆抗体。结论本实验为ISL1在斑马鱼心脏发育中的新功能的进一步研究奠定了基础。; 任恋唐超刘宪楚李容戴悦彭佩莹莫小阳; 关键词：斑马鱼融合蛋白多克隆抗体

H1N1流感病毒感染心肌细胞对Wnt信号途径的影响: 为了揭示流感病毒H1N1通过Wnt信号调控心肌炎发生的致病机制,我们建立了A/PuertoRico/8/34(H1N1)流感病毒感染H9C2细胞模型,采用灭活的病毒感染H9C2细胞系作为对照组,通过细胞组织学形态和RT-...; 刘宪楚陈则吴秀山莫小阳唐超任恋李容史艳江志钢常海燕方芳李永青

果蝇Bves蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备: 2013年; 目的为了进一步研究细胞粘附分子Bves在肿瘤的发生及转移过程中的作用,需要获得Bves蛋白并制备其抗体。方法根据Flybase网站所提供的Bves基因序列,以果蝇的总RNA为模板进行PCR扩增,得到Bves部分编码序列,随后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达载体。重组表达质粒经酶切测序鉴定后,转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,并用IPTG诱导融合蛋白的表达,使用活化的Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化后得到的His-Bves融合蛋白免疫注射新西兰大白兔制备Bves多克隆抗体,并用Western blot对抗体效价进行检测。结果和结论获得了Bves原核表达重组融合蛋白及高效价的兔抗Bves多克隆抗体,为后期深入研究Bves基因的功能奠定了基础。; 彭佩莹赵阳王静周英郝建军曾群陈思行任恋戴悦袁婺洲吴秀山邓云戴国; 关键词：果蝇融合蛋白多克隆抗体

果蝇Domeless蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备研究: 2013年; 在果蝇(Drosophila melanogaster)的研究中发现Domeless接受器参与发育期间的JAK/STAT信号调节,在心脏疾病的发生机制中发挥重要作用.为了克隆Domeless,我们利用生物信息学选择果蝇Domeless基因抗原亲水区,将扩增出的PCR片段克隆到原核表达pET-28a载体中,转入E.coli(Escherichia coli)中后通过IPTG(Isopropylβ-D-thiogalactoside)诱导融合蛋白表达,Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,纯化后的His-Domeless融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.用Western blot检测抗体的效价和特异性.获得了Domeless原核表达重组融合蛋白以及高效价的、特异性兔抗Domeless多克隆抗体,为后续Domeless功能研究奠定了基础.; 唐超任恋刘宪楚李容江志钢赵阳廖四芳袁佳佳莫小阳吴秀山; 关键词：果蝇原核表达多克隆抗体

果蝇EF-1α蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1: 2013年; 为进一步研究延长因子-1(elongation factor-1α,EF-1α)在调控心脏发育和果蝇心脏功能中发挥的作用,制备延长因子-1的抗体.利用生物信息学选择果蝇EF-1α基因抗原亲水区,并设计出特异性引物,PCR扩增出的片段克隆到原核表达pET-28a载体中,转入E.coli中后通过IPTG诱导融合蛋白表达,将His-EF-1α融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,再用Western Blot检测抗体的效价和特异性.研究结果表明,获得了EF-1α原核表达重组融合蛋白以及高效价的、特异性兔抗EF-1α多克隆抗体.EF-1α多克隆抗体的效价可以达到1比1500,并且有很强的特异性,为后续研究EF-1α基因在心脏发育和心脏功能中的作用奠定了基础.; 戴悦任恋彭佩莹王盼盼袁婺洲吴秀山; 关键词：果蝇原核表达多克隆抗体

组蛋白去乙酰化酶在调节心肌肥大过程中的作用机制被引量：3: 2020年; 心肌肥大(cardiac hypertrophy)是由外周组织对血流动力学需求增加而发生的一种代偿性反应。在心肌肥大过程中,不同时期的不同类型的基因表达受到生理和病理信号的多级转录调控。组蛋白乙酰化作为最广泛的翻译后修饰方式,受相互拮抗的组蛋白乙酰化酶(histone acetyltransferases,HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)的精细控制。近年来研究表明,HDACs作为一类抑制转录过程并含有高度保守的脱乙酰酶结构域家族酶,通过多种作用途径调控心肌肥大过程中的基因表达。本文主要综述了组蛋白去乙酰化酶调节心肌肥大过程的相关研究进展,通过阐明不同种类HDACs在心肌肥大中的作用和分子机制,为不同类型心肌肥大和心衰的发病治疗提供新的思路,为新药设计提供分子靶点。; 任恋吴秀山李永青; 关键词：心肌肥大转录调控翻译后修饰组蛋白去乙酰化酶分子机制

利用切片免疫荧光技术研究Tbx5在小鼠胚胎心脏中的表达: 2014年; Tbx5参与转录因子的调控,对上肢及心脏发育起关键作用.通过对小鼠胚胎心脏组织切片厚度的选择、加入抗原修复液等试验条件的优化,建立了利用切片免疫荧光技术检测小鼠胚胎心脏中Tbx5的方法.结果显示,在胚胎发育的第11.5 d,Tbx5在整个心脏中都有表达,尤其在心房以及左心室中高表达.但在胚胎发育的第13.5 d,Tbx5只在心房和左心室中表达,在右心室中并不表达.揭示Tbx5的这种动态表达模式对于心脏的发育以及腔室分化是十分重要的.; 李容刘宪楚史艳周万邦曹灵慧李海文谭智勇唐超任恋吴秀山莫小阳; 关键词：胚胎心脏

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任恋